Hieff Canace? II High-Fidelity DNA Polymerase
Hieff Canace? II高保真DNA聚合酶
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff Canace?Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase Hieff Canace?Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase | 10140ES60 10140ES76 | 100 U 500 U | 653.00 2453.00 |
产品描述
Hieff Canace? II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。该酶主要为NGS文库扩增所设计，克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias，同时扩增效率比第一代的Canace高1.5倍，文库扩增产量大幅增加。本产品配备单独的buffer，并增加了特殊的扩增促进剂，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性。此产品与我公司文库扩增模块2×Super Canace? II High-Fidelity Mix for Library Amplification (Cat#12621)所用酶原料一致。
产品组分
编号 | 组分 | 规格 |
10140ES60（100 U） | 10140ES76（500 U） |
10140-A | Hieff Canace? II High-Fidelity DNA Polymerase（1 U/μL） | 100 μL | 500 μL |
10140-B | 2×Canace? II PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 1 mL×3 | 1 mL×15 |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA –Hind III，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存，有效期2年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
使用方法
在使用前，请务必仔细阅读使用说明。
1、PCR反应体系（推荐冰上配制）
表1 PCR扩增反应体系
组分 | 体积 |
ddH2O | to 50 μL |
2×Canace?Ⅱ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 μL |
模板或接头连接产物 | X |
NGS Primer 1 (10-25 μM) | X μL |
NGS Primer 2 (10~25 μM) | X μL |
Hieff Canace?Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) | 1 μL |
【注】： 1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀；
2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化；
3）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索；
4）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
2、PCR扩增程序
表2 PCR扩增反应程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98°C | 1 min | 1 |
变性 | 98°C | 10 sec | 1~15（根据实验要求） |
退火 | 60°C | 30 sec |
延伸 | 72°C | 30 sec |
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
Hold | 4°C | Hold | - |
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产品名称 | 产品货号 | 规格 | 价格（元） |
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HB181206