T4 RNA Ligase 1 T4 RNA连接酶1
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
T4 RNA Ligase 1 T4 RNA连接酶1 | 11068ES80 | 1000 U | -20℃ | 565.00 |
T4 RNA Ligase 1 T4 RNA连接酶1 | 11068ES92 | 10000 U | -20℃ | 3465.00 |
产品描述
T4 RNA连接酶1是一种ATP依赖的、可催化ssRNA、ssDNA或单核苷酸分子之间或分子内5＇磷酸末端和3＇羟基末端形成磷酸二酯键的酶，该过程中ATP水解为AMP和PPi。本品来源于携带T4 RNA连接酶1基因的E.coli菌株。
产品应用
1. RNA 3＇-末端标记
2. ssRNA和ssDNA分子内或分子间的连接
3. 合成单链寡脱氧核苷酸
4. RNA环化
产品组分
类别 | 编号 | 组分 | 产品编码/规格 | 储存 |
11068ES80（1000 U） | 11068ES92（10000 U） |
Part Ⅰ | 11068-A | T4 RNA Ligase (10 U/μL) | 100 μL | 1 mL | -20℃ |
Part Ⅱ | 11068-B | 10× T4 RNA Ligase Reaction Buffer | 300 μL | 3 mL | -20℃或-80℃ |
11068-C | ATP (10 mM) | 50 μL | 500 μL |
11068-D | 50% PEG 8000 | 500 μL | 5 mL |
运输方法
冰袋运输。
保存方法
1. 试剂Part Ⅰ：-20℃保存，避免反复冻融。
2. 试剂Part Ⅱ：-20℃保存，1个月。-80℃，长期保存。避免反复冻融。
单位定义
37℃条件下，30 min内将1 nmol的5＇-[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量为1个酶活单位。
注意事项
可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如RNase inhibitor (Yeasen，Cat No.10603)。
操作方法
一、用于RNA环化
1.配制反应体系（20 μL反应体系）
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。
组分 | 加入量（μL） | 终浓度 |
10× T4 RNA Ligase Reaction Buffer | 2 | 1× |
50% PEG 8000 | 4 | 10% |
ATP (10 mM) | 0.04-0.1 | 20-50 μM |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 0.5 | 1 U/μL |
RNA | - | 10 μM |
T4 RNA Ligase (10 U/μL) | 1 | 0.5 U/μL |
Nuclease-free water | Up to 20 | - |
【注】：1）试剂使用：使用前充分解冻混匀。
2）T4 RNA连接酶添加：建议在最后一步加到反应体系中。
2.反应程序
1）孵育：25℃ 1-2 h。如果是更长的寡核苷酸，16℃过夜可以增加产量。
2）终止反应：95℃ 2 min或65℃ 15 min。
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