HB180417
HieffTM Quick exosome isolation kit（for Serum/Plasma）
血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
HieffTM Quick exosome isolation kit（for Serum/Plasma） 血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒 | 41202ES08 | 5 mL | 室温 | 试用装 |
41202ES30 | 30 mL | 室温 | 2155.00 |
产品描述
Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。
本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
41202-A | Exosome isolation solution（ Serum/Plasma） | 41202ES30/30 mL |
运输和保存方法
室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。
注意事项
1、使用前请将外泌体抽提试剂（41202-A）充分混匀。
2、产品只针对血清/血浆样本，不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，
请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。
3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法
样品预处理：
1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。
2、取1 mL血清/血液样品转移至离心管中，4℃，3000×g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。
3、将转移的上清，4℃，10,000×g离心20 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。
外泌体分离：
1、向预处理后的样品中，加入4倍体积的1×PBS充分混匀。
Serum/Plasma+PBS | 41202-A试剂用量 |
200 μL+800 μL | 200 μL |
1.0 mL+4.0 mL | 1.0 mL |
2、在PBS稀释后的样品中，继续加入相应量的41202-A试剂；盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。
3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。
4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。
【注】加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=2.5:1。
5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。
【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤4，重新进行洗涤和沉淀。
6、纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。
外泌体纯化（可选）：
鉴于血清/血浆中杂蛋白较多，如果后续需要进行细胞共培养或者高通量测序，建议进行进一步纯化。可以使用密理博100kD的孔径的超滤管于4℃以14,000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒；除此之外，还可以使用抗体包被的磁珠进行亲和纯化。
外泌体除菌（可选）：
获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。
效果展示
NTA粒径检测：结果显示通过Yeasen外泌体抽提获得的外泌体分散性好，大小均一，峰形单一。 |
 | 样品来源：血液 检测仪器：ZetaView 上清用量：200μL |
表面标志物分析：通过Western Blot分析外泌体表面蛋白，可以很好的检测到TSG101，CD63和MHCC的存在。 |
| 样品来源：血液 裂解方式：RIPA裂解液 样品用量：200 μL |
核酸分析：通过Agilent 4200分析，可以检测到较为明显的外泌体小RNA条带，足以满足下游高通量测序的需求。 |
| 样品来源：血液 检测仪器：Agilent 4200 抽提方法：Trizol 样品用量：0.6 mL |
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