Picogreen dsDNA Quantitation Reagent
双链DNA（dsDNA）定量试剂
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNA（dsDNA）定量试剂 | 12641ES01 | 1Kit (100 μL) | 515.00 |
12641ES02 | 1Kit (5×100 μL) | 2115.00 |
12641ES03 | 1Kit (10×100 μL) | 3845.00 |
12641ES04 | 1Kit (1×1 mL) | 3765.00 |
产品描述
Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，其仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，因而可用于精确测量多个来源的dsDNA，包括基因组DNA、病毒DNA、PCR扩增产物、测序文库等。
本产品Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：可检测低至200 pg的dsDNA，节省宝贵样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
运输和保存方法
室温运输。
4℃避光干燥保存，有效期6个月。
注意事项
1）Picogreen定量试剂含有DMSO（已知有毒试剂），请小心操作；
2）尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链DNA，请操作时务必小心；
3）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。
应用实例
【注】：本方法参照2010《中国药典》进行操作。
1、染料工作液的配置
PicoGreen dsDNA定量试剂取出后回温至室温，该试剂是以100 μL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的。实验当天，根据实验用量用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200 的比例稀释PicoGreen浓缩液。如，要准备足够的操作溶液测定20个样品，可在19.9 mL1×TE 中加入100 μL PicoGreen dsDNA 定量试剂。
【注】：1）由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
2）PicoGreen试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。
3）溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
2、标准品工作液的配制
取λDNA标准品，用无菌TE buffer配制成100 μg/mL的标准品工作液。
【注】：标准品也可用其他已知浓度的纯化DNA；有一些产品描述可使用小牛胸腺DNA作为标准品，按照我们实际操作经验，并不推荐它作为标准品。
3、标准品工作液稀释
1）母液稀释：使用TE缓冲液将100 μg/mL的标准品稀释为2 μg/mL。
2）梯度稀释：参照表1，对DNA标品母液进行梯度稀释。
表1 标曲制作
TE体积（μL） | 2 μg∕mL DNA标准品母液（μL） | Picogreen染料工作液（μL） | DNA标准品终浓度 |
0 | 1000 | 1000 | 1 μg/mL |
900 | 100 | 1000 | 100 ng/mL |
990 | 10 | 1000 | 10 ng/mL |
999 | 1 | 1000 | 1 ng/mL |
1000 | 0 | 1000 | Blank |
3）标准曲线的制备：向经稀释的各梯度标准品溶液中加入1 mL染料工作液混匀，避光室温孵育5 min。使用酶标仪或荧光计检测荧光强度（Ex=480 nm，Em=520 nm）：将溶液加入比色皿或取200 μL加入微孔板，确信不要在样品中引入气泡；以1×TE缓冲液空白对照，测定标准品荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/mL）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
4）测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA浓度的标准曲线。
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