HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR
(gDNA digester plus)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES50 | 50 T | -20℃ | 686.00 |
HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES70 | 200 T | -20℃ | 1926.00 |
产品描述
HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。与HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
该预混液包含gDNA digester和2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分（Buffer，dNTP，HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR?Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择UNICONTM qPCR SYBR? Green Master Mix，HieffTM qPCR SYBR? Green Master Mix或HieffTM qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
11123ES50 (50 T) | 11123ES70 (200 T) |
11123-A | RNase-free ddH2O | 1 mL | 2×1.2 mL |
11123-B | 5×gDNA digester Buffer | 100 μL | 400 μL |
11123-C | gDNA digester | 50 μL | 200 μL |
11123-D | 2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus | 500 μL | 2×1 mL |
【注】：2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。
产品应用
适用于两步法RT-qPCR。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
第一链cDNA合成操作步骤
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | To 10 μL |
5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
gDNA digester | 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。
组分 | 使用量 |
第1步的反应液 | 10 μL |
2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus | 10 μL |
3.逆转录程序设置
标准程序（可获得高质量的cDNA）
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
或快速程序（适用于大多数RT-qPCR实验）
【注】：逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
※ 逆转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
注意事项
1）gDNA digester和2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取；
2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；
3）可以不经过基因组去除步骤，直接用2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×HifairTM Ⅱ SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验；
4）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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