产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff? Taq DNA Polymerase DNA聚合酶 | 10101ES80 | 1000 U | 155.00 |
Hieff? Taq DNA Polymerase DNA聚合酶 | 10101ES90 | 5×1000 U | 735.00 |
产品描述
Hieff? Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶，分子量为94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3′-dA，可直接用于TA克隆。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
10101ES80（1000U） | 10101ES90（5×1000U） |
10101-A | 10×Taq Buffer (Mg2+ Free) | 4×1 mL | 20×1 mL |
10101-B | 25 mM MgCl2 | 2×1 mL | 10×1 mL |
10101-C | Hieff? Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 200 μL | 5×200 μL |
产品应用
基因型鉴定、菌落PCR等常规PCR。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL反应TX，10U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ，74℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL反应TX，10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA，74℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μLTX中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
PCR反应TX（冰上配制）
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
ddH2O | to 50 | - |
10×Taq Buffer(Mg2+ Free) | 5 | 1× |
25 mM MgCl2 | 3 | 1.5 mM |
dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL | 0.2 mM |
模板DNA | optional | - |
引物1(10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
引物2(10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
Hieff? Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.4 μL | 0.04 U/μL |
【注】：
1）Mg2+ 终浓度：Mg2+浓度为1.5-2 mM，如有需要，可0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+使用浓度。
2）聚合酶添加：室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，为了防止非特异性扩增，建议将聚合酶在一步加到反应tixi中。
3）聚合酶浓度：推荐使用0.04 U/μL。可以在0.025-0.04 U/ μL之间进行优化。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应tixi）：
模板种类 | 扩增片段 |
基因组DNA | 50 ng～100 ng |
质粒DNA | 10 pg～20 ng |
cDNA | 1~5 μL（不超过反应TX的1/10） |
PCR扩增程序
循环步骤 | 温度（oC） | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94 | 30 sec-5 min | 1 |
变性 | 94 | 30 sec | 35 |
退火 | 50-60 | 30 sec |
延伸 | 72 | 60 sec/kb |
终延伸 | 72 | 10 min | 1 |
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐使用94℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
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