HieffCanaceTMHigh-Fidelity DNA PolymeraseHieffCanaceTM
高保真DNA聚合酶
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff Canace? High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES10 | 10 U | 96.00 |
Hieff Canace? High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES60 | 100 U | 626.00 |
Hieff Canace? High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES76 | 500 U | 2356.00 |
Hieff Canace? High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES80 | 1000 U | 4256.00 |
产品描述
Hieff Canace? High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子，扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编码/规格 |
10135ES10 （10 U） | 10135ES60 （100 U） | 10135ES76 （500 U） | 10135ES80 （1000 U） |
10135-A | Hieff Canace? High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μL） | 5 μL | 50 μL | 250 μL | 2×250 μL |
10135-B | 2×Canace? PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 300 μL | 3×1 mL | 15×1 mL | 30×1 mL |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL反应体χ，10 U本品和1 μg λDNA –Hind III，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL反应体χ，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体χ中，加入2 U本品，以无菌H2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
PCR反应体χ（推荐冰上配制）
组分 | 体积 | 终浓度 |
H2O | to 50 μL | - |
2×Canace? PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 μL | 1× |
DNA模板 | 适量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Hieff Canace? High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) | 0.5 μL | 1 U/50 μL |
【注】：
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最一步加到反应体χ中。
4）Mg2+终浓度：体χ终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
5）高GC模板：在体χ中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
6）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体χ）：
模板种类 | 扩增片段1 kb-20 kb |
基因组DNA | 50 ng-200 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10) |
PCR扩增程序
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 0.5-3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec |
延伸 | 72℃ | 15-30 sec/kb |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15 sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb，根据实际情况可延长至40 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。
应用实例
图1： Hieff Canace? 高保真DNA聚合酶扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板：拟南芥基因组DNA，50 ng/50 μL；退火温度：60℃；延伸时间：30 sec/kb。M：1 kb ladder；1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。
相关产品
产品名称 | 货号 | 规格 |
2×Hieff Canace? PCR Master Mix高保真酶预混液HOT | 10136ES03/08/25 | 1/5/25 mL |
零背景TOPO-TA克隆试剂盒HOT | 10907ES20 | 20 T |
零背景TOPO-TA克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点） | 10908ES20 | 20 T |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT | 10909ES20 | 20 T |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点） | 10910ES20 | 20 T |
一步法快速克隆试剂盒HOT | 10911ES25/62 | 25/5×25 T |
多片段一步法快速克隆试剂盒HOT | 10912ES10/50 | 10/5×10 T |
定点突变试剂盒HOT | 11003ES10 | 10 T |
多点突变试剂盒HOT | 11004ES10 | 10 T |
HB210701