Hieff NGS? DNA Selection Beads (Superior AMPure XP Alternative)
DNA分选磁珠(完美替代AMPure XP Beads)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff NGS? DNA Selection Beads DNA分选磁珠 | 12601ES03 | 1 mL | 296.00 |
12601ES08 | 5 mL | 986.00 |
12601ES56 | 60 mL | 6286.00 |
12601ES75 | 450 mL | 26186.00 |
产品描述
Hieff NGS? DNA Selection Beads基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理,配合精心优化过的缓冲体系,可用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选、纯化。本产品可适用于各品牌的DNA、RNA建库试剂盒,和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同,片段回收效率和文库大小分布均与AMPure XP Beads高度吻合。
运输与保存方法
冰袋运输。
2-8℃保存,有效期一年。避免冷冻!
注意事项
1)磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。
2)80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。
3)进行长度分选时,初始样品体积需≥100 μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小,将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 准备工作
将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2. 长度分选(双轮法)
长度分选操作流程如图1所示,具体操作如下。
图1双轮分选操作流程
1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。
2)根据要求,参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。
3)室温孵育5 min。
4)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心转移上清到干净的离心管中。
注意:转移上清时,请残留2 μL液体于管底,切勿全部吸出上清,避免吸到磁珠并影响分选效果。
举例:当初始体积为100 μL,第一轮使用0.8×比例,即加入80 μL磁珠,推荐吸出178 μL的上清。
5)参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠。
6)涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置5 min。
7)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。
8)保持离心管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,小心移除上清。
9)重复步骤8。
10)保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(约5 min)。
注意:切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。
11)将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O(≥20 μL),涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温孵育5 min。
12)将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后(约5 min),小心吸取上清至干净的管中,即完成分选。
3. DNA片段分选参考条件
通过超声法将小牛胸腺DNA进行片段化,制备100-1000 bp的Smear片段,根据表1进行双轮分选。结果使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析(图2)。
表1磁珠文库分选推荐比例
DNA片段大小 | 250-350 bp | 350-450 bp | 450-550 bp | 550-650 bp | 650-750 bp | 750-850 bp |
第一轮体积比(Beads:DNA) | 0.80× | 0.70× | 0.60× | 0.55× | 0.50× | 0.45× |
第二轮体积比(Beads:DNA) | 0.20× | 0.20× | 0.20× | 0.15× | 0.15× | 0.15× |
注:表中“×”表示样品DNA体积。如DNA片段大小为300 bp,样品DNA体积为100 mL,则第一轮分选磁珠使用体积为0.80×100 mL=80 mL;第二轮分选磁珠使用体积为0.20×100 mL=20 mL。
图2 Agilent 2100 high sensitivity DNA chip electopherogram
Smear fragments溶于ddH2O,使用0.80×/0.20×至0.45×/0.15×磁珠进行片段分选
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