产品描述:
pNovoSumo专为目标蛋白在大肠杆菌中可溶性表达设计,是预先用Xho I线性化的载体,可配合NovoRec? PCR产物一步无缝克隆试剂盒(CatNo. NR001)使用。
外源蛋白在大肠杆菌中表达容易形成包涵体,使获得有生物学活性的蛋白增加困难。常见表达载体往往由于蛋白表达过快,目标蛋白来不及正确折叠而形成包涵体。该质粒使用于阿拉伯糖诱导,有较强 的剂量依赖性。合适的阿拉伯糖浓度能够在保障表达效率的同时获得高效的可溶蛋白。SUMO融合标签可有效促进目标蛋白的正确折叠,从而提高蛋白质的可溶性,同时SUMO Protease(CatNo. PE002)是一种 结构特异性的蛋白酶,只切割有正确构象的融合蛋白,因而准确移除 融合标签。
目的基因扩增按常规方法设计引物后,在5′端引物前添加以下序 列:GAA CAG ATT GGA GGT ATG; 3′端引物前添加:CGC GGC CGC AAG CTT。注意:5′端引物从第一个氨基酸不是甲硫氨酸(ATG)时,可使用 GAA CAG ATT GGA GGT。不希望目标蛋白C端保留His Tag时,3′端引物 需要加入终止密码子。
图例一)pNovoSumo融合蛋白表达。诱导前后显示明显的目标蛋白质表达。
pBAD promoter | 3-277 |
SUMO fusion tag | 319-642 |
rrnB Terminator | 711-1136 |
Amp resistance | 1229 - 2 |
pBR322 ori | 2234 -29 |
AraC CDS | 3438-4340 |