产品描述:
KOF DNA Polymerase 是一种经过基因工程改造的高保真DNA聚合酶,具有极强的3'→5'核酸外切酶活性(Proof-reading活性),当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。与普通pfu相比,保真性更高,约为普通taq的50倍,普通pfu的6倍。其扩增性能也比普通Pfu高,成功克服了普通pfu酶扩增效率低的缺陷。
产品用途:
用于要求保真度高的PCR反应,包括克隆PCR,DNA片段拼接,引入突变,全基因合成,DNA片段的补平等。
使用建议:
KOF DNA Polymerase 产生的PCR产物为平滑末端,无3’端“A”突出,其PCR产物的克隆有几种方案。
PCR前引物进行5’ 加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中(参见实验方案)。
将产物3’ 末端加A后再与T载体连接(参见实验方案)。
引物中引入15bp与载体同源序列,利用NovoRec PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒(Cat#NR001)直接连接到目的载体。
由于KOF DNA聚合酶的校正活性可引起引物从3’ 端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30bp。另外为了减少由3’→5’外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入KOF酶。