产品描述:
本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3′→5′外 切酶(校正)活性,当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶,其错误率仅为1.3x10-6,推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。
产品用途:
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入 突变、全基因合成,DNA片段的补平等(参见实验方案)。
使用建议:
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3′端"A"突出,其PCR产 物的克隆有几种方案。
PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆 于平滑末端的载体中(参见实验方案)。
将产物3′末端加A后再与T载体连接(参见实验方案)。
引物中引入15bp与载体同源序列,利用NovoRec? PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒(Cat# NR001)直接连接到目的载体。
由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入Pfu酶。