重组TEV蛋白酶(rTEV)是通过基因工程表达、纯化后的重组蛋白酶,该酶特异性识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七氨基酸序列,并高特异性、高活性剪切(剪切位点在Gln-Gly之间)。该酶经6×His标签纯化而得(含组胺酸标签),纯度达99%,剪切反应完毕后可通过IMAC预装柱(R003-01A Novoprotein)去除。该酶 在4℃-30℃温度、pH范围(6.0-8.5)反应条件下均具有活性。
使用建议:
使用前可通过10μg~20μg蛋白样品预酶切以确定最佳反应条件及酶用量,对于不易酶切的蛋白,可通过增加酶量及延长反应时间的方法获得所需的酶切结果。
应用实例:
图例一) TEV 蛋白酶酶切反应:每个泳道含有15μg的IL1RN与不同比例进行SUMO酶切的上样。在30℃,反应1小时后用15%的SDS-PAGE胶检测酶切效果。
每个反应所用酶比例分别为:
Lane 1: 100 units/mg
Lane 2: 200 units/mg
Lane 3: 400 units/mg
Lane 4: 800 units/mg
Lane 5:蛋白Marker
Lane 6: No rTEV
活性定义:
在1×Reaction Buffer(50 mM,pH8.0, 0.5 mM EDTA,1mM DTT),30℃反应1h,剪切>95%的3μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
储存条件:
本TEV蛋白酶的浓度为5,000U/ml。储存于-20℃以下,避免反复冻融,可稳定保存一年以上。