总RNA抽提试剂
产品简介：
BestBio贝博总RNA抽提试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。总RNA抽提试剂有多组分分离作用, 总RNA抽提试剂使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。
分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。蛋白质可用于Western blotting。
产品组成：
货号 101001 101002 101003
总RNA抽提试剂 20ml 50ml 100ml
使用方法：
从组织中提取总RNA
1)液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按每50-100mg组织加入1ml 总RNA抽提试剂，转移入离心管进行第2步操作。
2) 匀浆：组织样品按每50-100mg加入1ml 总RNA抽提试剂，另外，组织体积不能超过总RNA抽提试剂体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。
从细胞中提取总RNA
1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用总RNA抽提试剂进行消化、裂解，总RNA抽提试剂体积按每10cm2/ml比例,加入加入总RNA抽提试剂之前，尽量吸尽残余的培养液。
2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml 总RNA抽提试剂可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。
2、细胞或组织加总RNA抽提试剂后，室温放置5min，使其充分裂解。
注：此时可放入-70℃长期保持。
3、按每0.75毫升总RNA抽提试剂加入氯仿200µl，用手轻轻上下颠倒混匀15秒，室温放置3-15min。
注：禁用漩涡振荡器， 以免基因组DNA断裂。
4、在4℃，12000g条件下离心15min。
5、轻轻吸取上层水相，至另一离心管中。
注：1)千万不要吸取中间界面。
2)若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。
6、按每毫升总RNA抽提试剂中加入0.5ml异丙醇混匀，室温放置5-10min。
7、在4℃，12000g条件下离心10min，弃上清，RNA沉于管底。
8、按每毫升总RNA抽提试剂加入1ml DEPC处理DDW配制的75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。
9、在4℃，8000g条件下离心5min，尽量弃上清。
10、室温晾干或真空干燥5-10min。 注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。
11、可用50ul DEPC处理过的DDW，TE buffer或0.5%SDS在55-60℃，5-10min溶解 RNA 样品。
12、测O.D值定量DNA浓度。
注：1) BestBio贝博总RNA抽提试剂提取的RNA A260/A280值在1.6-1.8之间。
2) 产率估计：组织标本：（ug RNA/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。
注意事项：
1、RNA在总RNA抽提试剂试剂中时不会被RNase降解，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。枪头、塑料制品和玻璃制品可以用0.1％DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理过夜，然后在120℃下高压灭菌30min以去除残留的DEPC。玻璃制品也可用干热灭菌去除RNase（180℃烘烤2h）；配制溶液应使用无RNase的水，将水加入处理过不含RNase的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.01℅v/v,放置过夜,高压灭菌。
2、组织或细胞量过少，可酌情减少总RNA抽提试剂用量。
3、组织或细胞用量过多，会引起DNA对RNA的污染。
4、高蛋白，脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨后，须在4℃，1200g条件下离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则也须去掉。
5、夏天提RNA，必须带手套，手是RNase的主要来源。
6、组织块用液氮研磨，效果最好，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪将组织绞碎，然后再充分研磨。
储存条件：
2-8℃保存 有效期：一年
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