rTEVProtease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

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参考报价：577 产地：美国品牌：Yeasen 型号：20403ES80 更新时间：2024/4/28

rTEVProtease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
rTEV Protease 重组烟草蚀纹病毒蛋白酶	20403ES80	1000U	≤-20℃	577.00
rTEV Protease 重组烟草蚀纹病毒蛋白酶	20403ES92	10×1000U	≤-20℃	4955.00

产品描述

重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30°C时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30°C的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。

不同温度下rTEV酶切活性

反应时间		不同温度下剪切活性(%)
	4°C		16°C	21°C	30°C
1 h	34		58	56	70
2 h	58		80	78	90
3 h	71		99	99	99
3.5h	84		99	99	99

影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；2）Zn离子（＞5 mM）对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。

产品性质

来源（Source）	大肠杆菌
外观（Appearance）	无色透明液体
比活力（Specific Activity）	5 U/μl
活性定义（Unit Definition）	在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH8.0，0.5 mM EDTA，1mM DTT）中，30℃反应1h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化（Purification ）	Ni亲和纯化
纯度（Purity）	≥95%（by SDS-PAGE）

产品组分

组分编号	组分名称	产品货号/规格
组分编号	组分名称	20403ES80（1000U）
20403-A	rTEV Protease（5 U/μl）	200 μl
20403-B	rTEV Buffer 1（20×）	2 ml
20403-C	rTEV Buffer 2（1000×）	50μl

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。

收到产品后，请将rTEV Buffer 1、rTEV Buffer 2置于-20 oC保存，一年稳定。对于rTEV Protease，短期使用，可置于-20 oC保存，6个月稳定；长期使用，请置于-70℃保存，一年稳定。强烈建议收到货或者第一次使用时将各组分分装保存，特别是rTEV Protease，以及rTEV Buffer 2（1000×），避免反复冻融。

应用实例

1. 在EP管中配制如下反应体系，

融合蛋白	20 μg
rTEV Protease (5 U/μl)	2-4μl
rTEV buffer 1（20×）	7.5 μl
rTEV Buffer 2（100×）*	1.5μl
DDW（超纯水）	up to 150 μl

“*”注：取适量的rTEV Buffer 2（1000×）做10倍稀释到rTEV Buffer 2（100×），再根据以上体系加量。

2. 30℃孵育，在1、2、4、6小时分别吸出30 μl上述反应液，置于单独的EP管中。

3. 向上述EP管中加入30 μl 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。

4.样品全部反应完毕后，样品煮沸5 min，取40 μl进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理，可将反应液置于4℃，请延长反应时间，并增加rTEV酶用量。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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