Hieff? Gold T4 DNA Ligase (5 U/μL)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff? Gold T4 DNA Ligase (5 U/μL) | 10300ES80 | 1000 U | 425.00 |
Hieff? Gold T4 DNA Ligase (5 U/μL) | 10300ES97 | 50000 U | 18654.00 |
产品描述
Hieff? Gold T4 DNA Ligase在ATP做辅酶的情况下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的5’磷酸末端和3’羟基末端形成磷酸二酯键，还可催化RNA和双链中的ssDNA 或RNA 链连接，但不能催化全单链核苷酸间的连接。
本品主要适用于标记RNA 3’-末端，环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品货号（规格） |
10300ES80（1000 U） | 10300ES97（50000 U） |
10300-A | Hieff? Gold T4 DNA Ligase (5 U/μL) | 200 μL | 10 mL |
10300-B | 10 × Ligase Buffer | 400 μL | 20 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
单位定义
在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ 分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测：30 U的本品和0.6 μg λ-Hind III在37℃下反应4小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：30 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反应4小时，DNA电泳谱带不发生变化。
注意事项
1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 在无菌微量离心管中配制以下反应体系：
组分 | 使用量 |
载体DNA | 50-100 ng |
插入片段 | 片段与载体的分子摩尔比应在3:1-5:1 |
10 × Ligase Buffer | 2 μL |
Hieff? Gold T4 DNA Ligase (5 U/μL) | 1 μL |
ddH2O | To 20 μL |
注：平末端载体与DNA片段进行连接时，应先将载体进行去磷酸化处理，以防发生自连接现象。为提高连接效率，每20 μL反应体系中可以加2 μL 50% PEG 4000。
2. 16℃反应过夜。
3. 转化实验
1）将连接产物加入到100 μL 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/10），轻弹混匀，冰上孵育30 min。
2）将离心管于42℃，热激90 sec（不要晃动），之后立刻置于冰水浴静置2-3 min。
3）向离心管中加入900 μL LB或SOC培养基，37℃，150 rpm，振荡培养45 min，该过程使菌体复苏，抗性基因表达。
4）2500 g 离心5 min，吸去900 μL上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
注：如果使用超级感受态细胞（转化效率＞108 cfu/μg），可直接吸取100-200 μL 37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周内均可重新涂板。
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