GT707转染试剂说明
GT707转染试剂纳米技术合成，是一种多用途广谱转染试剂，可以转导DNA及SiRNA，应用于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。既可以转染分裂细胞也可以转染非分裂细胞。经过反复试验，GT707转染试剂在细胞转染过程中，表现了卓越的转导性能，应用于293系列细胞、Hela细胞、HepG2细胞等多种常规细胞转染效果良好，同时可用于悬浮细胞（如293-F、CHO-S等）的转染，亦可用于In vivo动物体内的高效转染。
产品货号：GT707 规格：1ml
贴壁细胞操作步骤：（以6孔板转染293T细胞为例）
1.在转染前一天按每孔3～5×105个细胞接种细胞。转染前2~4小时，细胞培养基换成无双抗、无血清完全培养基。转染时细胞密度在70-90％为宜。
2.转染复合物的制备：
（1）取2μg DNA 用100μl无血清稀释培养基（建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或RPMI1640）稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。
（2）取10μl GT707转染试剂加入100μl不含血清和抗生素的培养基中，充分混匀。室温静置5分钟。
（3）将GT707稀释液滴加到DNA稀释液中，轻轻混匀, 室温孵育 10-15 分钟，从而获得222 μl GT707/DNA 复合物。
注意！: 两种溶液的混合顺序对转染结果非常重要，切勿颠倒顺序。
3.转染 ：
将转染复合物加入到含有细胞和完全培养基的6孔板中，轻柔混匀,培养4～6小时后更换无血清培养基，于37℃ ，5% CO2培养箱中继续培养24～48h。
注意！: 转染后首次换液时间至少需4小时以后，视培养基消耗情况可以适当延长可增加转染效率，如果培养基发黄，需尽快更换培养基。
培养容器培养面积需要培养基的量稀释用培养基的量DNA转染RNAi转染
DNAGT707RNAGT707
96孔板0.3cm2100ul10ul0.1ug0.3～0.6ul5pmol0.1～0.2ul
48孔板0.7 cm2200ul15ul0.2ug0.6～1.2ul10pmol0.2～0.4ul
24孔板2cm2500ul20ul0.4ug1.2～2.4ul20pmol0.4～0.8ul
12孔板4cm21ml50ul0.8ug2.4～4.8ul40pmol0.8～1.6ul
6孔板10cm22ml100ul2ug6～12ul100pmol2.0～4.0ul
60mm平皿20cm25ml0.25ml4ug12～24ul200pmol4.0～8.0ul
100mm平皿60cm215ml1.5ml8ug24～48ul600pmol12～24ul
125ml摇瓶30ml3ml50～120ul30～50ul
备注：1、“稀释用培养基的量”指稀释DNA（或RNA）及培养基的培养基用量。如6孔板转染时，分别用100ul的培养基稀释DNA及培养基。
2、如用于同时共转染多种质粒，DNA的用量指每种质粒用量的总和，这时如需得到较高转染效率，建议将DNA的用量和转染试剂的用量同步提高2-3倍。
悬浮细胞操作步骤：（以转染30ml CHO-S细胞为例）
1.在转染前一天按6～7×105个细胞/ml接种细胞，待转染时细胞密度应在1×106个细胞/ml。
2.转染复合物的制备：
（1）取20μg DNA 用3ml无血清稀释培养基稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。
（2）取100μl GT707转染试剂加入3ml不含血清和抗生素的培养基中，充分混匀。室温静置5分钟。
（3）将3ml GT707稀释液滴加到3ml DNA稀释液中，轻轻混匀, 室温孵育 10-15 分钟，从而获得6ml GT707/DNA 复合物。
3.转染 ：
将6ml GT707/DNA 复合物加入到含有30ml细胞和无血清完全培养基的125ml摇瓶中，轻柔充分混匀，125rpm，37℃ ，8% CO2细胞培养摇床中继续培养24～96h。
转染条件优化：
由于DNA和转染试剂的用量比值是决定转染效率的重要因素，同时由于各实验室质粒的定量误差，质粒纯化程度不同以及细胞状态不同，造成不同细胞和实验室的最优实验条件的差异，为取得最高的转染效率，初次应用时，建议先进行优化。最优条件确定后，实验的结果将非常稳定。下表列出了在24孔板的优化方案，供参考。
24孔板优化方案
号1234
每孔DNA的量（μg）0.40.80.82
每孔GT707转染试剂量（μl）1.22.44.06
每孔RNA的量（pmol）10202040
每孔GT707转染试剂量（μl）0.20.40.80.8
根据预实验的最优化条件，按培养器皿表面积比例应用到其他培养容器。