MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF
MBP标签蛋白高度交联纯化树脂
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF （MBP标签蛋白高度交联纯化树脂） | 20515ES08 | 5ml | 4℃ | 858.00 |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF （MBP标签蛋白高度交联纯化树脂） | 20515ES25 | 25ml | 4℃ | 2958.00 |
产品描述
MBPSepDextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSepDextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
此外，本品以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。
产品性质
基质（Matrix） | 高度交联的6%琼脂糖微球 |
配体（Ligand） | 糊精 |
孔径（Bead size） | 45-165μm |
载量（Capacity） | ＞10mg MBP蛋白（80kDa） |
最大压力（PressureMax） | 0.3 MPa, 3bar |
pH稳定范围（pH range） | 3-12 |
储存缓冲液（Buffer） | 20%乙醇 |
运输和保存方法
冰袋运输。4℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤除菌。
结合/洗杂缓冲液：20 mM Tris-HCl,200mM NaCl, 1mM EDTA, pH7.4
洗脱缓冲液：20mMTris-HCl, 1mM EDTA，10mM 麦芽糖, pH7.4
【注】：结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1mM DTT或10mM β-巯基乙醇。
使用方法
【注】样品在上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
1 MBPSep DextrinAgarose Resin的装填（适用于各种中压色谱层析柱的填装）
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-50px的去离子水。
2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4）打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。
【注】：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%，当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5）关闭泵，关闭层析柱出口。
6）如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。
7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2 样品纯化
1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）上样：Resin平衡后，加入蛋白样品，使其与Resin充分接触，提高目的蛋白回收率，收集流出液。
3）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）洗脱：使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液，收集洗脱液，即目的蛋白溶液。
5）清洗与保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
3 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
4 填料清洗
随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。
1）3倍柱体积的去离子水；
2）3倍柱体积的0.1%SDS或0.5M NaOH溶液；
3）3倍柱体积去离子水；
4）3倍柱体积20%乙醇，保存于4℃。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）MBPSepDextrin Agarose Resin6FF使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附表问题及解决方案
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 填料被堵塞 | 清洗树脂。 |
裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，或离心去除。 |
洗脱组分中无目的蛋白 | 目的蛋白未表达 | 优化实验方案，确保目的蛋白表达 |
样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂 | 样品透析或用结合buffer稀释 |
细胞产生大量的淀粉酶影响结合力 | 培养基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表达 |
融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力 | 更换载体 |
柱子结合时间太短 | 将样品与树脂振荡孵育4℃2h或更长时间 |
洗脱样品较杂 | 目的蛋白降解 | 加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA等 |
平衡/洗杂不充分 | 增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。 |
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