LysoSensor? YellowBlue DND-160 (PDMPO) 溶酶体黄蓝色荧光探针
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
LysoSensor? YellowBlue DND-160 (PDMPO) 溶酶体黄蓝色荧光探针 | 40768ES50 | 50μl | -20℃避光 | 359.00 |
产品描述
LysoSensor?系列探针是对活细胞中的酸性区室（如溶酶体、顶体精子）pH值进行检测的一类荧光探针，该类探针的染色具有向酸性，可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种向酸性可解除染料的荧光淬灭性，使其所发射的荧光强度更强。因此，与LysoTracker系列探针相比，LysoSensor?系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。
本品LysoSensor? YellowBlueDND-160 (PDMPO)是一种用于测定溶酶体pH值的比率测量型探针，也是LysoTracker?系列探针中唯一的一种pH依赖型显示双激发和双发射波长的荧光探针，该探针在中性环境中产生蓝色荧光，但当所处环境变为偏酸性时，则发射黄色荧光。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。
产品性质
分子式（Formula） | C20H22N4O3 |
分子量（Molecular Weight） | 366.4188 |
Ex/Em | 329?440 |
pKa | ～4.2 |
结构式（Structure） |  |
运输和保存方法
室温运输。-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。
1.工作液的配制
利用培养基或合适的缓冲液将1mM 储存液稀释至工作浓度，推荐工作液浓度至少为1μM；
【注1】：为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。2）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
【注2】：工作液现配现用。
2. 染色
2.1 对于贴壁细胞
1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30min～2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。【注意】：对LysoSensor? YellowBlue DND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5min才可用作pH指示剂。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30min～2h（具体时间需根据细胞类型而定）。
【注意】：对LysoSensor? YellowBlueDND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5min才可用作pH指示剂。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。
【注意】：对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
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