QuickShuttle-293 转染试剂(293 细胞专用)
货号:KX0110044
含量:0.8 ml
用途:用于各种293 细胞的瞬时转染和稳定细胞系构建(立传立转)。
注意事项:
1. 质粒DNA:请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒DNA。
2. 稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,用低内毒素纯水配制,高压消毒或除菌过滤。
3. 培养基:经过DMEM、RPMI-1640 和M199 等常规培养基测试,推荐使用含5~10%牛
血清的DMEM,若转染效果不理想可尝试其它培养基。
4. 以24 孔细胞板转染实验为例,推荐每孔低内毒素质粒DNA 用量为2μg、转染试剂用量
为3~5μl,请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。
5. 立传立转要求使用生长旺盛的细胞,即细胞生长至80-90%成片或刚长满。若使用生长
过老的细胞,将明显影响立传立转的效率。
6. 立传立转对细胞状态要求较高,如果转染效果不理想,可按QuickShuttle-Basic 的转染
方法(见本说明书第3 页),在细胞贴壁后进行标准转染操作。
使用方法
1. 将新鲜消化的293 细胞接种到24 孔细胞板中,每孔1~2×105 细胞,1ml 完全培养基。
备注:可在生长旺盛的细胞传代后直接按下述步骤2~5 进行转染实验,无需18~24 小
时的等候时间。
2. 将2μg 质粒DNA 和3~5μl 转染试剂分别稀释到50μl 生理盐水中。备注:质粒DNA 和
转染试剂的最适用量需要根据不同培养基来优化,但理论上不超出1~2μg 和3~5μl 范围。
3. 合并上述两溶液并混匀。备注:无需其它转染试剂所需的10~30 分钟的等候时间。
4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中,用加样器吸打混匀。备注:转染复合物可直
接加入含血清的细胞培养基中进行转染。
5. 将细胞板移至37oC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注:无需在转染后4~6 小时补加血清
或更换培养基。
6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。