QuickShuttle-Enhanced 转染试剂（增强型）
货号：KX0110042
含量：0.8 ml
用途：用于难转哺乳动物贴壁细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建。
注意事项：
1. 质粒DNA：请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒DNA。
2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒素纯水配制，高压消毒或除菌过滤。
3. 培养基：经过DMEM、RPMI-1640 和M199 等常规培养基测试，推荐使用含5~10%牛
血清的DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。
4. 以24 孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒素质粒DNA 用量为1~2μg、转染试剂
用量为3~5μl，请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。
5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系，可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染，
从而可节省18~24 小时的转染前细胞培养时间。
使用方法
1. 转染前18~24 小时接种细胞到24 孔细胞板中，每孔5~10×104 细胞，1ml 完全培养基。
备注：如果筛选抗药性稳定细胞系，可以考虑简化的实验步骤，即在细胞传代后直接按
下述步骤2~5 进行转染，无需18~24 小时的等候时间。
2. 将1~2μg 质粒DNA 和3~5μl 转染试剂分别稀释到50μl 生理盐水中。备注：质粒DNA
和转染试剂的最适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化，但理论上不超出1~2μg
和3~5μl 范围。
3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染试剂所需的10~30 分钟的等候时间。
4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注：转
染复合物可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染。在极少情况下会出现贴壁细胞脱
落现象，可先从待转染细胞孔中吸取500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。
若在细胞瓶中进行转染，直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。
5. 将细胞板移至37oC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后4~6 小时补加血清
或更换培养基。
6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选