AxyPrep-96血基因组DNA试剂盒

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参考报价：电议产地：美国品牌：AXYGEN 型号：002 更新时间：2015/6/10

本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K裂解）从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA

一、试剂盒组成、贮存、稳定性

    说明书，耗材：96孔深孔板（1.6 ml），96圆孔板，96孔DNA制备板，96圆孔硅胶片，BF-400膜。
    Proteinase K：冻干的蛋白酶K 可室温贮存6 个月，长时间保存请置于4℃；溶解后，在
    2-8℃可贮存2 个月，长时间保存请勿置于室温中。
    Buffer PK ：蛋白酶K 溶解液，室温密闭贮存。
    Buffer BL ：细胞裂解液，室温密闭贮存。
    Buffer W1B concentrate ：洗涤液。使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%乙醇。
    Buffer W2 concentrate ：去盐液。使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%乙醇。
    10×Buffer W2（12×96 试剂盒）：用于配制Buffer W2 。
    Eluent B：7.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，0.3 mM EDTA ，室温密闭贮存。

二、注意事项

Buffer BL 和Buffer W1B 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水和生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

三、实验准备

   1. 第一次使用时，在Buffer W2 concentrate 和Buffer W1Bconcentrate 中按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
   2. Buffer W2（12×96 试剂盒）配制：在提供的500 ml 空瓶中加入15 ml 10×Buffer W2，135 ml 去离子水和350 ml 乙醇，可用100%无水乙醇或95%乙醇。
   3. 根据瓶上标签将蛋白酶K 溶解于Buffer PK 中，请勿旋涡振荡。
   4. 准备70℃温浴。
   5. 使用前检查BufferBL 是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70℃温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

四、操作步骤

   1. 向96 圆孔板的每孔中加入20 μl 蛋白酶K。
   2. 加200 μl 抗凝全血到96 圆孔板中。
   * 若全血样品体积少于200 μl，用PBS 补充到200 μl。
   * 若样品为鸟类血，样品用量须低于10 μl。
   * 若需得到RNA-free的基因组DNA，在步骤3 加入Buffer BL 前加入DNase-free 的RNase A(20 mg/ml) 。
   3. 加200 μl Buffer BL ，注意不要打湿每孔的边缘，用96 圆孔硅胶片密封各孔。
   4. 用力混合30 s。
   5. 3000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm后即停止。
   6. 在培养箱或烘箱中70℃温浴至少10 min。
   7. 3000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm后即停止。
   8. 取下96 圆孔硅胶片，每孔加入200 μl 乙醇（96-100%）。
   9. 用96 圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15 s。3000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm 后即停止。
   10. 将96 孔DNA 板放到一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板。取下圆孔板上的96 圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96 孔DNA 板中，6000 rpm 离心4 min。
   11. 丢弃96 孔1.6 ml 深孔板的滤液，将96 孔DNA 板放回到96 孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入500 μl Buffer W1B，用一新的BF-400 膜密封96 孔DNA 板，6000 rpm 离心4 min。
   * 确认在BufferW1B concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
   12. 丢弃96 孔1.6 ml 深孔板的滤液，将96 孔DNA 板放回到96 孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入850 μl Buffer W2，用另一新的BF-400膜密封96孔DNA板，6000 rpm 离心4 min。
   * 确认在BufferW2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
   13.弃滤液，将96孔DNA板放回到96孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入400 μl Buffer W2，用另一新的BF-400 膜密封96 孔DNA 板，6000 rpm 离心4 min。
   14.将96孔DNA板放在一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板上，用BF-400膜密封96孔DNA板，6000rpm离心15 min。
   15.将96孔DNA板放在另一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入100-200 μl Eluent B 或去离子水，室温静置2min，用另一新的BF-400膜密封96 孔DNA板，6000 rpm 离心4min洗脱得到DNA。