KAPA文库构建试剂盒提供了便捷的“混合体系”反应缓冲液，包含了除寡聚核苷酸接头和PCR引物之外的所有成分。同样，还含有一个可用于文库构建过程每一步的单酶混合液，减少了移液的次数。

高保真PCR是用于富集带有特异接头序列的文库片段，并且在测序之前扩增DNA。对于文库的PCR富集，保持最小的扩增偏差以确保序列覆盖率是非常重要的。这样就能够由最小的总序列量获得有效的测序，即得到最高的整体覆盖率。

KAPA高保真DNA聚合酶设计用于低偏差、高保真PCR，适用于二代测序文库扩增。这种内在的高合成能力导致产量、灵敏度、速度、模板长度以及对困难模板扩增能力的显著提升。这些性能的提高减少了扩增偏差，扩大了序列的覆盖区域。KAPA文库构建试剂盒还包括了KAPA高保真热启动混合体系（2×），含有除引物和模板之外的所有PCR体系。

产品优势

目前二代测序（Next-Generation Sequencing,NGS）文库构建普遍存在以下问题：

1）扩增产生较大程度的Bias；

2）扩增效率偏低，未覆盖区域偏多。

KAPA NGS文库扩增试剂，采用独特的KAPA HiFi高保真酶体系，大大提高扩增效率，降低扩增Bias和未覆盖区域。保证数据真实可靠的同时，降低反应次数，节省成本。

产品应用

该试剂盒趋向用于Illumina文库（基因组DNA文库、双末端DNA文库、双末端多重DNA文库）的构建，但也可用于其他需要有效的末端修复、加A、加接头和/或文库扩增步骤。

操作流程

1.End Repair：The end repair module produces blunt-ended,5’-phosphorylated DNA fragments. End Repair Enzyme Mix: (1) T4 DNA Polymerase, DNA PoI, and T4 Polynucleotide Kinase (50μl or 250μl); (2) 10×End Repair Buffer with dNTPs (100μl or 500μl)
2.A-Tailing：The A-Tailing module adds dAMP to the 3’-ends of the dsDNA fragments. A-Tailing Enzyme: Klenow Fragment 3’-5’ exo-(30μl or 150μl) 10×A-Tailing Buffer (50μl or 250μl)
3.Adaptor Ligation：The ligation module e ligates dsDNA adaptors with 3’-dTMP overhangs to library fragments DNA ligase (50μl or 250μl) 5×Ligation Buffer (100μl or 500μl)
4.Amplification： 常规PCR扩增                                   2×KAPA HiFi Hotstart ReadyMix （250μl 或1250μl）
Real-Time PCR 扩增 2×KAPA HiFi Hotstart Real-Time PCR Master Mix(250μl 或1250μl）4×Fluorescent Standards(1500μl each)

详细操作步骤请见说明书