NGS(Next Generation Sequencing)，随着新一代测序的通量和费用不断改善，样品制备和检测成为整个NGS流程中亟待改善的一环。快速准确地将基因组DNA进行片段化是NGS新一代测序技术中尤为关键的步骤。测序文库中DNA片段的质量好坏则是关系测序质量高低的决定性因素，能否快速剪切并测量酶切产物质量是整个测序文库构建过程的流程瓶颈。Fragment AnalyzerTM全自动毛细管电泳系统结合相应NGS片段分析定性定量试剂盒的推出，大大减少手工操作时间，高通量、快速、精确对NGS文库进行质量的检测。
2．Fragment AnalyzerTM系统与传统NGS片段检测技术分析时间的比较
Fragment AnalyzerTM实验流程 VS 传统芯片检测实验流程
|
n 配制胶液/染料并于常温保存
n 向96孔板中依次加入2ul ladder，待测样品,再向其中加入DM buffer
n 将96孔板放入仪器
n 启动仪器，开始检测
n 分析结果
n 输出结果
|
n 配制胶液/染料并于4℃避光保存
n 将胶液置于常温30min
n 取出芯片
n 将芯片孔中加入9ul胶液
n 安装芯片底座,等待60s整
n 继续等5s
n 取下芯片
n 再向芯片中加入9ul胶液
n 向每个样品孔中加入5ul marker
n 向一个孔中加入1ul ladder
n 向每个孔板中加入1ul待测样品
n 将芯片至于涡旋振荡器上
n 振荡60s
n 将芯片放入仪器（在5min内完成）
n 启动仪器（预试时间10min;60-90s/每个样品）
n 分析结果
n 输出结果
|
3．NGS选用Fragment Analyzer的理由
|
u高通量 ： 每天可完成1500个样品的检测
u全自动： 无需芯片和手动灌胶
u精确度高：可检测最低浓度为5pg/μl
u运行时间短：可在45min或55min内完成12或96个样品的分离
u检测灵敏度高： 仅需要2μl样品即可准确定量
u无样品间交叉污染： 每次试验后更换毛细管中的分离胶，避免污染
u强大的数据分析软件： PRO SizeTM2.0软件可自动完成片段弥散分析、并输出片段大小分布和浓度数据。
u适用于各类NGS仪器平台：可分析15000bp大片段
u适用于NGS多个环节的检测：包括基因组DNA的质量分析、NGS片段文库的分析、接头连接检测以及文库丰富度分析
|
4．新一代测序实验流程图
Fragment AnalyzerTM系统可适用于图中绿色√标记的环节，并进行样品的定性定量
4．Fragment AnalyzerTM系统NGS测序应用示例
图1：Fragment AnalyzerTM系统下，NGS流程中基因组DNA质量分析结果，
红色：完整的基因组DNA； 蓝色：部分降解；黑色：严重降解
图2：Fragment AnalyzerTM系统下NGS片段文库的分离（上）和定量（下）结果。定量结果显示，NGS片段弥散范围主要在200-1000bp之间，同时计算出各个样品的浓度（μg/μl），比例（% total），摩尔分数（nmole/L），平均片段长度（Avg.Size）,变异系数（%CV）
图3：Fragment AnalyzerTM系统可明显将NGS片段接头连接前后进行区分