Morgan™ HLA-B27 SSP 低分辨检测试剂盒
一、 实验原理
本试剂盒是特异性寡核苷酸聚合酶链反应（SSP）检测技术的主要应用。
二、 试剂盒组成
1． 单孔板（0.2ml反应管）
2． Master Buffer 1040ul
三、 未提供试剂
1． Taq酶（5u/ul） 5.琼脂糖
2． 无菌双蒸水 6.PCR扩增仪
3． 矿物油 7.电泳仪
4． 0.5 X TBE缓冲液 8.紫外透射分析仪
四、 扩增程序
|
|
循环次数
|
温度
|
时间
|
|
1
|
1
|
96℃
|
2 min
|
|
2
|
10
|
96℃
|
15s
|
|
65℃
|
60s
|
|
3
|
22
|
94℃
|
10s
|
|
62℃
|
50s
|
|
72℃
|
30s
|
|
4
|
1
|
4℃
|
取出
|
注： 试验前须提前20分钟按上表程序设计开机预热（PCR时间约1小时21分钟）
七、DNA样品准备
1． 血样收集在含EDTA或ACD 的抗凝试管中
2． 样品A260/280比值应介于1.65~1.8之间。
八、 实验步骤（建议客户一次扩增５个Ｔ以上，便于计算ＴＡＱ酶用量）
以一次５个Ｔ为例
1． 取Master Buffer６0 ul于一支新的1.5 ml离心管中。
2． 取DNA１２ ul加入离心管中。
3． 取Taq酶０.４ul加入离心管中
4． 充分混匀，用连续进样器加入反应板孔中，每孔12ul。
5． 放入已预热好的PCR仪进行扩增。
6． 配好2.0 %的琼脂糖凝胶。
7． 电压8-10V/cm（红色带位置约0.7cm-1cm）
每一孔的反应系统
|
|
容量（ul/孔）
|
|
DNA(20-120ng/u))l)
|
2.0
|
|
Master buffer
|
10.0
|
|
Taq酶(5u/ul)
|
0.06
|
|
总数
|
12.06
|
九、 请客户依照５Ｔ的步骤，结合每一孔的反应体系，自行调整实际操作用量．
十、 结果判断
根据判读表进行判读。
十一、 注意事项
1． 确定DNA存在
2． 操作防污染
3． 试剂盒应贮存在-20℃
联系电话：18930640599