BioGene-FastTM
DNA 30分钟快速提取试剂盒中文说明书
BioGene-FastTM基因组快速提取试剂盒可以在30分钟或更少的时间内从全血中快速提取
DNA组。这种快速可靠的方法可以制出免受RNA污染的DNA。典型的提取量是从500ul的全血中提取5~30ug的DNA。下面的试剂盒样本提供了满足200次提取所需要的试剂。
盒内试剂清单:
1、 溶液A
2、 溶液B
3、 溶液C
4、 溶液D
用户自备用品:
1、 70%乙醇
2、 100%异丙醇
3、 1.5ml微离心机试管
4、 加样器
5、 涡流混合器
6、 离心机
7、 恒温槽
从全血样本提取DNA的操作规程
1、 加1ml溶液A到500ul的EDTA或用肝磷脂处理过的全血中。(注意:溶液A在使用前必须保存在4℃下)。涡流混合20秒。以每分钟7000转数旋转1分钟,使白细胞/细胞核旋沉淀。移注表面悬浮物,然后用纸巾吸净残留液体。加入1ml的溶液A清洗颗粒,然后涡流20秒,象上面那样旋沉淀白细胞/细胞核,并去除表面悬浮物。
2、 涡旋试管以完全分解剩余颗粒。加300ul的溶液B,涡旋该试管20秒以溶解细胞核。(如果细胞核团簇在进行涡旋之后可见,则将其潜伏于55℃的环境中3分钟直到溶液变清沏为止。如果颗粒在加入溶液B之前已完全分解的话,这一附加试验步骤通常是不需要的。)
3、 加入150ul溶液C到试管中,涡旋10秒钟。将其潜伏于冰上3分钟,然后将其置于微离心机中全速(14000转/分钟)离心旋转5分钟,使蛋白质沉淀。(5-30分钟都是可以接受的潜伏时间)
4、 将表面悬浮物小心移入一个新的试管中,并加入400ul的异丙醇。轻轻反转该试管使混合物充分混合(直到絮凝物出现)。
5、 在微离心机中全速旋转2分钟使DNA小球旋沉淀,然后去除表面悬浮物。用1ml70%的乙醇清洗小球,(小心不要破坏这些小球)用毛巾料将浮于试管内的物质尽可能的吸取干净。
6、 将DNA小球用超速真空(吸尘器)干燥3分钟,或者在空气中干燥至少10分钟。
7、 在150ul的溶液D或ddH2O中溶解DNA。涡旋该试管,然后旋沉淀内容物。在55℃下潜伏10分钟。再涡旋该试管,旋沉淀内容物。这样DNA就可以使用了。(在37℃的温度下,潜伏15分钟到一整夜的时间也可以。)