地高辛系统能够安全高效地标记DNA, RNA或是寡聚核苷酸探针,这些探针可以被广泛地应用在
èSouthern blotting, dot blotting
èNorthern blotting
èArray
èColony hybridization
èIn situ hybridization
èELISA
DIG 通过一个含有11个碳原子的空间臂与尿嘧啶核苷酸上的C5位置相连(如下图),一定浓度的DIG标记的核苷酸可以通过DNA polymerase (如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase )、RNA polymerase (如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端转移酶(Terminal Transferase)的作用掺入到核苷酸探针中;也可通过随即引物标记(random primed labeling), 缺口平移(nick translation),PCR,3’端标记/加尾或是体外转录制备带有DIG标记的探针。当然也可以通过化学合成的方法进行核苷酸的标记。
对于DIG 标记探针的杂交检测,可选用连接有碱性磷酸酶(alkaline phosphatase),过氧化物酶(peroxidase),荧光素(fluorescein),若丹明(rhodamine)或是胶体金(colloidal gold)高亲和性的抗DIG抗体共轭物;也可选用不带任何共轭连接的抗DIG抗体和二级抗体。
检测的灵敏度主要依赖于对不同抗DIG抗体共轭物显示方法的选择。以连接有碱性磷酸酶的抗DIG 抗体为例:即可以使用NBT或BCIP做底物的显色法,也可以使用HNPP荧光碱性磷酸酶底物,检测的灵敏度常规可达到0.1pg (Souther blot)。
Labeling and Detection Kit地高辛DNA标记和检测试剂盒 |
11093657910 |
Roche |
Kit |
9627 |
DIG DNA Labeling Kit地高辛DNA标记试剂盒 |
11175033910 |
Roche |
40T |
8547 |
DIG Nucleic acid Detection Kit地高辛核酸检测试剂盒 |
11175041910 |
Roche |
Kit |
5691 |
DIG Oligonucleotide 3’-End Labeling Kit寡核苷酸3’末端地高辛标记试剂盒 |
3353575910 |
Roche |
25T |
8192 |
DIG Oligonucleotide Tailing Kit |
3353583910 |
Roche |
25T |
6912 |
寡核苷酸加尾地高辛标记试剂盒 |
DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7) |
11175025910 |
Roche |
2*10T |
8369 |
地高辛RNA标记试剂盒(SP6/T7) |
PCR DIG Probe Synthesis Kit |
11636090910 |
Roche |
25T |
6172 |
PCR地高辛探针合成试剂盒 |
DIG Northern Starter Kit |
12039672910 |
Roche |
10T |
5572 |
DIG Luminescent Detection Kit地高辛发光检测试剂盒 |
11363514910 |
Roche |
Kit |
6201 |
DIG High Prime高效地高辛DNA标记试剂 |
11585606910 |
Roche |
40T |
8643 |