PolyPlus-transfection(PT)是一家位于法国的生物技术公司,目前已经通过了ISO9001:2000质量体系认证。该公司拥有十几年的的转染试剂研发经验,已经开发了一系列的转染试剂,如:基因的体内和体外转染试剂、寡核苷酸转染试剂和siRNA转染试剂等,可以根据不同的需要获得稳定或瞬时的转染效果。
JetPEITM转染试剂
该试剂是阳离子化的大分子多聚乙烯亚胺(PEI)及其衍生物,其与外源基因结合形成颗粒状,与细胞表面的蛋白多糖结合,通过细胞"内吞作用"进入细胞。PEI-复合体具有质子海绵的特性,能吸收溶酶体的H+,在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活,保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后,JetPEI复合体囊泡肿胀破裂,将DNA释放到细胞质中。
特点:
l 转染效率高,重复性好
l 可转染许多种细胞系,对粘附细胞和悬浮细胞同样有效
l 对原代细胞也具有很好的转染结果
l 也可以转染寡核苷酸
l 培养基可含或不含血清
l 极低的细胞毒性
l 方法简便,省时省力
基本步骤
1) JetPEI溶液2μl和质粒DNA 1μg混合5-30分钟。
2) 将JetPEI-DNA复合体溶液加入到细胞液中(可以在含血清的培养基中)。
3) 检测
N/P比率(影响转染效率的关键)
N/P比率是对JetPEI复合体的所带电荷的度量。它指的是DNA分子带负电的磷酸基团与JetPEI中N残基的摩尔比,是衡量核酸与转染试剂比例的参数。从理论上讲,JetPEI/DNA复合体的电中性为N/P=2-3,但实际操作时,N/P=5-10效果较好。
转染试剂的类型
1.JetPEI转染试剂
JetPEI是PolyPlus-transfection的主导产品,毒性低,对细胞不会造成伤害。它能把基因转入各种粘附或悬浮的细胞系中以及原代细胞。
2.In vivo-JetPEI转染试剂
通过静脉、大脑、腹膜以及气管等体内途径进行转染,目前已在小鼠、大鼠、鸭、豚鼠和猴等动物身上取得成功。
3.Tagged JetPEIs:细胞介导的转染试剂
Tagged JetPEIs是偶联有配体的PEI衍生物,可将基因转入特殊的细胞。
1) JetPEI-Gal & in vivo-JetPEI-Gal(肝细胞介导)
PEI衍生物,偶联有半乳糖。受体细胞:细胞表面表达半乳糖特异性膜血凝素的细胞,如肝细胞。
2) JetPEI-Man & in vivo-JetPEI-Man(树突状细胞和巨噬细胞)
PEI衍生物,偶联有甘露糖。受体细胞:细胞表面表达甘露糖特异性受体的细胞,如巨噬细胞和树突状细胞。
3) JetPEI-RGD(上皮细胞和内皮细胞)
PEI衍生物,偶联有RGD肽链。受体细胞:细胞表面表达整合素的细胞,如上皮细胞和内皮细胞。 4.Fluo JetPEI:荧光转染试剂
1) JetPEI- FluoF
PEI衍生物,偶联荧光素FluoF(激发波长490nm,发射波长520nm),通常用于胞内定位研究,适于荧光显微镜和流式细胞仪的检测。
2) JetPEI- FluoR
PEI衍生物,偶联四甲基罗丹明FluoR(激发波长555nm,发射波长580nm),常用于双色标记和协同定位的实验中,如用于绿色荧光蛋白或FITC标记的质粒的转染。
3) In vivo-JetPEI-FluoF & In vivo-JetPEI-FluoR
PolyPlus-transfection也提供体内转染的荧光试剂,常用于生物分布研究。
5.JetPEI-Biotin和in vivo-JetPEI-Biotin
PEI衍生物,偶联Biotin,通过链亲和素检测JetPEI/DNA在细胞内的定位和分布
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