Invitrogen
脂质体
2000
的操作流程及注意事项
发布日期：
2010-11-13 21:29:08
浏览次数：
338
Invitrogen
脂质体
2000
的操作流程及注意事项
众所周知，
Invitrogen
脂质体
2000
是广大老师所熟知的转染试剂，其特点：转染步骤快速简便
（
1
）
DNA-
阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中，有血清也不怕。
（
2
）转染后不需要除去
Lipofectamine 2000
试剂，无需换培养基。
我们介绍一下
Invitrogen
脂质体
2000
的操作流程、注意事项等。
一、
操作流程
事实上
Lipofectamine
系列产品操作流程都是又快又简单：
稀释
DNA
以及
Lipofectamine
2000
，
混合
2
种稀释液保温
20
分钟，加入培养细胞中孵育
24
－
96
小时检测结果。下面是
Invitrogen
提供的详细流程和注意事项。
1
、转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为
90%
。细胞铺板在
0.5ml
含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2
、
对于每孔细胞，
使用
50
μ
l
无血清培养基
（如
OPTI-MEM
Ⅰ培养基）
稀释
0.8
μ
g-1.0
μ
g
DNA
。
3
、对于每孔细胞，使用
50
μ
l OPTI-MEM
Ⅰ培养基稀释
1
μ
l-3
μ
l LIPOFECTAMINE 2000
试剂。
Lipofectamine
2000
稀释后保温
5
分钟（在
30
分钟内同稀释的
DNA
混合。保温时间过长会降低
活性。）
注意：
即使
Lipofectamine
2000
使用
OPTI-MEM
Ⅰ稀释，
细胞也可以使用
D-MEM
培养。
如果
D-MEM
做为
Lipofectamine 2000
的稀释液，必须在
5
分钟内同稀释的
DNA
混合。
4
、混合稀释的
DNA
（第
2
步）和稀释的
Lipofectamine 2000
（第
3
步）。在室温保温
20
分钟。
注意：
溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持
6
小时稳定。
5
、直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
注意：
如果在无血清条件下转染，使
用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。
在加入复合物前移去生长培养基，
替换为
0.5ml
无血
清培养基。
6
、在
37
℃，
5
％的
CO2
中保温
24-48
小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在
4-5
小时后更
换生长培养基也不会降低转染活性。
7
、在细胞中加入复合物
24-72
小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活
性。
这依赖于细胞类型和启动子活性。
对稳定表达，
在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基
中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
8
、对于
96
孔板培养，不再需要提前一天进行细胞铺板，而可以直接在平板中制备复合物，
然后
将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，
这样进一步减少了转染时间。
这种改进步骤已经过
293-H
，
293-F
，
COS-7L
和
CHO
细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的
高效转染使得
Lipofectamine 2000
非常适用于
96
孔板的高通量转染，比如
cDNA
文库的筛选和
蛋白瞬时表达。
二、适用细胞株范围
不同的转染试剂所适用的细胞株范围各不相同。
一个实验室常常会用到不止一种细胞株，
甚至是
比较特殊的细胞株。
一个转染试剂所适用的细胞株越多，
当然越受用户的欢迎。
根据
Invotrogen
网站的资料，
Lipofectamine 2000
已经证实可用于高达
517
种细胞株，覆盖了相当广的范围。
要看看
Lipofectamine 2000
是否适用于你现有的细胞株，可以访问以下
Invitrogen
网址
（
http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageID=9559&fuseaction=CellLines.dsp_search
Range
）
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脂质体
2000
的操作流程及注意事项
发布日期：
2010-11-13 21:29:08
浏览次数：
338
Invitrogen
脂质体
2000
的操作流程及注意事项
众所周知，
Invitrogen
脂质体
2000
是广大老师所熟知的转染试剂，其特点：转染步骤快速简便
（
1
）
DNA-
阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中，有血清也不怕。
（
2
）转染后不需要除去
Lipofectamine 2000
试剂，无需换培养基。
我们介绍一下
Invitrogen
脂质体
2000
的操作流程、注意事项等。
一、
操作流程
事实上
Lipofectamine
系列产品操作流程都是又快又简单：
稀释
DNA
以及
Lipofectamine
2000
，
混合
2
种稀释液保温
20
分钟，加入培养细胞中孵育
24
－
96
小时检测结果。下面是
Invitrogen
提供的详细流程和注意事项。
1
、转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为
90%
。细胞铺板在
0.5ml
含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2
、
对于每孔细胞，
使用
50
μ
l
无血清培养基
（如
OPTI-MEM
Ⅰ培养基）
稀释
0.8
μ
g-1.0
μ
g
DNA
。
3
、对于每孔细胞，使用
50
μ
l OPTI-MEM
Ⅰ培养基稀释
1
μ
l-3
μ
l LIPOFECTAMINE 2000
试剂。
Lipofectamine
2000
稀释后保温
5
分钟（在
30
分钟内同稀释的
DNA
混合。保温时间过长会降低
活性。）
注意：
即使
Lipofectamine
2000
使用
OPTI-MEM
Ⅰ稀释，
细胞也可以使用
D-MEM
培养。
如果
D-MEM
做为
Lipofectamine 2000
的稀释液，必须在
5
分钟内同稀释的
DNA
混合。
4
、混合稀释的
DNA
（第
2
步）和稀释的
Lipofectamine 2000
（第
3
步）。在室温保温
20
分钟。
注意：
溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持
6
小时稳定。
5
、直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
注意：
如果在无血清条件下转染，使
用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。
在加入复合物前移去生长培养基，
替换为
0.5ml
无血
清培养基。
6
、在
37
℃，
5
％的
CO2
中保温
24-48
小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在
4-5
小时后更
换生长培养基也不会降低转染活性。
7
、在细胞中加入复合物
24-72
小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活
性。
这依赖于细胞类型和启动子活性。
对稳定表达，
在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基
中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
8
、对于
96
孔板培养，不再需要提前一天进行细胞铺板，而可以直接在平板中制备复合物，
然后
将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，
这样进一步减少了转染时间。
这种改进步骤已经过
293-H
，
293-F
，
COS-7L
和
CHO
细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的
高效转染使得
Lipofectamine 2000
非常适用于
96
孔板的高通量转染，比如
cDNA
文库的筛选和
蛋白瞬时表达。
二、适用细胞株范围
不同的转染试剂所适用的细胞株范围各不相同。
一个实验室常常会用到不止一种细胞株，
甚至是
比较特殊的细胞株。
一个转染试剂所适用的细胞株越多，
当然越受用户的欢迎。
根据
Invotrogen
网站的资料，
Lipofectamine 2000
已经证实可用于高达
517
种细胞株，覆盖了相当广的范围。
要看看
Lipofectamine 2000
是否适用于你现有的细胞株，可以访问以下
Invitrogen
网址
（
http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageID=9559&fuseaction=CellLines.dsp_search
Range
）
Invitrogen脂质体2000的操作流程及注意事项
众所周知，Invitrogen脂质体2000是广大老师所熟知的转染试剂，其特点：转染步骤快速简便 （1）DNA-阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中，有血清也不怕。 （2）转染后不需要除去Lipofectamine 2000试剂，无需换培养基。 我们介绍一下 Invitrogen脂质体2000的操作流程、注意事项等。 一、操作流程 事实上Lipofectamine系列产品操作流程都是又快又简单：稀释DNA以及Lipofectamine 2000，混合2种稀释液保温20分钟，加入培养细胞中孵育24－96小时检测结果。下面是Invitrogen提供的详细流程和注意事项。 1、转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml 含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2、对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。3、对于每孔细胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000试剂。Lipofectamine 2000稀释后保温5分钟（在30分钟内同稀释的DNA混合。保温时间过长会降低活性。） 注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。如果D-MEM做为Lipofectamine 2000的稀释液，必须在5分钟内同稀释的DNA混合。 4、混合稀释的DNA（第2步）和稀释的Lipofectamine 2000（第3步）。在室温保温20分钟。 注意：溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。 5、直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.5ml无血清培养基。 6、在37℃，5％的CO2中保温24-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。 7、在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。 8、对于96孔板培养，不再需要提前一天进行细胞铺板，而可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H，293-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得Lipofectamine 2000非常适用于96孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。 二、适用细胞株范围 不同的转染试剂所适用的细胞株范围各不相同。一个实验室常常会用到不止一种细胞株，甚至是比较特殊的细胞株。一个转染试剂所适用的细胞株越多，当然越受用户的欢迎。根据Invotrogen网站的资料，Lipofectamine 2000已经证实可用于高达517种细胞株，覆盖了相当广的范围。要看看Lipofectamine 2000是否适用于你现有的细胞株，可以访问以下Invitrogen网址（http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageID=9559&fuseaction=CellLines.dsp_searchRange）