UltraClean?Tissue & Cells DNA Isolation Kit是提取培养细胞、动物组织（如啮齿类动物尾巴)的理想之选。一次可处理1-25mg组织样品或5×106个细胞。提取得到的高质量直接用于PCR扩增、限制性内切酶消化等下游实验。此试剂盒不使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂，对操作人员非常友好和安全。
新鲜或冷冻的样品加入含有裂解液的研磨珠套管进行涡旋振荡击打均质。匀浆加载到硅胶离心柱上。DNA被滤膜吸附，杂质洗涤掉。纯净的DNA洗脱重悬于DNA-free的Tris缓冲液中。整个操作需要用到微型离心机、涡旋混合仪和适配器。
几种不同试剂盒提取动物组织基因组DNA所需要的时间对比。蓝色柱形条代表不含组织均质裂解时间，红色柱形条代表包含组织均质裂解时间。
加样量及样品粘性
根据组织样品类型的不同，可以加样1-25mg。对已知基因组DNA含量很高的组织（如肝脏、脾脏，培养的细胞不超过5×106）可以减少加样量。给Spin Filter加样，不要超出其容量。若样品比较粘稠离心无法滤过，请把上清转移到一个干净的Tube管（用户自备）中，加入等体积的TD1，涡旋混匀后，用一个新的Spin Tube再进行离心过滤。而且，可能需要反复加样知道滤完所有上清。接着步骤五继续DNA的提取。
提取石蜡埋植的组织样品
建议用BiOstic? FFPE Tissue DNA Isolation Kit (货号：12250-50)来提取石蜡埋植或福尔马林浸泡的组织样品。创新方法无需使用有机溶剂即可直接溶解组织中的石蜡，获得高质量纯净的基因组DNA，可直接进行下游实验无需进一步纯化。也可以使用BiOstic? Paraffin Removal Reagent (货号：12251-50)配合12334使用，相关操作说明详见12250的说明书。
难提取样品
对于老鼠尾巴、心肌组织、蜱虫或其它昆虫等难提取的样品，每样加20mg/ml蛋白酶K，操作方法如下：
1、加入蛋白酶K（20mg/ml）到装有样品的Dry Bead Tube中。(注意：蛋白酶K建议用量见下表。)
2、把Dry Bead Tube安放在涡旋仪适配器（货号：13000-V1）中，最大转速涡旋振荡10min。
3、60℃孵育30min。
4、10000g离心30s，上清直接转到到Spin Filter中。
组织类型 | 蛋白酶K建议用量 |
柔软组织 | 15μ（可选） |
肌肉和心肌 | 15μl |
老鼠尾巴 | 20μl |
蜱虫 | 20μl |
昆虫 | 20μl |
其它样品研磨方法：
虽然有些样品富含纤维等，质地坚硬难以裂解。但对于大部分样品，使用12334试剂盒提取总基因组DNA，配合涡旋仪和适配器都能获得足够PCR用量的DNA。不过对于心肌、昆虫、蜱虫等为了获得更大量的DNA，可采用下面方法研磨破碎。
? PowerLyzer?珠磨研磨机
对于大多数样品，一次只要30s就能处理24个样品。下表给出研磨建议参数：
组织类型 PowerLyzer使用速度FastPrep或Precellys采用速度 循环数 每个循环时间
组织类型 | PowerLyzer使用速度 | FastPrep或Precellys采用速度 | 循环数 | 每个循环时间 |
柔软组织 | 3500rpm | 6500rpm | 1 | 30s |
肌肉和心肌 | 3500 | 6500 | 2 | 20s |
蜱虫 | 3100 | 6100 | 3 | 20 |
昆虫 | 3100 | 6100 | 3 | 20 |
注意：研磨的时候请不要超出建议值，否则可能会造成Dry Bead Tubes漏液或破裂。
提取组织样品中的微生物DNA
使用的试剂盒：UltraCleanTissue & Cells DNA Isolation Kit 动物组织细胞DNA提取试剂盒
传统组织试剂盒非常适合提取真核细胞DNA，但通常对微生物细胞提取效果不好。微生物细胞更难裂解。所以客户对于我们建议使用UltraCleanTissue & Cells DNA Isolation kit提取感染动物组织细菌或真菌DNA时都会倍感惊讶。MOBIO的UltraClean Tissue & Cells DNA Isolation kit一大优势是采用的珠磨研磨法均质化组织。研磨珠套管带有0.7mm石榴石研磨珠非常适合用于裂解细胞和真菌细胞。动物组织和微生物DNA用这款试剂盒都能提取到。最后用微生物特意引物扩增感兴趣的细菌或真菌DNA即可。
文献
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