供应离心型血液DNA提取试剂…

UltraClean? BloodSpin? DNA Isolation Kit专门设计用于快速提取全血（新鲜、4℃冷藏或冷冻）、袖套细胞、棉拭子或培养细胞的基因组和线粒体DNA。可一次提取200μl 全血、体液或20μl禽血基因组DNA。离心柱法回收的DNA可直接用于PCR扩增。

UltraClean? 硅胶离心柱使用了MOBIO创新的平底离心柱设计，可改善样品处理过程，增加得率。离心柱滤膜与空气气流接触面增加，离心过程可加快样品滤过，整个滤膜能更快甩干。而硅胶技术可在不使用有机溶剂或氯化铯梯度的情况下，能更快更好回收DNA。

   DNA的提取，加入200μl 液体（全血、棉拭子裂解物、细胞或者体液），混入蛋白酶K、高离序液盐增强细胞裂解，让DNA吸附到离心柱滤膜上。水浴10min，然后加入酒精优化DNA吸附到硅胶滤膜的外部条件。滤膜经过蛋白、盐的冲洗后，DNA洗脱到10mM Tris 1mM EDTA pH8.5缓冲液中，可直接用于下游PCR等实验。

硅胶离心柱堵塞

按照说明书操作，加样200μl的人血，硅胶滤膜一般情况下不会发生堵塞。若发生堵塞，可能是以下因素引起的：

• 样品未裂解完全。加入SolutionB1后要充分混匀，蛋白酶K溶液要记得加入，检查消化温度是否合适。

• 样品加样量不要超过200μl人血，禽血不要超过20μl。其它种属动物的血液，若不能确定预期得率和白细胞数量，只100μl血液。

• 采血时要做抗凝可避免血液堵塞。凝固血液不要使用。也可以去掉血块，只使用样品中的液体部分。

   

  低DNA回收率

  200μl的人血预期可获得4-6μg DNA。若样品储存时间过长或多次反复冻融，DNA得率可能会下降。可做以下措施：

• 样品裂解不完全会降低DNA回收率。加入Solution B1后要充分混匀，蛋白酶K溶液要记得加入，检查消化温度是否合适。

• 使用前不要提前混合蛋白酶K溶液和Solution B1，否则蛋白酶K活性会下降。

• 不要略掉Solution B4，滤膜上残留盐分会影响DNA洗脱。

   

  A260/280比值偏低

  DNA纯度应该在1.7-1.9。A260/280比值低于1.6表示有蛋白污染，可能是因为：

• Solution B3的蛋白杂质冲洗要在Solution B4冲洗之前进行。

• 分光光度法检测，要用SolutionB5做空白对照。

文献

• NirmalK. Banda, Stephanie Hyatt, Alexandra H. Antonioli, Jason T. White, MagdalenaGlogowska, Kazue Takahashi, Tod J. Merkel, Gregory L. Stahl, StaceyMueller-Ortiz, Rick Wetsel, William P. Arend, and V. Michael Holers. Role ofC3a Receptors, C5a Receptors, and Complement Protein C6 Deficiency in CollagenAntibody-Induced Arthritis in Mice. J. Immunol., Feb 2012; 188: 1469 – 1478.

• Queipo-Ortuno,M.I., Tena, F., Colmenero, J.D., Morata, P. Comparison Of SevenCommercial DNA Extraction Kits For The Recovery Of Brucella DNA From SpikedHuman Serum Samples Using Real-Time PCR. European Journal of Clinical Microbiology &Infectious. 27(2): 109-114 (2008).

• Chang,J.H., Hampartzoumian, T, Everett, B., Lloyd, A., McCluskey, P.J., Wakefield, D.ChangesIn Toll-Like Receptor (TLR)-2 and TLR4 Expression and Function But NotPolymorphisms Are Associated With Acute Anterior Uveitis. Investigative Ophthalmology& Visual Science. 48(4): 1711-1717 (2007).