血液微生物DNA提取试剂盒(1…

BiOstic? Bacteremia DNA Isolation kit可同时提取血液培养管中的总DNA（宿主和微生物）。最终DNA可用于血液中细菌的检测。此试剂盒使用了抑制因子去除技术（IRT），可去除血液培养过程中添加的抗生素中和剂如木炭。可减少下游PCR、real-time PCR和Rep PCR等手段做DNA分析时发生的抑制现象。

血样接种到BioMerieux BacT/Alert? SA培养瓶培养潜在病原。这类血液培养瓶能中和掉病样中的抗生素让潜在细菌得以生长。当细菌生长到10⁵-10⁶时显示阳性生长反应。但使用BiOstic? Bacteremia DNA Isolation kit提取样品DNA时，MOBIO的专利抑制因子去除技术能去除所有的抑制因子。最终DNA可直接用于安捷伦生物分析仪分析muliplex PCR产物或real-time PCR等灵敏检测方法。

BiOstic?的硅胶离心柱使用了MOBIO创新专利平底离心柱，可大大提高样品的处理过程及得率。离心柱的巧妙设计让冲洗后的滤膜与空气接触面积增大，提高晾干速度。硅胶离心柱技术还能在不使用有机溶剂或氯化铯梯度法的前提下获得更好的核酸回收纯度。

离心收集1.8ml培养血液细胞用于BiOstic? Bacteremia DNA Isolation kit提取。结合2ml MicroBead Tubes和加热裂解微生物细胞释放DNA。MOBIO的抑制因子去除溶液去除掉亚铁血红素和培养基中的PCR抑制因子。血液培养管中的木炭是用于中和血液中的抗生素。试剂盒使用的抑制因子去除技术可去除这些木炭，加入高离序液盐缓冲液和酒精冲洗缓冲液，裂解物吸附到硅胶离心柱上。最终DNA足够浓度可直接用于基因分型或real-time PCR检测分析。

DNA扩增失败

最终DNA的纯度和浓度通常处于合适的范围类，可直接进行PCR扩增无需稀释（A260/2801.7-1.9，A260/230＞1.5）。

若目标生物的PCR扩增失败，请尝试一下建议：

• 人DNAPCR扩增-你的样品中会含有从白细胞中提取到的人基因组DNA。要检查是否含有与PCR抑制因子，可用人基因引物测试样品。

• 阳性对照DNA-要确定目标生物的引物是否正确，体系中因包含肯定能成功扩增的阳性对照。你可以用
  BiOstic? Bacteremia DNA Isolation kit同时提取过夜孵育的细菌沉淀制备阳性对照。

  若同时用BiOstic?Bacteremia DNA Isolation kit提取的阳性对照能成功扩增，而血样的DNAreal-time PCR用特异引物检测失败：

• 确保细菌培养瓶有足够生长时间直到呈现细菌阳性生长指示。不同微生物孵育生长的时间会不一样，感染水平和样品中抗生素的含量也会有影响。

• 使用特异引物检测前，先用通用细菌引物（如，16srRNA引物）扩增。一个样品中可能会存在一种以上微生物。

   

  文献

• Lerner, J. Romano, I. Chmelnitsky, S. Navon-Venezia, R. Edgar, Y. Carmelia.Rectal Swabs Are Suitable for Quantifying the Carriage Load of KPCProducingCarbapenem-Resistant Enterobacteriaceae. Antimicrobial Agents and Chemotherapy p.1474–1479 March 2013 Volume 57 Number 3

• Jeanne M. Marrazzo, Tina L. Fiedler, Sujatha Srinivasan, Katherine K.Thomas, Congzhou Liu, Daisy Ko, Hu Xie, Misty Saracino, and David N. Fredricks.Extravaginal Reservoirs of VaginalBacteria as Risk Factors for Incident Bacterial Vaginosis. The Journal of Infectious Disease, May2012; 205: 1580 - 1588.

• Edward D. Ziga, Todd Druley, and Carey-Ann D. Burnham Herbaspirillum Species Bacteremia ina Pediatric Oncology Patient. J. Clin. Microbiol., Nov 2010; 48: 4320 -4321.