随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用, 体外检测各种细胞因子及抗体方法获得了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子或抗体,但由于游离的抗体或细胞因子的半衰期不同,它们在体液中不断地被代谢或与靶器官结合,而不能确切的反映体内的抗体及细胞因子的水平。80年代,国外的科研工作者根据ELISA技术的基本原理,建立了体外检测特异性抗体分泌细胞(ASC)和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术(ELISpot)。因其具有较高的特异性和敏感性,目前正被国内外广泛应用,对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。
ELISpot法源自ELISA,又突破传统ELISA法,是定量ELISA技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白,它们最大的不同在于:
1. ELISA通过显色反应,在酶标仪上测定吸光度,与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2. ELISpot 也是通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下人工计数斑点或通过分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞,从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。(某些研究不仅要测细胞因子生成量,还需检测分泌此细胞因子的细胞频率)。
3. 由于是单细胞水平检测,ELISpot比ELISA和有限稀释法等更灵敏,能从20万-30万细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。