1:核苷酸掺入效率(processivity)=每次结合事件中掺入dNTP的数目图2:Sso7d蛋白的结构(淡蓝色)及Sso7d蛋白与dsDNA的结合
保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通DNA聚合酶的错配率在2-5X10的5次方碱基/循环数,而高保真DNA聚合酶错配率可达10 的6次方数量级,大大降低了出错的可能。其原理主要是因为高保真DNA聚合酶具有3''到5''核酸外切酶的活性,扩增途中如果产生了错配的碱基,它可以将其切掉,从而保证了扩增的准确性。
PhusionTM 高保真DNA聚合酶的成分:
F-530S Phusion 高保真DNA聚合酶 , 100U
* 1 tube, Phusion DNA聚合酶,2U/ul,50ul
* 1 tube, 5 ×Phusion HF 缓冲液(1×conc.1.5mM MgCl2 ) 1.5ml
* 1 tube ×50 mM MgCl2, 1.5ml
* 1 tube ×DMSO,500 ul
F-530L Phusion 高保真DNA聚合酶 , 500U
* 1 tube, Phusion DNA聚合酶,2U/ul,50ul
* 4 tube, 5 ×Phusion HF 缓冲液(1×conc.1.5mM MgCl2 ) 1.5ml
* 2 tube ×50 mM MgCl2, 1.5ml
* 1 tube ×DMSO,500 ul