M T提取和去除杂蛋白操作规程_来宝网

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M T提取和去除杂蛋白操作规程
发布时间 2007/7/27 点击 1926 次

主体内容：

1、根据公司计划在提取生产的前一天从冷库中领取指定数量的已诱导好了的冻兔肝，放置室温下自然解冻。
2、将解冻了的冻兔肝放在绞肉机旁，当绞肉机接通电源正常工作后，将兔肝绞碎。加入两倍于兔肝体积的PH为8.6、浓度为0.02M的Tris-HCL缓冲液。
3、绞碎后固液混合物放在匀浆器下，根据溶液的粘度，匀浆器打在二档（10000-12000rpm）或三档（13000rpm），在室温下以20-30秒为一次，间隔性的打5-8次，得到匀浆液。
4、将匀浆液装入提取罐，在室温下缓慢搅拌30min.
5、缓慢加入乙醇-氯仿(在搅拌的同时加入和兔肝等体积的乙醇-氯仿1:0.08)，搅拌1分钟，停止搅拌。
6、将变性液离心(4000rpm、30min、4℃)，去沉淀，取上清液，得上清液Ⅰ。
7、将上清液Ⅰ放入加热变性罐，打开蒸汽进汽阀和排水阀，当变性罐夹层的水全都排除后，关闭排水阀。使罐内溶液迅速升温到75℃，立即关闭蒸汽进汽阀，维持5min。然后打开冷水进水阀和冷水排水阀，使之迅速降温至25℃以下。
8、将变性液离心(4000rpm、40min、4℃)，去沉淀，取上清液，得上清液Ⅱ。
9、将所得溶液交下道工序，并将生产批记录交接下一道工序。
10、工序完成后，进行清场处理和卫生打扫（包括环境和各设备的清理）。准备下一批次的生产。
[来源：来宝网]

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