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血清碱性磷酸酶(ALP)测定的常用方法有几种,它们之间有何差别?
发布时间 2007/5/24 点击 7567 次
正常成人血清ALP主要来自肝脏,而来自骨组织的ALP一般少于总活性一
半。其各自含量与年龄密切相关,但也受性别的影响。还可能存在少量的小肠型ALP,特别是血型为分泌型B型或O型的人。
现已知人体含4型ALP同工酶,即肠型(IALP)、胎盘型(PALP)、生殖细胞型(GALP)和非特异组织型(TUALP)ALP。其中非特异组织型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。
[临床意义]
肝胆疾病,尤其是阻塞性黄疸患者,该酶活性显著升高。骨骼疾病时血清ALP活性增高。血清ALP活性测定成为鉴别肝胆疾病和诊断骨质增生不可缺少的指标。
[测定原理]
在碱性条件下,碱性磷酸酶将无色磷酸对硝基苯酚水解为黄色对硝基苯酚,在
405nm测定对硝基苯酚生成的速率,这个速率与血清中ALP活性成正比。反应需要Mg2+作为激活剂。
[常用测定方法]
测定ALP活性受到组织来源、底物类型、反应温度,特别是缓冲液种类的影
响,目前,世界范围内生化试剂主要生产厂家,生产的ALP检测试剂盒的主要差异就在于所使用的缓冲液不同。常用的激活型缓冲液不仅起缓冲作用,并可作为磷酸的受体参与反应,因而能增进酶促反应的速率。激活型缓冲液中,二乙醇胺(DEA)的激活作用比2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)的激活作用更强。因此用不同缓冲液测定的ALP活性,其参考值不同。
不少国家,包括我国,多采用AMP或DEA做缓冲液,但这两类物质不易提纯,
前者常混有5-氨基-3-吖-2,2,5-三甲基乙醇,后者易含一乙醇胺,均对ALP有抑制作用。故日本学者建议采用2-乙氨基乙醇缓冲液,而德国学者建议使用甲基葡萄糖胺缓冲液,此类试剂纯度高,不含抑制ALP活性的物质,可不加螯合剂,其pK值高于DEA。根据所使用的激活型缓冲液不同,常用的检测方法主要有四种:
IFCC推荐方法:AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)缓冲液
正常参考范围:45~130 U/L,37℃
JSCC推荐方法:EAE(2-乙氨基乙醇)缓冲液
正常参考范围:115~359 U/L,37℃
GSCC推荐方法:DEA(二乙醇胺)缓冲液
正常参考范围:80~260 U/L,37℃
DSKG推荐方法(新GSCC方法):MEG(N-甲基-D-葡萄糖胺)缓冲液
正常参考范围:45~130 U/L,37℃
注:作为IFCC推荐的方法,IFCC有关专家也在考虑,ALP测定时所使用的缓冲液是否应该更换。目前SYSMEX公司在国内销售的是采用JSCC推荐方法的检测试剂盒,而采用IFCC推荐方法的检测试剂盒正在办理注册证,近期也将上市
[来源:来宝网]
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