本规程载人的化学检定项目，如采用其他方法测定，其结果与本规程所列应无显著差异。如遇制品质量存在疑问时，其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。
标准液的配制与标定方法参看最新版《中国药典》。
PH值测定（电位法）
1 仪器校准（定位）用标准缓冲溶液
应使用分析纯标准缓冲物质配制。
1.1 0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液
称取于115±5℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）10.12±0.01g，溶于蒸馏水，并稀释至1000ml。
1.20.025mol/L磷酸氢二钠和0.025mol/L磷酸二氢钾混合溶液
分别称取在115±5℃干燥2～3小时的磷酸氢二钠（Na2HPO4）3.53±0.01g和磷酸二氢钾（KH2PO4）3.39±0.01g，溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。
1.30.01mol/L硼砂溶液
称取硼砂（Na2B4O7·10H2O）3.80±0.01g（注意：不能烘！），溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。
标准缓冲溶液于0～50℃的标准pH值
|
温度(℃) |
0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾 |
0.025mol/L混合磷酸盐 |
0.01mol/L硼砂 |
|
0 |
4.01 |
6.98 |
9.46 |
|
5 |
4.00 |
6.95 |
9.39 |
|
10 |
4.00 |
6.92 |
9.33 |
|
15 |
4.00 |
6.90 |
9.28 |
|
20 |
4.00 |
6.88 |
9.23 |
|
25 |
4.00 |
6.86 |
9.18 |
|
30 |
4.01 |
6.85 |
9.14 |
|
35 |
4.02 |
6.84 |
9.10 |
|
40 |
4.03 |
6.84 |
9.07 |
|
45 |
4.04 |
6.83 |
9.04 |
|
50 |
4.06 |
6.83 |
9.02 |
2 操作
使用玻璃电极酸度计测定，操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对，相差不得超过0.05。
固体总量测定
甲、105℃干烤法
1 操作
精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中，置105℃烤箱中烘至恒重。
2 计算
烘干后样品重量
样品固体总量%（g/ml）= ──────────×100
样品ml数
乙、50℃干烤法
1 操作
精确量取1mlA群脑膜炎球菌多糖菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶（2×2.5cm）中，置50℃干燥箱中，干燥至恒重。
2 计算
同105℃干烤法。
半微量定氮法
1 试剂
1.1 硫酸
化学纯，比重1.84。
1.2 消化剂
硫酸铜（CuSO4·5H2O）1份与硫酸钾（K2SO4）10份共同研细混匀即成。
1.3 12.5mol/L氢氧化钠液
取氢氧化钠500g，加蒸馏水至1000ml，摇匀。
1.4 2%硼酸吸收液
硼酸20g加蒸馏水使溶解成1000ml，加混合指标剂10ml，摇匀。
1.5 混合指示剂
0.2%（g/ml）溴甲酚绿酒精溶液5份与0.1%（g/ml）甲基红酒精溶液2份混合配成。
1.6 标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸溶液。
2 操作
2.1 消化
准确量取一定体积样品（含氮量在1～2mg左右）于凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，浓硫酸1.0ml进行消化，至澄明蓝绿色，继续消化约60分钟，同时做空白。
2.2 蒸馏与滴定
取10ml硼酸吸收液于100ml三角瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内，用蒸馏水洗定氮瓶3～4次，洗液亦移入蒸馏器内，再加5ml 12.5mol/L氢氧化钠溶液，然后进行蒸馏，待接收液总体积约35～50ml,将冷凝管末端取出液面，让蒸汽冲洗约1分钟，再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，接收液用标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸进行滴定，至溶液显著变色。
3 计算
（样品滴定数– 空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14
样品总氮含量(mg/ml)────────────────────────
样品ml数
附注
1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟。
2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。
蛋白质含量测定
甲、钨酸沉淀法
1 试剂
1.110%钨酸钠溶液
取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。
1.2 0.33mol/L硫酸溶液
量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至100ml。
1.3 0.145mol/L氯化钠溶液
取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。
2 操作
2.1 钨酸除蛋白质
精确量取样品2ml加蒸馏水14ml，加10%钨酸钠2ml，0.33mol/L硫酸2ml，摇匀，静置30分钟过滤。
2.2 精确量取样品1ml，用0.145mol/L氯化钠溶液准确稀释至每ml含氮量1mg左右。
2.3 精确量取稀释液1ml及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。
3 计算
样品总氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×稀释倍数
样品非蛋白氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×12
样品蛋白质含量(g/ml)=（总氮-非蛋白氮）×6.25×1/10
附注
1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持1%。
2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。
乙、三氯醋酸沉淀法
1 2%三氯醋酸溶液
取三氯醋酸12g，加蒸馏水溶解至100ml。
2 操作
精确量取一定体积的样品（含蛋白质6～12mg左右，于10ml尖底离心管中，加等体积的12%三氯醋酸混匀，放置半小时后3000r/min离心30分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml（分数次）洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。
3 计算
（样品滴定数– 空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14
样品蛋白质含量(mg/ml)──────────────────────×6.25
样品ml数
丙、微量法（Lowry法）
1.试剂
1.1 4%碳酸钠溶液
取4g碳酸钠，加蒸馏水溶解成100ml。
1.2 0.2mol/L氢氧化钠溶液
取0.8g氢氧化钠加蒸馏水，溶解成100ml。
1.3 0.04mol/L硫酸铜溶液
取1gCuSO4·5H2O加蒸馏水溶解成100ml。
1.42%酒石酸钾（或0.1mol/L酒石酸钠）
取2g酒石酸钾（或酒石酸钠），加蒸馏水溶解成100ml。
1.5 碱性铜液
临用前取试剂1.1和1.2各25ml，试剂1.3和1.3各0.5ml混匀配制而成。
1.6 酚试剂
称取100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25g钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)，置1500ml烧瓶中，加入700ml蒸馏水，50ml 85%磷酸及100ml浓盐酸，上联回流管（使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞）微沸加流10小时，取下回流管，加入150g硫酸锂，50ml蒸馏水，几滴溴液，煮沸约15分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。
酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度，即为酚试剂。
1.7 标准蛋白质溶液
取牛血清白蛋白标准品（由检定所统一标定发给），准确稀释至1mg/ml(含0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml于25ml容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标准蛋白质溶液（100μg/ml）。
2 操作
2.1 样品
精确量取一定体积样品（含蛋白质50μg左右）于试管中，加5ml碱性铜液，混匀，于室温放置10分钟，快速加入0.5ml酚试剂，摇匀，于室温放置30分钟，用650nm波长或红色滤光片比色（呈色后，如发现混浊，经3000r/min离心15分钟后再比色）。
2.2 标准曲线
精确量取标准蛋白质溶液（100μg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。
3 计算
从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之ml数A；
A×0.01%
样品蛋白质含量（g/ml）= ────────
样品ml数
附注
检测A群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取1ml（含抗原3～10mg）。
硫酸铵含量测定
1 试剂
1.1 1mol/L氢氧化钠液
取化学纯氢氧化钠20g，加蒸馏水溶解成500ml。
2 操作
2.1 除蛋白质
方法同蛋白质含量测定。
2.2 蒸馏
精确量取除蛋白质滤液10ml于凯氏蒸馏器内，加1mol/L氢氧化钠1ml，加少量蒸馏水，按半微量定氮法进行蒸馏、滴定。
3 计算
样品硫酸铵含量%（g/ml）=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×4.715×1/10
氯化钠含量测定
1 试剂
1.1 0.1mol/L硝酸银溶液
取硝酸银17g，加蒸馏水溶解成1000ml。
1.2 标准0.05mol/L硫氰酸铵溶液
1.3 5.5mol/L硝酸
1.4 8% 硫酸铁铵指示液
取8g硫酸铁铵，加蒸馏水溶解成100ml。
1.5 饱和高锰酸钾
取高锰酸钾6.5g，加蒸馏水溶解成100ml。
2 操作
2.1 精确吸取样品1ml，准确加入0.1mol/L 硝酸银溶液5ml ，混匀（蛋白质含量高者加2ml饱和高锰酸钾），加10ml硝酸 (5.5mol/L) ，直接加热消化至溶液澄清为止。待冷，加蒸馏水50ml,8%硫酸铁铵指示液1ml,用标准 0.05mol/L硫氰酸铵溶液滴定至溶液呈淡棕红色，振摇匀仍不退色，即为终点。
2.2 空白试验
准确量陬0.1mol/L硝酸银溶液 5ml，加硝酸 (5.5mol/L)10ml，可不消化，其余操作同样品。
3 计算
样品氯化钠含量%(g/ml)＝（空白滴定数－样品滴定数）×硫氰酸铵mol/L×5.845
钠离子含量测定（火焰光度法）
1 试剂
标准钠溶液：精确称取于110℃干燥至恒重的NaCl2.9227g,用双蒸水溶解并稀释至1000ml, 为500mmol/L标准钠溶液。
2 操作
2.1 样品
精确量取样品0.5ml于 50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计，589nm波长（或黄色滤光片）测其透光度。
2.2 标准曲线
精确量取标准钠溶液0.9、1.1、1.3、1.5、1.7ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钠含量分别为0.9、1.1、1.3、1.5、1.7mmol/L，其余操作同样品。
3 计算
由标准曲线上查出稀释后样品钠含量为a mmol/L 。
样品钠含量(mmol/L)=A×100
钾离子含量测定（火焰光度法
1 试剂
标准钾溶液：精确称取于110℃干燥至恒重的 KCl 0.3728g，用双蒸水溶解并稀释至500ml ，为10mmol/L标准钾溶液。
2 操作
2.1 样品
精确量取样品2ml 于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计769nm波长（或红色滤光片）测其透光度。
2.2 标准曲线
精确量取标准钾溶液0.15、0.30、0.45、0.60、0.75ml 于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钾含量分别为0.03、0.06、0.09、0.12、0.15mmol/L，其余操作同样品。
3 计算
由标准曲线上查出稀释后样品钾含量为Ammol/L 。
样品钾含量(mmol/L)=A×25
枸橼酸离子含量测定
1 试剂
1.1 标准枸橼酸钠浓溶液
精确称取枸橼酸钠(Na3C6H标准5O7·2H2O)0.5882g,加蒸馏水溶解，并准确稀释至100ml ，为20mmol/L 枸橼酸钠液。
1.2 标准枸橼酸钠溶液
精密量取标准枸橼酸钠浓溶液5ml，用5%三氯醋酸准确稀释至50ml，为2mmol/L枸橼酸钠标准液。
1.310%三氯醋酸：称取三氯醋酸10g，用蒸馏水稀释至100ml。
1.45%三氯醋酸：称取三氯醋酸5g，用蒸馏水稀释至100ml。
1.5 砒啶(A·R)。
1.6 醋酸酐(A·R)。
2 操作
2.1 样品
精确量取0.5ml样品，加 4.5ml 蒸馏水，加5ml10%三氯醋酸，混匀，置60℃水浴 5分钟，离心去沉淀。精确量取1ml上清液于25ml玻塞试管中，加1.3ml吡啶，混匀，加5.7ml 醋酸酐，立即混匀并置于31℃水浴，准确培育35分钟后，于 425nm波长下测 OD值，同时做空白试验：取1ml 5%三氯醋酸代替1ml去蛋白后样品上清液，其余操作同样品。
2.2 标准曲线
精确量取标准枸橼酸钠溶液0.0、0.25、0.50、0.75、1.0ml,分别加5%三氯醋酸1.0、0.75、0.5、0.25、0.0ml （其相应的枸橼酸钠离子含量为0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol/l ），其余操作从加1.3ml吡啶开始同样品。可得一标准曲线。
3 计算
由标准曲线查得样品稀释液相当标准枸橼酸离子Ammol/L。
样品枸橼酸离子含量(mmol/L)=A×20
亚硫酸氢钠含量测定
1 试剂
1.1 0.1mmol/L碘液
1.2 标准0.1mmol/L硫代硫酸钠液
1.3 0.5%淀粉指示剂
取可溶性淀粉0.5g，加蒸馏水 5ml搅匀后，缓缓倾入100ml沸蒸馏水中，随加随搅拌，煮沸，至适成稀薄的半透明液，放置使沉淀，倾取上层清液（配制时可加适当的防腐剂）。
1.4 6mol/L盐酸
2 操作
精确量取脑炎疫苗5~ 10ml 或一定体积亚硫酸氢钠液（含亚硫酸氢钠2.5mg左右）于碘瓶中，精确加入0.1mol/L碘液20ml，放置 5分钟，沿瓶壁加6 mol/L盐酸2ml，摇匀，用标准0.1 mol/L硫代硫酸钠液滴定至溶液呈浅黄色，加0.5% 淀粉指示剂约0.5ml，滴定至蓝色消失，同时做空白。
(空白滴定数-样品滴定数)×硫代硫酸钠mol/L×5.203
样品亚硫酸氢钠含量%（g/ml）=─────────────────────
样品ml数
附注
如测定样品为亚硫酸氢钠液，只需根据其浓度和取样量，在测定时适当增加0.1mol/L碘液的用量即可。
氢氧化铝（或磷酸铝）含量测定
甲、滴定法
1 试剂
1.1 0.05 mol/L EDTA标准液。
1.2 标准0.025 mol/L锌液。
取标准0.05mol/L锌液稀释。
1.3 Ph4.5醋酸铵缓冲液
称取醋酸铵77.1g，溶于适量的蒸馏水中，加冰醋酸58ml, 稀释至1000ml。
1.40.1%二甲酚橙指示剂。
1.5 0.95 mol/L 磷酸
量取磷酸6ml，稀释至 100ml。
2 操作
精确量取吸附精制类毒素适量（含铝1～10mg），置 250ml三角瓶中，加 0.95mol/L 磷酸1.5ml，使完全溶解。必要时于水浴加温（难于溶解时尚可适当增加磷酸量）。加0.05 mol/L EDTA10ml, Ph4.5 醋酸铵缓冲液10ml，于沸水浴中加热10 分钟，冷至室温加0.1%二甲酚橙 1ml，用 0.025 mol/L锌标准液进行滴定，当溶液由亮黄转变为橙色，即为终点。同时做空白试验。
3 计算
(空白滴定数-样品滴定数)×标准锌液mol/L×78.01
样品氢氧化铝含量(mg/ml)=───────────────────────
样品ml数
(空白滴定数-样品滴定数) ×标准锌液mol/L×121.95
样品磷酸铝含量(mg/ml)= ────────────────────────
样品ml数
(空白滴定数-样品滴定数) ×标准锌液mol/L×26.98
样品铝含量(mg/ml)= ────────────────────────
样品ml数
乙、比色法
1 试剂
1.1 0.95mol/L磷酸
取磷酸6ml ，稀释至100ml。
1.2 1.5mol/L盐酸
1.31.2mol/L盐酸
1.4 0.2%铝试剂溶液
1.51.3mol/L醋酸铵溶液
1.6 标准铝溶液
精确称取钾明矾[KAl(SO4)2·12H2O0.3518g, 加1.5mol/L HCl 8ml ，加蒸馏水到1000ml，为含铝20μg/ml的标准液。
2 操作
2.1 样品
精密量取吸附制品 1ml (含铝0.5～1mg)于50ml 容量瓶中，加0.95mol/L 磷酸1.5ml,使完全溶解（必要时于水浴加温），用水稀释至刻度。
取稀释样品1ml于 25ml带塞刻度试管中，加1.2mol/L 盐酸1ml, 加水15ml,0.2% 铝试剂1ml，摇匀，加1.3mol/L醋酸铵溶液5ml,加水至25ml, 摇匀，放置15 分钟，用530nm波长比色。
2.2 标准曲线
取标准铝溶液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25ml于25ml带塞刻度试管中，铝含量分别为0、5、10、15、20、25μg，其余操作同样品管。绘制标准曲线。
3 计算
由标准曲线查出铝含量为Aμg。
Al(OH)3(mg/ml)=A×2.8918×50/1000
Al(PO4)(mg/ml)=A×4.52×50/1000
附注
边缘制品以滴定法为准。
游离甲醛测定
1 试剂
1.1 复红亚硫酸试剂
1.1.1 取碱性复红4.5g 于3000ml三角瓶中加蒸馏水1500ml,振摇或加温使复红全部溶解，待冷后，加10g 亚硫酸钠，摇匀，静置5～10分钟，再加入40ml 3mol/L硫酸，摇匀，以橡皮塞塞紧瓶口，放置过夜，如有颜色，加骨炭5～10g迅速摇匀，以布氏漏斗快速抽滤。
1.1.2 试剂之SO2含量可控制在28～48mmol/L(SO2含量过多可通空气驱除之，过少可通入SO2)。
SO2含量测定：吸取复红亚硫酸试剂10ml于三角瓶内。加蒸馏水20ml，0.5%淀粉指示剂5ml，用0.1mol/L碘液滴定至呈浅蓝色。
计算：SO2mmol/L=50×碘液ml数×碘液mmol/L
1.2 混合酸
量取蒸馏水783ml于烧杯内，缓缓注入42ml盐酸，175ml硫酸，混匀。
1.3 标准甲醛溶液
为0.005%(g/ml)甲醛溶液。
精确量取已标定的甲醛溶液Vml，于500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，临用时10倍稀释。
500×0.05
V= ─────────────
标定甲醛溶液含量%（g/ml）
2 操作
2.1 样品
精确量取样品1ml，用蒸馏水稀释至甲醛含量在0.003%(g/ml)左右。取稀释液2ml于50ml比色管中加蒸馏水到5ml，加10ml复红试剂，10ml混合酸，摇匀，在25℃放置3小时，用590nm波长比色。
2.2 标准曲线
精确量取0.005%(g/ml)标准甲醛溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置于50ml比色管中，加蒸馏水至总体积为5ml，其余操作同样品。可得一标准曲线。
3 计算
从标准曲线查出样品相当标准甲醛溶液之ml数A。
样品游离甲醛含量%（g/ml）=A×0.005×稀释倍数
附注
1.标准液和样品与复红试剂的显色时间，有时不一致，测定时，显色慢者应酌情早加复红试剂。
2.样品中如含有酚红，标准管中应予以校正。
3.可做限度测定。
苯酚含量测定
1 试剂
1.1 0.02mol/L溴液
取0.56g溴酸钾，加3g溴化钾，加蒸馏水溶解成1000ml。
1.2 25%碘化钾溶液
取碘化钾25g，加蒸馏水溶解成100ml。
1.3 标准0.02mol/L硫代硫酸钠溶液
取标准0.1mol/L硫代硫酸钠溶液准确稀释5倍。
1.4 6 mol/L盐酸溶液
1.5 淀粉指示剂
取可溶性淀粉0.5g，加蒸馏水5ml，搅匀后，缓缓倾入100ml的沸水中，随加随搅拌，煮沸，至适成稀薄的半透明液，放置，俟沉淀，倾取上层清液（配制时可加适当的防腐剂）。
1.6 0.17 mol/L硫酸锌溶液
取硫酸锌5g加蒸馏水溶解成100ml。
1.7 饱和氢氧化钡溶液
取氢氧化钡[Ba(OH)2·8H2O5.6g，加蒸馏水溶解成100ml。
1.8 0.5%酚酞指示剂
取酚酞0.5g，加乙醇100ml,使溶解即得。
2 操作
2.1 菌苗类样品
精确量取样品1ml于碘瓶中，加入蒸馏水约50ml，精确加入0.02mol/L溴液15～25ml（样品含苯酚量0.3%～0.5%加25ml，小于0.3%则加15ml），沿瓶壁加入盐酸（6mol/L）10ml，摇匀，密塞，在暗处置30分钟后，加25%碘化钾2ml于碘瓶颈口，稍启瓶塞，使流下，密塞，摇匀。以少量蒸馏水洗瓶颈，用标准0.02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈浅黄色，加淀粉指示剂约0.5ml，滴定至蓝色消失。同时做空白试验。
2.2 人胎盘血丙种球蛋白及疫苗类样品
精密量取除蛋白（方法同蛋白含量测定钨酸除蛋白法）后滤液5ml于碘瓶中，其余操作同2.1项。
2.3 人胎盘组织液
精确量取样品5ml于50ml容量瓶内，加适量蒸馏水，加0.5%酚酞指示剂2滴，加5%硫酸锌溶液2ml，饱和氢氧化钡溶液约2.5ml（加至溶液呈粉红色），加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，过滤。精确量取滤液5ml于碘瓶中，其余操作同2.1项。
3 计算
3.1 菌苗类样品
苯酚含量%（g/ml）=（空白滴定数-样品滴定数）×硫代硫酸钠mol/L×1.569
3.2 人胎盘血丙种球蛋白（或人胎盘组织液）及疫苗类样品
苯酚含量%（g/ml）=（空白滴定数-样品滴定数）×硫代硫酸钠mol/L×1.569×2
附注
1.蛋白类制品由于除蛋白后滤液仍含有小分子物质，对苯酚含量测定有干扰，使结果偏高，边缘制品可用蒸馏法，取除蛋白滤液5ml于凯氏蒸馏器内，接受液为0.02mol/L溴液15～25ml，蒸馏约20分钟后其余操作同上。
2.可做限度测定。
硫柳汞及硝酸汞苯含量测定
1 试剂
1.1 0.05%双硫腙浓溶液
称取纯净双硫腙50mg，溶于100ml氯仿中，保存于冷暗处。
1.2 0.00125%双硫腙滴定液
临用时取0.05%双硫腙浓溶液2.5ml，用四氯化碳稀释至100ml。
1.3 浓硫酸
1.48.0mol/L硝酸溶液
1.5 20%盐酸羟胺溶液
1.6 标准汞浓溶液
精确称取于H2SO4干燥器干至恒重的氯化高汞（HgCl2分析纯）0.1354g，用0.5mol/L H2SO4溶解并准确稀释至100ml，为1mg汞/ml溶液。
1.7 标准汞溶液（50μg汞/ml）
精确量取标准汞浓溶液5ml，用0.5mol/L H2SO4准确稀释至100ml。
2 操作
2.1 消化
精确量取样品（含汞约50μg）于150ml圆底磨口烧瓶（附长40cm回流管）中，加浓硫酸2ml，5.5mol/L硝酸0.5ml，电炉上加热回流15分钟（或于3×24cm试管中，加盖，于85～ 90℃水浴加热1小时），冷却后加蒸馏水40ml，加20%盐酸羟胺5ml。
2.2 滴定
将上述样品用40ml水分数次冲洗入125ml分液漏斗中，用0.00125%双硫腙滴定液滴定，开始时每次可加入2ml左右，以后逐渐减少，至每次0.5ml，最后还可少至0.2ml。每次加入滴定液后，振摇10秒钟，静置分层，弃去四氯化碳层，继续滴定，直至双硫腙液的绿色不变，即为终点。
抗毒素及丙种球蛋白样品用水浴消化法滴定时会出现少量絮状物，但不影响结果。
2.3 双硫腙滴定液的标化
精确量取标准汞溶液1ml于125ml分液漏斗中，加浓硫酸2ml，加蒸馏水80ml，20%盐酸羟胺5ml，用双硫腙滴定液滴定，操作同上。
3 计算
0.050×2.04 100
硫柳汞含量%（g/ml）=样品滴定数×────────×────────
标准汞液滴定数 样品ml数×1000
0.050×1.58 100
硫酸汞苯含量%（g/ml）=样品滴定数×────────×────────
标准汞液滴定数 样品ml数×1000
附注
可做限度测定
氯仿含量测定
1 试剂
1.1 乙醚
不应含过氧化物，否则应加硫酸亚铁蒸馏。
1.2 20%氢氧化钠溶液
取氢氧化钠100g，加蒸馏水至500ml。
1.3 碱性吡啶
20%氢氧化钠溶液2份，加吡淀5份，振摇至呈硷性，放置分层，取上层液（此液需临时配制，如显红色，吡啶需重蒸馏）。
1.4 95%乙醇
1.5 标准氯仿液
精密量取氯仿1ml于100ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，为1%氯仿溶液。临用前用蒸馏水准确稀释10倍，为0.1%(ml/ml)氯仿标准液。
2 操作
2.1 样品
精确量取样品1ml加蒸馏水4ml。精确量取样品稀释液0.5ml于玻塞试管中，加乙醚18ml，猛烈振摇3分钟，静置。于刻度玻塞试管中加5ml碱性吡啶。加5ml乙醚提取液，混匀，置80℃水浴中加热8分钟，取出后用水冷却，加蒸馏水至12ml，充分振摇，静置分层，倾去上层液，用绿色滤光片比色。
2.2 标准曲线
精确量取0.1%氯仿标准液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，各管加蒸馏水至0.5ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。
3 计算
由标准曲线查得样品稀释液相当标准氯仿液之ml数A。
样品氯仿含量=A%（ml/ml）
附注
1.配制碱性吡啶的氢氧化钠须不含碳酸钠，否则有混浊现象。
2.可做限度测定
费休（K.Fischer）氏水分测定法
1 试剂
1.1 无水吡啶
取吡啶200ml，置干燥的蒸馏瓶中，加苯40ml，加热蒸馏，收集114～116℃蒸馏出的吡啶，含水量应在0.1%以下。
1.2 无水甲醇
取甲醇1000ml，于干燥蒸馏瓶中，加金属镁约15g与二氯化汞0.4g（或碘0.5g）回流2～4小时，然后蒸馏（蒸馏仪器均需干燥），收集64～65℃蒸馏出的甲醇，含水量应在0.05%以下。
1.3 二氧化硫
工业用，如无二氧化硫可用硫酸及亚硫酸钠配制。
Na2SO3+H2SO4→Na2SO4+H2SO3
H2SO3→H2O+SO2
按此反应根据SO2之需要量计算亚硫酸钠及硫酸之用量，将亚硫酸钠置于瓶中，加少量水，缓缓加入硫酸，将生成之二氧化硫通过浓硫酸洗气瓶，再通入费休氏试剂瓶中。
1.4 费休氏试剂
取干燥的1000ml玻璃容器，加入碘42.33g与无水吡啶133.3ml，加塞，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇333.3ml，称定重量，将此瓶置冰浴中，用密闭装置导入经浓硫酸洗气瓶脱水的二氧化硫直至重量增加32g为止，密封避光保存。
1.5 标准水的制备与标化
1.5.1 制备
于干燥无水的50ml容量瓶中，精密称取0.4g左右双蒸水，用无水甲醇稀释至刻度，密封保存。
1.5.2 标化
精密量取标准水1ml与制备标准水用的无水甲醇5ml分别置于干燥带塞的玻瓶中，用费休氏试剂滴定至溶液呈棕黄色。
1.5.3 计算
称取水重为Amg。
1ml标准水所需费休氏试剂为Bml。
5ml无水甲醇所需费休氏试剂为Cml。
每ml费休氏试剂相当于水的mg数为N=A/50 / B-C/5
1ml标准水之含水量（mg）=N×B
2 操作
2.1 精密称取干燥制品0.1～0.5g于干燥带塞的玻瓶中，加无水甲醇5ml（按取样量情况可酌情减少甲醇加量），不断振摇，用费休氏试剂滴定至棕黄色，经振摇1分钟不退色，即为终点。同时取无水甲醇5ml作空白试验。
2.2 费休氏试剂标化
精密量取标准水1ml于干燥带塞的玻瓶中，用费休氏试剂滴定至终点。
1ml标准水含水量（mg）
费休氏试剂效价N= ────────────
费休氏试剂滴定数
3 计算
（样品滴定数-空白滴定数）×N 1
样品水分含量%（g/g）= ────────────────×──
样品重量 10
附注
1．配制试剂及测定样品用的全部仪器均应干燥至无水。
2．布氏菌病活菌苗及鼠疫活菌苗等制品能在费休氏试剂中溶解，可不用加无水甲醇提取。
3．空气中湿度大，对水分测定有影响，取样时应备有防湿装置。相对湿度应30%以下。
4．有条件可采用卡氏水分测定仪测定。
5．如样品中含有干扰物质，可采用五氧化二磷真空低温干燥法测定。
5.1 试剂
五氧化二磷（工业用）。
5.2 操作
取制品0.2～1.0g置于已干燥至恒重的称量瓶中，加盖，精确称定重量（称量瓶中样品厚度应在5mm以下），放入五氧化二磷干燥器中，打开瓶盖，于60℃将干燥器抽真空至133Pa以下，干燥至恒重。干燥完毕应缓慢通入经浓硫酸脱水的干燥空气。
5．3 计算
样品水分含量%（g/g）=干燥失重/样品重量×100
人白蛋白吸收度测定
1 仪器
1．1 分光光度计（有403nm波长）。
1．2 径长1cm的吸收池。
2 操作
精确量取样品1.0ml，用蒸馏水或0.15mol/L氯化钠准确稀释至1%蛋白质溶液，置吸收池中，在光路1cm，波长403nm处用分光光度计测定。
人白蛋白残留铝离子会计师测定（铝试剂法）
1 试剂
1.1 盐酸（1∶9）
10ml浓盐酸加90ml蒸馏水。
1.2 0.2%铝试剂溶液
0.2g铝试剂加100ml蒸馏水溶解。
1.3 10%醋酸铵溶液
称取10g醋酸铵（AR），加蒸馏水溶解并稀释至100ml。
1.4 准铝溶液（10μg铝/ml）
精密称取明矾[KAl（SO4）2·12H2O（AR，无风化）0.3518g，加1.5mol/l HCl8ml，加蒸馏水到500ml，为40μg铝/ml的标准浓溶液。临用时精确量取2.5ml标准铝浓溶液于10ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，为10μg铝/ml标准液。
1.5 4mol /L NaOH溶液
称取40g NaOH(A.R)，加蒸馏水溶解并稀释至250ml。
1.60.5mol /L NaOH溶液
取50ml 4mol /L NaOH加蒸馏水至400ml。
1.70.1mol /L HCl溶液
1ml浓HCl（A.R）加蒸馏水至120ml。
取溴麝香草酚蓝0.1g,加0.05mol/L NaOH3.2ml,溶解，再加水衡稀释至200m。
2 操作
2.1样品
精密量取1ml样品于凯氏消化瓶内，加1ml浓H2SO4于电炉上消化。从浓的白烟生成到白烟基本消除，再继续消化15分钟，稍冷，向消化瓶中另入适量H2O2，于电炉上继续消化至无气泡生成，消化液呈无色透明。待冷后，用4mol/LNaOH中和消化液（10%白蛋白加5ml4mol/LNaOH）。然后将消化液转移至10ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度。
取2ml稀释液于25ml带塞比色管中（取2管）。另取2ml稀释液于50ml三角烧瓶中，向三解烧瓶中加2滴BTB指示剂，如变蓝，用0.1mol/LHCl滴定至黄绿色；如为黄色就用0.5mol/LNaOH滴定至黄绿色或浅蓝色。用此方法将2ml样品或对照稀释液的pH值调至5.5~8.5，按此量将比色管内的稀释液pH值调至5.5~8.5。加1mlHCl(1∶9)，加蒸馏水使其总体积不超过17ml，加0.2%铝试剂1ml、10%醋酸铵溶液5ml，加蒸馏水至25ml。加塞摇匀。放置20分钟后，用530nm波长测其吸收度（OD值）。同时做空白对照，用1ml蒸馏水代替1ml样品，其余操作同样品。
2.2 标准曲线
精密量取标准铝溶液（10μg铝/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25ml带塞比色管中，铝含量分别为0、2、4、6、8、10μg，从加1mlHCl（1∶9）起同样品管。
3 计算
3.1 由标准曲线查出，或从标准计算出的直线回归方程中求出对照管和样品管的铝含量（A）。
3.2 根据中和用去的碱量计算出2ml样品和对照稀释液中含4mol/LNaOH的ml数。
3.3 根据2ml对照稀释液含的4mol/l NaOH量和含铝量，计算出每ml4mol/l NaOH含铝量。
3.4 根据每ml4mol/l NaOH含铝量和2ml样品稀释液中含4mol/l NaOH的ml数，计算出2ml样品稀释液中，中和用的4mol/l NaOH含铝量（B）。
3.5 计算样品中含铝量
样品中含铝量（μg/g蛋白）=[（A－B）÷2×10÷蛋白含量（g/ml）
附注
1．铝试剂不仅能与某些金属离子形成有色的络合物，同时也会由于溶液中H+浓度的改变而产生颜色的变化。因此测定时，要严格控制溶液的pH值在5.0左右，样品和标准的pH值一致。
2．铝试剂避光保存。
人白蛋白（或丙种球蛋白）纯度测定
（醋酸纤维素薄膜电泳法）
1 试剂
1.1 巴比妥缓冲液（Ph8.6）
取巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加蒸馏水溶解成1000ml。
1.20.5%氨基黑染色液
取氨基黑10B0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸馏水40ml的混合液中。
1.3漂洗液
取乙醇45ml，冰醋酸5ml及蒸馏水50ml，混匀。
1.40.2mol /L氢氧化钠
取8g氢氧化钠，加蒸馏水溶解成1000ml。
1.5透明液
取冰醋酸25ml，加无水乙醇75ml，混匀。
2 操作
2.1 电泳
将膜条（2×8cm）粗糙面向下，浸入巴比妥缓冲液中，待完全浸透，取出用滤纸吸去多余的缓冲液，将膜条粗糙面向上，加于电泳支架上的滤纸桥上（或桥下），于膜上距负极端2cm处，直线状滴加蛋白质含量约5%的样品2～3μl，通电，电流控制在0.4~0.6mA/cm[总电流量=生产要膜的宽度（cm）×膜条数，同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离达3～4cm为宜。
2.2 染色
电泳完毕，将膜条取下浸于染色液中，2～3分钟后，用漂洗液反复漂洗至底色完全脱净。
2.3 透明
将漂净并完全干后的膜条浸于透明液至全部浸透为止，取出平铺于洁净的玻璃板上，干后即成透明薄膜，可供扫描法测定样品纯度和作为标本长期保存用。
2.4 纯度测定
2.4.1 洗脱法：将漂洗净的膜条用滤纸吸干，与正常人血清的电泳图谱作对照，剪下白（或丙种球蛋白）带A及其他杂蛋白质区带B，分别浸于5ml0.2mol/L氢氧化钠溶液中，振摇数次，至色泽完全浸出后，于620nm波长下测其OD值，以相同条件下，无蛋白质部分的膜条（其长度分别同A及B）作空白对照。
样品中白蛋白（或丙种球蛋白）含量%=A的OD值－A空白的OD值/（A的OD值－A空白的OD值）+（B的OD值－B空白的OD值）×100%
2.4.2 扫描法：将干燥的样品醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动光密度扫描仪，通过反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式测定各蛋白质电泳区带的OD值，根据仪器性能，可自动或手工方法计算出样品白蛋白（或丙种球蛋白）的百分含量。
附注
用扫描法测定白蛋白（或丙种球蛋白）纯度时，可采用丽春红染色法，其染色液及漂洗液配方如下：
0.2%红染色液：
取丽春红0.2g，磺基水杨酸3g及三氯醋酸3g，用蒸馏水溶解并稀释至100ml。
漂洗液：
取冰醋酸3ml，用蒸馏水稀释至100ml。
残留聚乙二醇（PEG）含量测定
1试剂
1.1 PEG（MW4000或6000）。
1.20.5mol /L高氯酸（HClO4）溶液。
1.3 5%BaCl2溶液。
1.40.1mol /L碘溶液。
2 操作
2.1 取1ml样品，在灵敏度允许的范围内，先将样品稀释到蛋白质浓度≤1%，加入5.0ml 0.5mol /L高氯酸溶液，15分钟后，用4000r/min，离心10分钟，取上清液（如蛋白浓度过高，上清混浊，则要过滤至清）。
2.2 PEG测定
于4ml上清液中加入1.0ml5%BaCl2和0.5ml的0.1mol/L碘溶液，反应15分钟后，进行比色。记录各样品的A535值。
2.3 标准曲线的绘制
取≤1%蛋白质溶液，另入PEG合成10～80μg/ml 溶液。根据样品的大致浓度，用去除蛋白质后溶液制剂作标准曲线。
2.4 根据样品读数，从标准曲线上查出PEG含量。
3 计算
样品中PCG浓度%（g/ml）=样品稀释倍数×查得标准曲线相应的PEG浓度
附注
1.整个比色过程应在试剂加入以后的15～45分钟内完成，否则将要影响结果。
2.本方法的灵敏度随被测定PEG的分子量的增加而提高。
人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中lgG各组份测定（高压液相凝胶柱色谱法）
1 仪器
1.1 高压液相泵
1.2 高压液相色谱柱：TSKG3000SW(直径7.5mm,长60cm)。TSk Guard Column SW（直径7.5mm，长7.5cm）。
2 试剂
2.1 贮存液A：0.5mol /L NaH2PO4,pH4.8
称39g NaH2PQ4·2H2O，用超纯水溶解，并稀释至500ml。
2.2 贮存液B：0.5mol /L Na2HPO4
称179.1g Na2HPO4·12H2O，用超纯水溶解，并稀释至1000ml。
2.3 工作液C：0.2mol /L 磷酸盐缓冲液，Ph7.0（含1%异丙醇）
准确量取200ml贮存液A、420ml贮存液B、914.5ml超纯水、15.5ml异丙醇，混匀，用0.45μm水溶性膜过滤并超声脱气。
3 样品处理
用生理盐水将样品稀释至4mg/ml，然后用0.45μm水溶性膜过滤。
4 操作
用工作液C以0.6ml/分钟流速平衡高压液相系统至基线平稳。取处理过的样品25μl上柱，用工作液C以0.6ml/分钟流速洗脱，同时在紫外检测器280nm波长下记录色谱图及有关数据。记录数据的时间为60分钟。
5 计算
5.1 人血白蛋白多聚体含量计算
用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出多聚体相对面积百分含量。再根据转化公式换算成相对重量百分含量。
转化公式*X（%）=Y－1.6504/1.6359
其中X为凯氏定氮结果，Y为高压液相结果（如Y值小于1.6504，结果不用转化成重量百分含量，但在试验报告中需注明为相对面积百分含量）。
5.2 人血丙种球蛋白中IgG各组份相对含量计算。
5.2.1IgG各组份峰的划界。
图谱中各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线。
5.2.2IgG各组份相对含量计算。
用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出各组份相对百分含量。
*应根据各单位使用的HPLC仪器及层析柱型号，经试验后得出转化公式。
人血白蛋白中辛酸钠含量测定（气相色谱法）
1 试剂
1.1 氯仿（A.R）
1.2 辛酸（CP）标准液
用氯仿配成10mg/ml溶液。
1.3 庚酸（CP）内示液
用氯仿酸成10mg/ml溶液。
1.41.5mol/L高氯酸溶液
2 仪器
2.1 带有积分仪及氢火焰检测器的气相色谱仪。
2.2 色谱柱
色谱柱为内径3mm，长2m的玻璃柱，内装涂有10%聚乙二醇（20M）固定液的ChromsorbVV担体。
2.3 仪器工作条件
气化室温度230℃，柱温190℃，载气（纯氮）流速40ml/分钟；样品，标准液注入量为2μl。
2.4 振荡器
3 操作
3.1 标准曲线的绘制
取1.2项的辛酸标准液各10、20、30、40及50μl，分别与30μl.3项的庚酸内标液和4ml的氯仿组成5个标准管，混合均匀后，在通风橱中将氯仿挥发至干，然后定量加入0.1ml氯仿溶解残渣，上机测定。典型的色谱图中内标庚酸的保留值为9分钟左右，辛酸的保留值为13分钟左右。分别以自动积分仪显示的各管样品的辛酸和内标庚酸的峰面积之比，对各管中所含辛酸加入量进行回归统计，也可得到回归方程。
3.2 样品测定步骤
取已知蛋白浓度样品，用蒸馏水稀释至5%蛋白浓度，然后准确取0.5ml，加入庚酸内标液30μl，1.5mol /L高氯酸0.2ml，在振荡器上混合均匀，然后加入氯仿4ml，加盖，用振荡器剧烈混合1分钟，2800r/min离心10分钟。用滤纸卷条小心吸去上层水，再用吸管小心吸出氯仿层，移入10ml管子中，在通风橱中待氯仿挥发至干，精确加入0.1ml氯仿，溶解残渣，上机测定。
4 计算
4.1 根据样品测定时所得的辛酸与内标庚酸的峰面积比代入已得回归方程，即得辛酸绝对含量。
白蛋白中辛酸量（mmol /g蛋白）=测得辛酸绝对量（μg）/144.22×0.5×样品蛋白浓度×100
注：
1.辛酸量（mmol）相等于辛酸钠量（mmol）。
2.辛酸分子量为144.22。
F（ab）2含量测定
1 试剂
1.1 丙烯酰胺溶液
取丙烯酰胺14g，双丙烯酰胺0.367g，加蒸馏水至50ml。
1.2 缓冲液
Ph7.2，0.2mol /L PB-0.2%SDS：取NaH2PO4·2H2O17.8g,Na2HPQ4·12H2O103g,SDS4g，加蒸馏水至2000ml。
1.3 样品结合液
取10%SDS4ml,0.2mol/L PB0.2ml，甘油10ml，加蒸馏水至20ml。
1.4 电极缓冲液
取上述1.2项缓冲液稀释1倍。
1.5 固定液
取甲醇400ml，冰醋酸70ml，加蒸馏水至1000ml。
1.6 染色液
取考马斯亮蓝2.5g，溶于500ml甲醇中，加冰醋酸70ml，再加蒸馏水至1000ml。
1.7 脱色液
取冰醋酸70ml，甲醇50ml，加蒸馏水至1000ml。
1.8 干燥液
取甘油30ml，甲醇200ml，加蒸馏水至1000ml。
2 操作
2.1 样品处理
取一定蛋白质浓度的样品0.1ml，加样品结合液0.1ml，100℃翥沸1～2分钟，或37℃2小时，冷却。
2.2 凝胶板制备
按下列比例制备所需量凝胶溶液∶0.2mol /L PB∶丙烯酰胺溶液∶水∶1.5%过硫酸铵=2∶1∶0.8∶0.25。最后加1～2滴四甲基乙二胺（TEMED），混匀后立即将胶液加入电泳槽的玻璃板间，要避免产生气泡。
2.3 加样
于每一样品孔内加入已经处理过的样品25μg蛋白。
2.4 电泳
电泳条件为每个样品孔的电流恒定为2～3mA。当溴酚蓝电泳至底部时停止电泳。
2.5 固定
将电泳后的胶板放入固定液中，过夜。
2.6 染色及脱色
于染色液中染色1～2小时，然后置脱色液中进行脱色，直至底色成为无色为止。
2.7 干燥保存
用适宜方法干燥。
3 结果计算
将干燥前或后的胶板用扫描仪于575nm或520nm处对每一样品进行扫描，得出（或计算出）样品中F（ab）2的百分含量。
荚膜多糖抗原分子大小测定（琼聚糖4B柱层析法）
1 试剂
1.1 琼聚糖4B凝胶。
1.20.2mol /L 氯化钠溶液，pH7.0洗脱液。
1.3 蓝色葡聚糖2000（2～4mg）加维生素B12（0.2mg），加蒸馏水1ml溶解。
2 仪器
2.1 层析柱（1.5～1.6×100cm）。
2.2 206nm波长紫外监测仪。
2.3 部分收集器及试管。
2.4 凝胶和洗脱液储瓶，适宜的控制装置和记录器。
3 操作
3.1 琼聚糖4B凝胶的漂洗
取琼聚糖4B凝胶约300ml，加0.2mol /L 氯化钠溶液500ml，充分搅拌，静置1～2小时，倾去上层液体和悬浮于其中的细小颗粒，重复上述操作数次后至上层液体无细小颗粒，置真空罐内，抽去凝胶中的空气。
3.2 装柱
将洗好的琼聚糖4B凝胶慢慢注入柱中，避免夹杂气泡，装至约90cm，调整流速为10～12ml /小时，流洗2天。
3.3 标定
空流体积（Vo）及柱床总体积（Vi）
取蓝色葡聚糖及维生素B12溶液1ml，加于已平衡的柱上，以0.2mol /L 氯化钠溶液流洗，用部分收集器收集各组分，流速为10～12ml /小时，每管2～4ml，同时于206nm波长下自动监测，记录流洗液图谱。第一峰为蓝色葡聚糖峰，计算由加样起至第一峰峰顶的流洗液体积，即为Vo。第二峰为维生素B12峰，计算由加样起至第二峰峰顶的流洗液体积，即为Vi。