补体P因子功能检测试剂盒--补体系统研究工具
研究目的：
目的是确定测试样本中因子P的功能。功能性是定性地与校准器（人血清）相关联来确定的，校准器被设定为100%功能性。
仅限于训练有素的实验室人员使用。结果不得用于临床诊断或患者管理。仅限研究使用。
概述和解释
因子P（补体P，适当蛋白，FP）是补体激活替代途径（AP）的正向调节器和启动因子。它结合到表面结合的C3和C5转化酶并稳定它们，以放大激活级联反应1。因子P的结合使转化酶复合体的半衰期增加约10倍2。有观点（尽管存在争议）认为，因子P也可以通过结合例如细胞表面或某些生物基质，招募C3b或C3(H2O)和因子B，从而启动AP途径1,3。因子P对抗因子H的负向调节，后者增强C3b和Bb的解离并介导因子I对C3b的切割，转化为非活性的iC3b3（图1）。
图1：因子P作为替代补体途径的稳定剂和启动因子（左），以及因子H的对立负向调节（右）。
与大多数补体蛋白不同，因子P不是在肝细胞中产生的，而是由包括单核细胞、巨噬细胞、T细胞和粒细胞在内的几种细胞类型产生。很可能局部刺激下因子P的短暂浓度增加会增强AP4。例如，中性粒细胞含有因子P的颗粒，这些颗粒在刺激下分泌，并且可以增强血小板-粒细胞聚集体的形成1。
在血浆中，因子P的浓度大约为4-25 µg/mL5。因子P是一个延长的53 kDa糖蛋白，在体内以二聚体、三聚体或四聚体（P2、P3和P4）的形式寡聚，比例为26:54:20（P2:P3:P4），形成头对尾结构5,6。寡聚状态与C3转化酶稳定功能相关，寡聚体的分布影响因子P的整体功能性7。
突变、缺乏、蛋白水平以及因子P的蛋白沉积与疾病和障碍有关，由Chen等人总结3。缺乏通常增加对脑膜炎球菌病和其他传染病的易感性8。改变的血清水平已与例如C3肾小球病、狼疮性肾炎、败血症和慢性心力衰竭以及IgA肾病相关联9。
艾美捷补体P因子功能检测试剂盒（Complement Factor P Functional assay）（#COMPL FPF RUO）的测定原理：
因子P功能测定是一种酶联免疫吸附测定（ELISA）将功能性补体活性测定的原理与标记的使用相结合对沉积的补体蛋白具有特异性的抗体。已存入的补充金额蛋白质与样品中因子P的功能活性成正比。
补体P因子功能检测试剂盒组成：
一个带有微孔板（12x8）的框架，孔内涂有抗因子P单克隆抗体，用铝箔包装，并附有干燥剂包。
1.5毫升阴性对照（NC），绿色，绿色瓶盖。即用型。
3.0毫升校准器，200纳克/毫升。即用型。
32毫升稀释液（Dil），红色。即用型。
30毫升洗涤溶液，30倍浓缩。
活化剂，冻干型。
15毫升活化剂稀释液。即用型。
3.0毫升猝灭液。即用型。
7.5毫升结合物含有针对C3b的HRP标记抗体，蓝色，棕色瓶。即用型。
15毫升底物TMB，棕色瓶。即用型。
15毫升终止液（0.5M H2SO4）。即用型。
需要但未提供的物料或设备：
带有450纳米和620纳米滤光片的酶标仪
轨道摇床（200转/分钟）
带一次性吸头的精密移液管
96孔板或条的密封膜
96孔板或条的洗涤器
吸水纸
试剂和样品稀释用的容器
冰或相应的板冷却设备
计时器
稳定性和储存：
所有试剂应储存在2-8°C，活化剂除外。在2-8°C下储存时，稀释后的洗涤液有效期至套件的有效期。
冻干活化剂应储存在-20°C或更低温度。复溶后的活化剂可以在-70°C下冷冻，并且只能解冻一次。
标本收集和准备：
应使用无菌静脉穿刺技术收集全血样本，并使用标准程序获得血清或EDTA血浆。建议每个样本至少抽取5毫升全血。离心血样并将无细胞血清或血浆转移到干净的试管中。
离心后的血清或EDTA血浆可保存在4°C。较长时间储存时，血清和血浆样本应冷冻在-20°C或更低温度。建议在分析前不要将测试样本冻融超过两次。
每个实验室应确定测试样本储存条件的可接受性，因为这可能因预分析因素而异。
在进行补体P功能性分析之前，确定每个测试样本中因子P的浓度。对于这种因子P浓度的测定，可以使用Svar Life Sciences AB提供的因子P定量分析。
补体P因子功能检测试剂盒文献参考：
(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.
(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.
(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.
(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular
Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.
(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.
(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.
(7) Moore, S. R.; Menon, S. S.; Galwankar, N. S.; Khuder, S. A.; Pangburn, M. K.; Ferreira, V. P. A Novel Assay That Characterizes Properdin Function Shows Neutrophil-Derived Properdin Has a Distinct Oligomeric Distribution. Frontiers in Immunology 2023, 13.
(8) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.
(9) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.
https://www.amyjet.com/products/COMPL%20FPF%20RUO.shtml
补体P因子定量检测试剂盒：助力炎症和免疫反应研究
研究目的：
目的是定量测试样本中人类因子P的含量。该产品仅供经过培训的实验室人员使用。不得使用结果用于临床诊断或患者管理。仅供研究使用。
艾美捷补体P因子定量检测试剂盒（Complement Factor P Quantitative assay）（#COMPL FPQ RUO）的测定原理：
补体因子P定量分析是一种夹心ELISA，用于定量分析例如血清或血浆样本中的人体因子P。该分析基于96孔板中固定的抗体，捕获在板中孵化的测试样本中的因子P。用HRP标记的二级抗体检测结合的因子P。随后HRP催化底物的切割，引起颜色变化，与测试样本中因子P的浓度相关。
需要但未提供的物料或设备：
带有450纳米和620纳米滤光片的酶标仪
轨道摇床（除非包含在酶标仪的功能中）
带一次性吸头的精密移液管
96孔板或条的洗涤器
吸水纸
试剂和样品稀释用的容器
计时器
稳定性和储存：
试剂应储存在2-8°C。在2-8°C下储存时，稀释后的洗涤液有效期至套件的有效期。
标本收集和准备：
应使用无菌静脉穿刺技术收集全血样本，并使用标准程序获得血清或EDTA血浆。建议每个样本至少抽取5毫升全血。离心血样并将无细胞血清或血浆转移到干净的试管中。
离心后的血清或EDTA血浆可保存在4°C。较长时间储存时，血清和血浆样本应冷冻在-20°C或更低温度。建议在分析前不要将测试样本冻融超过两次。
每个实验室应确定测试样本储存条件的可接受性，因为这可能因预分析因素而异。
结果评估：
对于每个数据点，从450纳米波长减去620纳米参考波长，并计算所有重复样本的平均吸光度值。
通过绘制六种校准器的吸光度与浓度（0 ng/ml、12.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和200 ng/ml）构建校准曲线。
在这个应用说明的例子中（图2），使用了4参数曲线拟合，但用户可以选择不同的曲线拟合。根据校准曲线读取未知样本的浓度。
注意：要计算样本中因子P的浓度，必须根据上述协议进行稀释补偿，即200倍。如果选择了不同的样本稀释，应相应地进行补偿。
补体P因子定量检测试剂盒校准曲线示例：
请注意：上图显示了一个标准曲线的示例，不应用于实际样品解释。
补体P因子定量检测试剂盒文献参考：
(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.
(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.
(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.
(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular
Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.
(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.
(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.
(7) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.
(8) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.
https://www.amyjet.com/products/COMPL%20FPQ%20RUO.shtml
补体C4d检测试剂盒：C4d检测，助力自身免疫疾病研究
补体系统在自身免疫和感染性疾病中发挥着重要作用。补体激活有三条途径：经典途径、替代途径和凝集素途径。C4d蛋白是经典途径和凝集素途径的产物。
C4d是补体C4激活过程中产生的降解终产物，在1990年代被认定为一种生物标志物，因为它的稳定性和与抗体介导的排斥反应的强关联。在过去的二十年中，C4d在系统性红斑狼疮（SLE）中的潜在重要性被强调，作为诊断和监测SLE的工具（1）。特别是，C4d与SLE肾炎相关（2）。在原发性干燥综合症（pSS）中，C4d水平与抗-SSB抗体和κ/λ比率相关，建议其作为pSS患者中抗体反应和补体激活的适当标志物（3,4）。研究表明，抗体相关性血管炎患者的C4d血浆水平显著高于狼疮肾炎患者和正常对照组（5）。肾小管周围的C4d沉积是长期移植物存活率的重要预测因子，并具有预后意义（6）。C4d在肺癌患者的生物样本中增加，并与早期肺癌的不良预后相关（7,8）。C4d越来越被认为是一个潜在的生物标志物，能够指示抗体可能导致的组织损伤，例如系统性自身免疫疾病。C4d有潜力检测处于抗体介导疾病后果风险中的患者。此外，开发新的阻断补体激活的治疗药物使得C4d成为一个标志物，有可能识别和监测可能从这些药物中受益的患者（9）。基于线性新表位的补体检测已被报道相较于构象表位具有优势，因为它降低了假阳性的风险并提高了特异性（10）。该补体检测基于在激活后C4的切割位点暴露的短线性C4d新表位的检测。
艾美捷补体C4d检测试剂盒（Complement C4d）（#COMPLC4dRUO）的测定原理：
该装置为一种比色法夹心ELISA。样本在检测稀释液中稀释，100µL稀释样本被转移到微孔板中，并在室温下孵育60分钟。在第一次孵育期间，样本中的C4d被预涂在微孔板表面的抗C4d-Neo单克隆抗体捕获。洗涤以去除未结合的物质后，加入第二种辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体，该抗体能够结合C4d的两个等位变体（A和B）。经过30分钟的孵育后，再次洗涤孔，并添加底物进行孵育。30分钟后停止颜色发展，并在分光光度计中测量颜色。颜色的深浅与结合到孔中的C4d量成正比。C4d的量通过与校准样本的颜色发展进行比较来确定。
标本收集：
应使用无菌静脉穿刺技术收集血样，并使用标准程序获得EDTA血浆。建议每个样本至少抽取5毫升全血。离心血样并将无细胞血浆转移到干净的试管中。必须妥善处理血浆，以防止体外补体激活。
离心后的EDTA血浆可在4°C下保存最多8小时，分析应在此时间范围内进行。对于较长时间的储存，血浆应冷冻在-70°C或更低温度。样本不应冻融超过两次。
补体C4d检测试剂盒成分及试剂储存：
一个带有微孔（12x8）的框架，涂有抗C4d-Neo单克隆抗体，用铝箔包装并附有干燥剂包。
1.5毫升低对照（LC）。即用型。
1.5毫升高对照（HC）。即用型。
2x30毫升稀释液（Dil），红色。即用型。
15毫升含有HRP标记抗体的结合物，针对C4d。即用型。
15毫升底物TMB。即用型。
15毫升终止液（0.5M H2SO4）。即用型。
30毫升洗涤液，30倍浓缩。
6 x 1.5毫升的校准剂量，含有人重组C4d，浓度为0 ng/mL、5 ng/mL、25 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL和400 ng/mL。即用型。
结果计算：
从450纳米波长中减去620纳米参考波长，并计算所有样本的平均吸光度值。通过绘制校准样本的吸光度与浓度构建校准曲线。六种校准样本的浓度为0 ng/ml、5 ng/ml、25 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml和400 ng/ml。在本说明书的示例中使用了4参数曲线拟合（图1）。用户可以选择不同的曲线拟合。根据校准曲线读取未知样本的浓度。
注意：要计算血浆样本中C4d的浓度，必须进行稀释补偿，即根据上述协议进行50倍的补偿。如果选择了不同的样本稀释，应相应地进行补偿。
图1. 校准曲线示例
请注意：上图显示的是半定量标准曲线的示例，不应用于实际样本的解释。
补体C4d检测试剂盒文献参考：
1. Juan Li, Zhuoli Zhang, The Important Roles of C4d in Systemic Lupus Erythematosus,
Rheumatology (Sunnyvale) 2014, 4: 135. 4:2
2. Martin M, Smoląg KI, Björk A, Gullstrand B, Okrój M, Leffler J, Jönsen A, Bengtsson AA,
Blom AM, Plasma C4d as marker for lupus nephritis in systemic lupus erythematosus.
Arthritis Res Ther. 2017 Dec 6;19(1):266. doi: 10.1186/s13075-017-1470-2.
3. Sudzius, G., et.al, 2014. Could the complement component C4 or its fragment C4d be a
marker of the more severe conditions in patients with primary Sjogren’ssyndrome?
Rheumatol. Int. 34, 235–241
https://www.amyjet.com/products/COMPLC4dRUO.shtml
末端补体复合物(TCC)检测试剂盒，炎症和自身免疫疾病研究工具
补体TCC是一种酶免疫测定法，用于半定量测定人EDTA血浆中的可溶性末端补体复合物（sTCC，也称为TCC或sC5b-9）。该产品仅限于专业使用。结果不得用于临床诊断或患者管理。仅限研究使用。
总结和解释：
在所有需要确定补体功能的情况下，TCC水平可以作为对三条补体途径功能评估的补充，提供非常有价值的信息。它反映了给定样本中补体的历史性体内活性。
补体系统在慢性、自身免疫和感染性疾病中发挥着至关重要的作用。补体激活有三条途径，即经典途径、替代途径和凝集素途径。可溶性末端补体复合物是末端途径的产物，可以是所有三条补体激活途径的结果。由于TCC反映了最终末端途径的激活，而不考虑最初涉及的途径，因此它是评估补体激活的特别好的候选指标（Harboe 2011）。
众所周知，补体系统在各种病理条件下组织层面炎症过程的发展和放大中起着关键作用。例如在溶血性尿毒症综合征（HUS）（Noris 2012）、系统性红斑狼疮（SLE）（Porcel 1995, Mollnes 1999）和类风湿性关节炎（RA）（Struglics 2016）中可以检测到TCC水平的增加。补体系统也可以被人工表面激活，例如在血液透析或心肺转流期间，导致TCC水平增加（Deppish 1990, Ovrum 1996）。TCC也非常适合研究医疗器械中生物材料激活补体的情况（Stang 2014）。TCC可以像补体的其他激活产物一样，在使用新表位特异性单克隆抗体的测定中被测量。新表位隐藏在原始补体成分中，并在补体激活后暴露（Mollnes 1985, Mollnes 1993）。
艾美捷末端补体复合物(TCC)检测试剂盒（Complement TCC）（#COMPLTCCRUO）的测定原理：
该测定是一种比色法夹心ELISA。样本在测定稀释液中稀释，100µL稀释样本转移到微孔板孔中，并在室温下孵育60分钟。在这次第一次孵育期间，样本中的TCC被预涂在微孔板孔表面的抗TCC单克隆抗体捕获。洗涤以去除未结合的物质后，加入第二种辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体以检测结合到孔中的TCC。孵育30分钟后再次洗涤孔，并添加底物进行孵育。30分钟后停止颜色发展，并在分光光度计中测量颜色。颜色的深浅与结合到孔中的TCC量成正比。TCC的量通过与校准样本的颜色发展进行比较来确定。
操作程序：
1. 将试剂（微孔板、校准器、对照、稀释液、洗涤液、结合物、底物和终止液）平衡至室温（20°C - 25°C）。
2. 将洗涤液稀释30倍（例如，30 ml浓缩洗涤液 + 870 ml纯水）。
3. 将EDTA血浆样本在室温下解冻。
4. 将解冻的血浆样本保存在冰上。
5. 用稀释液1/10稀释样本（例如，30 µl血浆 + 270 µl稀释液）。建议使用预稀释板。
6. 将100µL稀释样本、校准器和对照转移到微孔板孔中，每孔两份，并在室温下孵育60分钟。
注意：建议快速将样本、校准器和对照转移到板上，以避免信号漂移。
7. 用稀释洗涤液300 µl洗涤3次，通过填充和清空孔来完成。最后一次洗涤后，通过在吸水纸上轻敲条带来清空孔。
8. 向孔中加入100 µl结合物。在室温下孵育30分钟。
用稀释洗涤液300 µl洗涤3次，通过填充和清空孔来完成。最后一次洗涤后，通过在吸水纸上轻敲条带来清空孔。
9. 向孔中加入100 µl底物。在室温下孵育30分钟。
10. 向孔中加入100 µl终止液。
11. 在酶标仪上读取450 nm处的吸光度。以620 nm作为参考波长读取。
结果计算：
从450nm波长中减去参考波长，并计算所有样本的平均OD值。通过绘制校准器的OD值与浓度构建校准曲线。六种校准器的值为0 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL和400 ng/mL。根据校准曲线读取未知样本的浓度。
注意：本IFU中的所有性能数据都是使用4参数曲线拟合计算的。用户可以选择不同的曲线拟合。建议每个实验室使用选定的曲线拟合建立参考范围。
注意：要计算样本中TCC的浓度，必须根据上述协议进行稀释补偿，即10倍。如果样本结果超出校准曲线，建议进行更高倍数的稀释，并在计算样本中的浓度时考虑这一点。
请注意：上图显示的是半定量标准曲线的示例，不应用于实际样本的解释。
校准器曲线示例：
末端补体复合物(TCC)检测试剂盒（Complement TCC）文献参考：
Bergseth et al. Molecular Immunology 56 (2013) 232–239. An international serum standard for
application in assays to detect human complement activation products
Deppisch et al, Kidney Int. 1990 Feb;37(2):696-706. Fluid phase generation of terminal
complement complex as a novel index of bioincompatibility
Harboe et al, Adv Drug Deliv Rev. 2011 Sep 16;63(12):976-87. Advances in assay of
complement function and activation.
https://www.amyjet.com/products/COMPLTCCRUO.shtml
环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体检测试剂盒：精准检测类风湿性关节炎标志物
Immunoscan CCPlus® 试剂盒是一种酶联免疫吸附测定（ELISA），用于定性和半定量测定人血清中针对环状瓜氨酸化肽（CCP）的IgG抗体。该测定用于检测单个血清样本中的抗体。该测定的结果不得用于临床诊断或患者管理。分析应由训练有素的实验室专业人员执行。仅限研究使用。不得用于诊断程序。
总结和解释
类风湿性关节炎（RA）是最常见的系统性自身免疫疾病之一。这种影响全球人口高达1-2%的疾病的病因尚不明确。RA的诊断主要依赖于疾病的临床表现。目前常规使用的唯一的血清学检测是测定血清中类风湿因子（RF）的存在。RF是针对IgG类免疫球蛋白的恒定区域的抗体。然而，这些抗体在其他自身免疫疾病、感染以及高达15%的健康个体中也存在相对较高的比例。
在RA患者的血清中也发现了更具特异性的抗体（见（1）概述）。据报道，大约50%的RA患者存在抗过核因子（APF）抗体，特异性超过70%（2）。描述了一些与角蛋白或其他已知蛋白质无关的环状合成肽，这些肽能被RA患者血清中的自身抗体特异性识别（3）。这些肽随后被用于EIA检测RA特异性自身抗体（3）。临床评估研究表明，EIA在大量明确定义的RA患者血清中呈阳性，对疾病对照具有极高的特异性（3-8）。在早期RA中，针对关节受累和放射学损伤的抗环状瓜氨酸化肽（anti-CCP）抗体的测量发现了诊断和预后价值（7, 9-14）。在临床症状发展前几年就可以检测到抗-CCP抗体（14）。一项前瞻性队列研究表明，93%的抗CCP阳性的未分化关节炎患者最终发展为类风湿性关节炎，显示了这些抗体的强大阳性预测价值（14）。
Svar Life Science的Immunoscan CCPlus®测定基于含有瓜氨酸残基的高纯度合成肽。这种抗CCP试剂盒包含了基于在检测RA自身抗体方面更优越的性能而选择的改进型合成肽（8-14）。
艾美捷环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体检测试剂盒（IMMUNOSCAN CCPlus）（#RA-96Plus）的测定原理：
抗CCP抗体试剂盒基于ELISA方法。测试使用的微孔板孔内涂有瓜氨酸化的合成肽（抗原）。将稀释的血清样本应用于孔中并孵育。如果存在特异性抗体，它们将与孔中的抗原结合。未结合的物质被洗涤掉，通过添加辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgG来检测任何结合的抗体，随后进行第二次洗涤和与底物的孵育。反应性抗体的存在将导致颜色的发展，这与结合抗体的数量成正比，并通过光度测定法确定。
注意事项：
仅限研究使用。不得用于诊断程序。
1. 终止液含有0.5 M硫酸。不要使试剂接触到皮肤。
2. 避免所有生物材料与皮肤和粘膜接触。
3. 不要口吸移液。
4. 对照和校准器含有人源血清。尽管已针对HIV 1+2、HCV、HbsAg和HIV-1 Ag进行检测并确认为阴性，但这些材料必须被视为潜在感染性物质。-疾病控制和预防中心以及国立卫生研究院建议在生物安全二级水平处理潜在感染性因子。
5. TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）通过吸入、皮肤接触和吞咽是有毒的。处理底物时要小心。
6. 不要使用过期的组分，不要混用不同批次的组分。
7. 每个孔最终用作光学比色皿。因此，不要触摸孔的下表面，防止损坏和污垢。
8. 严格遵守本协议将获得最佳结果。在整个过程中仔细移液和洗涤是保持精度和准确性的必要条件。
9. 对照、校准器和稀释缓冲液含有0.09%的叠氮钠。
10. 有报道称叠氮钠可能与管道中的铅和铜反应形成爆炸性化合物。处置时，用水冲洗排水管以最小化金属叠氮化合物的积累。
Svar Life Science可以根据要求提供产品安全数据表。
试剂盒内容：
1个密封的（96孔）涂有CCP肽的微孔板。即用型。
5瓶含有校准器（阳性人血清池）（1.2 mL）。即用型（蓝色）。
1瓶含有参考对照人血清（1.2 mL）。即用型（蓝色）。
1瓶含有阳性对照人血清（1.2 mL）。即用型（蓝色）。
1瓶含有阴性对照人血清（1.2 mL）。即用型（蓝色）。
1瓶含有结合物溶液（过氧化物酶结合到抗人IgG抗体）（15 mL）。即用型（红色）。
1瓶含有底物溶液TMB（15 mL）。即用型。
2瓶含有稀释缓冲液（35 mL）。即用型（蓝色）。
1瓶含有终止液（15 mL）。即用型。
2瓶含有洗涤缓冲液（35 mL）20倍浓缩。
需要但未提供的物料或设备：
带有450 nm滤光片的酶标仪。
自动微孔板洗涤器。
处理和储存：
在+2°C至+8°C的暗处储存试剂盒。
不要使用过期的试剂。
建议在立即使用前打开密封的微孔板。
应避免直接光照在色素溶液上。
如果观察到第一校准器A（3200 U/mL）E450 nm <0.9的弱或缺失的颜色反应，则测试结果无效。
样品准备：
本测试在血清样本上进行。对于血清样本，允许凝血完全。在4-8°C下储存样本最多48小时。长时间储存时在-20°C下冷冻。稀释样本1:50。（将10 µL样本与490 µL稀释缓冲液混合。在测试中使用100 µL。（见测定方案）。
试剂的准备和处理：
在开始测试之前，应将微孔板和试剂放置至室温。在板达到室温之前不要打开板的密封。
使用前彻底混合试剂。
试剂盒中包含的试剂足够进行96次分析（包括校准器和对照分析）。
校准器和对照以双份分析。
缓冲液浓缩物可能含有盐晶体，应在室温（18-25°C）下溶解。
1. 使用后立即将所有试剂储存在2-8°C的暗处。
2. 涂有CCP肽的微孔板。即用型。
用带有干燥剂的铝箔重新密封剩余孔，并储存在2-8°C。
3. 洗涤缓冲液（35 mL）。洗涤缓冲液提供20倍浓缩。使用前准备稀释液。将35 mL洗涤缓冲液加入665 mL蒸馏水中并彻底混合。
4. 底物溶液TMB（15 mL）。即用型试剂。存放在暗处。
5. 稀释缓冲液（35 mL）。即用型。
6. 结合物溶液（15 mL）。即用型。
7. 终止液（15 mL）。即用型。
8. 校准器A-E（1.2 mL）。五个稀释的阳性人血清校准器，用相对单位表示。
校准器A含有3200 U/mL，B 800 U/mL，C 200 U/mL，
D 50 U/mL和E 25 U/mL。校准器即用型。
9. 参考对照（1.2 mL）。稀释的人血清，25 U/mL，即用型。
10. 阴性对照（1.2 mL）。稀释的人血清，即用型。
11. 阳性对照（1.2 mL）。稀释的人血清，即用型。
定性协议：
从含有对照和样本的孔的个别吸光度中减去孔A1和A2的平均吸光度值。
计算对照和每个样本的吸光度（光密度）比率。
环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体检测试剂盒（IMMUNOSCAN CCPlus）文献参考：
1. Van Boekel, M., Vossenaar, E., Van den Hoogen, F., Van Venrooij, W.Autoantibody systems in Rheumatoid Arthritis: specificity, sensitivity and diagnostic value.Arthritis Res. 4, 87-93 (2002).
2. Nienhuis, R. & Mandema, E.A new serum factor in patients with Rheumatoid Arthritis. The anti perinuclear factor.Ann. Rheum. Dis. 23, 302-305 (1964).
3. Schellekens, G., De Jong, B., Van den Hoogen, F., Van de Putte, L.,Van Venrooij, W.,Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by Rheumatoid Arthritis-specific autoantibodies.Clin. Invest. 101, 273-281 (1998).
https://www.amyjet.com/products/RA-96Plus.shtml
超越ChIP与CUT&RUN,EpiNext CUT&LUNCH蛋白/DNA复合物富集试剂盒来啦
蛋白质-DNA相互作用在基因表达调控、基因组完整性和染色质组织中扮演着至关重要的角色。染色质免疫沉淀（ChIP）是一种常用于检测蛋白质与DNA之间相互作用的技术，它基于与感兴趣蛋白相关的DNA的富集。但是经典的ChIP方法需要甲醛固定起始材料，交联后，还需要对细胞裂解液进行超声分离染色质，繁杂冗长的操作使得ChIP存在很大的局限性。尽管后来出现的定向切割和核酸酶释放（CUT&RUN）技术解决了部分问题，但是CUT&RUN技术是在未固定的完整细胞或核上原位进行的，需要通过蛋白AG-微球菌核酸酶（pAG-MNase）融合蛋白在特定抗体占据的位点切割染色质，并随后释放蛋白/DNA复合物，使用的pAG-MNase融合蛋白可能会产生由未偶联抗体的pAG-MNase引起的非特异性切割，这显著限制了CUT&RUN在不同物种和细胞/组织类型中大多数转录因子的使用特异性。
艾美捷EpiNext CUT&LUNCH蛋白/DNA复合物富集试剂盒（#P-2035-24）：
组分 中文名称 体积 保存条件
WB (Wash Buffer) 洗涤缓冲液 30 ml 4℃
PB (Permeabilization Buffer) 破膜剂(通透缓冲液) 4 ml RT
PIC(Protease Inhibitor Cocktail)* 蛋白酶抑制剂混合物* 30 μl 4℃
NDE (Nuclear Digestion Enhancer) 核消化增强剂 300 μl RT
CEM (Cleavage Enzyme Mix)* 切割酶混合物* 60 μl -20℃
Positive Control Ab (H3K4me3,1 mg/ml)* 阳性对照抗体(H3K4me3,1 mg/ml)* 8μl -20℃
Non-Immune lgG (1 mg/ml)* 非免疫lgG(1 mg/ml)* 25μ 4℃
CSS (Cleavage Stop Solution) 切割终止液 30 μl RT
PDB(Protein Digestion Buffer) 蛋白消化缓冲液 5ml RT
Proteinase K(10 mg/ml)* 蛋白酶K(10 mg/ml)* 100 μl 4℃
Affinity Beads 亲和珠 100 μl 4℃
DPS(DNA Purification Solution) DNA纯化溶液 600 μl RT
DNA Binding Beads DNA结合珠 60 μ 4℃
Elution Buffer 洗脱缓冲液 1 ml RT
*在开盖使用之前，将溶液离心至管底。
自备材料：
设备 ：
漩涡混合器
显微镜和细胞计数器
带有48孔或96孔模块的热循环仪
离心机，包括台式离心机(最高转速可达14,000转/分钟)
旋转器或滚动摇床
磁力设备(96孔PCR 板格式)
可调移液器和移液器吸头
0.2毫升 PCR 管
1.5毫升微量离心管
试剂：
PBS (磷酸盐缓冲液)
感兴趣的抗体
细胞样本
100%乙醇
100%异丙醇 蒸馏水
原理与步骤：
EpiNextTM CUT&LUNCH检测试剂盒包含了富集特定蛋白(组蛋白或强结合转录因子)-DNA 复合物所需 的所有必要试剂，以便通过qPCR 或 NGS 从各种细胞样本中分析蛋白质与DNA 之间的相互作用。在这个 检测中，细胞被渗透并暴露于感兴趣的 ChIP 级抗体。使用一种独特的核酸切割酶混合物，目标染色质区域 两端的DNA 序列被切割/移除。释放的非特异性蛋白-DNA 复合物被消除，只有与抗体结合的复合物将被 选择性回收。捕获的蛋白/DNA 复合物中的DNA 片段被纯化，可以直接用于基因特异性qPCR 或DNA 文 库构建，以分析蛋白质与DNA 之间的相互作用。
实验步骤：
步骤与所需时间：
1.抗体与目标结合 所需时间30分钟
2.酶切割 所需时间10分钟
3.选择性回收和纯化 所需时间60分钟
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小鼠干扰素Beta丨Mouse Interferon Beta：细胞信号传导研究用蛋白
TREX1是一种3′-5′DNA外切酶，主要负责降解细胞内的DNA，以防止其触发免疫反应。TREX1的C末端变异会导致TREX1蛋白错误定位到细胞核，进而引发DNA损伤和多种疾病，包括RVCL。RVCL是一种常染色体显性遗传的小血管病，主要表现为视网膜血管病变和脑白质营养不良，严重影响患者的生活质量。
实验结论：
TREX1 C末端变异导致DNA损伤：
在果蝇、小鼠和人类细胞中，表达RVCL相关TREX1变异的细胞均表现出更高的DNA双链断裂（DSB）和DNA损伤反应（DDR）信号。
RVCL相关的TREX1变异抑制HDR，导致DNA删除和PARP抑制剂敏感性增加。
TREX1变异促进细胞衰老和死亡：
表达RVCL相关TREX1变异的果蝇表现出更严重的“粗糙眼”表型，这是细胞衰老的一个标志。
在人类IMR-90细胞中，表达RVCL相关TREX1变异的细胞增殖受阻，并上调了与衰老相关分泌表型（SASP）相关的基因。
TREX1表达受炎症信号调控：
TREX1启动子包含多个细胞因子响应元件，如STAT结合位点、IFN刺激反应元件（ISRE）和NF-κB结合位点。
炎症信号（如IFN-β、IFN-γ和LPS）能显著上调TREX1表达。
TREX1变异导致化疗敏感性增加：
表达RVCL相关TREX1变异的细胞对PARP抑制剂和化疗药物（如aclarubicin）的敏感性显著增加。
在RVCL小鼠模型中，PARP抑制剂治疗导致肝脏出现更严重的炎症性病变。
TREX1变异与乳腺癌风险增加相关：
在RVCL女性患者中，早期乳腺癌的发病率显著增加，与BRCA1/2变异携带者相似。
艾美捷小鼠干扰素Beta，Mouse Interferon Beta（#PBL-12400-1）在实验中被用作一种关键的干扰素（IFN）来源，用于研究TREX1表达与炎症信号之间的关系。
诱导TREX1表达：IFN-β 作为一种重要的炎症因子，能够显著上调TREX1的表达。这一发现揭示了TREX1表达与炎症信号之间的紧密联系，为进一步研究TREX1在炎症相关疾病中的作用提供了重要线索。
模拟生理病理条件：在体内和体外实验中，使用IFN-β处理细胞可以模拟生理和病理条件下的炎症环境。这有助于研究人员更好地理解TREX1在炎症诱导的DNA损伤和疾病发生中的作用。
增强实验的可重复性和准确性：PBL Assay Science作为一家专业的生物试剂供应商，其产品质量得到了广泛认可。使用高质量的IFN-β产品（货号12400）可以确保实验结果的准确性和可重复性，为科学研究的严谨性提供保障。
促进新疗法的开发：通过研究IFN-β对TREX1表达的影响，研究人员可以进一步探索针对TREX1相关疾病的潜在治疗方法。例如，开发针对TREX1的抑制剂或调节TREX1表达的疗法可能有助于减轻炎症相关疾病的症状和进展。
讨论
本研究揭示了TREX1 C末端变异如何通过抑制HDR导致DNA损伤、细胞衰老和疾病表型。这些发现不仅增进了我们对RVCL发病机制的理解，还为开发新的治疗策略提供了重要线索。
首先，TREX1 C末端变异导致的错误核定位是其引发DNA损伤和疾病表型的关键。这一发现强调了核定位信号在TREX1功能中的重要性，并为未来针对TREX1核定位的研究提供了方向。
其次，TREX1表达受炎症信号的调控，这表明在炎症相关疾病中，TREX1可能扮演了重要角色。通过进一步研究TREX1与炎症信号之间的相互作用，我们可以更好地理解这些疾病的发病机制，并为开发新的治疗方法提供思路。
最后，本研究还发现RVCL女性患者早期乳腺癌的发病率显著增加。这一发现不仅为RVCL患者提供了重要的健康警示，还为研究TREX1在乳腺癌发病中的作用提供了新的视角。未来可以进一步探索TREX1与乳腺癌风险之间的关系，以及针对TREX1的潜在治疗方法在乳腺癌预防和治疗中的应用。
综上所述，本研究通过深入探讨TREX1 C末端变异在DNA损伤、细胞衰老和疾病表型中的作用机制，为理解RVCL等疾病的发病机制提供了新的视角。同时，PBL Assay Science产品（货号12400）在实验中的成功应用也彰显了高质量生物试剂在科学研究中的重要性。未来可以进一步拓展这些研究成果的应用范围，为开发新的治疗方法、提高患者生活质量做出更大贡献。
https://www.amyjet.com/products/PBL-12400-1.shtml
IFN-βELISA试剂盒/重组IFN-β，探讨mRNA疫苗注射后的早期免疫反应
mRNA疫苗作为一种新型疫苗平台，因其能够诱导强大的体液和细胞免疫反应而在癌症免疫治疗和传染病预防中展现出巨大潜力。然而，尽管mRNA疫苗已经取得了显著的成功，但其免疫学机制尚未完全阐明。特别是，关于mRNA疫苗注射部位的早期免疫反应以及这些反应如何促进适应性免疫反应的发展，仍然知之甚少。
发表在Nature的《Innate immune responses against mRNA vaccine promote cellular immunity through IFN-β at the injection site》，本研究旨在通过构建mRNA疫苗注射部位的单细胞转录组图谱，深入探讨mRNA疫苗注射后的早期免疫反应。
实验材料与方法：
在实验中，研究者使用了艾美捷：IFN-βELISA试剂盒（#42410-1）和重组IFN-β（#12401-1）。
VeriKine-HS小鼠Beta干扰素血清ELISA试剂盒（VeriKine-HS Mouse Interferon Beta Serum ELISA Kit，#42410-1）：用于检测小鼠血清和肌肉组织匀浆中IFN-β的浓度。这一试剂盒提供了高灵敏度的检测方法，能够准确量化注射mRNA疫苗后IFN-β的产生情况，从而帮助研究者评估IFN-β在疫苗诱导的免疫反应中的作用。
重组小鼠Beta干扰素, 无载体（Mouse Interferon Beta, carrier-free，#12401-1）：用于与LNP+亚单位疫苗共注射，以观察外源性IFN-β对疫苗诱导的免疫反应的影响。通过补充外源性IFN-β，研究者可以进一步验证IFN-β在促进疫苗诱导的细胞免疫反应中的重要性。
实验结论
mRNA疫苗注射部位的免疫反应特征：
研究发现，LNP诱导的基质细胞炎症反应和mRNA诱导的I型干扰素反应是注射部位初始免疫反应的主要组成部分。
mRNA疫苗注射后，注射部位的成纤维细胞高度富集mRNA，并特异性表达IFN-β。
IFN-β在促进细胞免疫中的作用：
mRNA疫苗注射后，注射部位的树突状细胞（mDC）高度表达IFN刺激基因（ISGs），这些细胞被称为mDC_ISGs。
IFN-β在注射部位的产生对于诱导mDC_ISGs至关重要，且这些细胞在引流淋巴结（dLNs）中也有分布，表明IFN-β诱导的免疫反应能够传播到引流淋巴结。
通过与LNP+亚单位疫苗共注射IFN-β，研究发现IFN-β显著增强了抗原特异性细胞免疫反应，而阻断IFN-β信号则显著降低了mRNA疫苗诱导的细胞免疫反应。
PBL Assay Science产品的作用与价值：
VeriKine-HS小鼠Beta干扰素血清ELISA试剂盒试剂盒（VeriKine-HS Mouse Interferon Beta Serum ELISA Kit，货号42410-1）：该试剂盒为研究者提供了准确量化IFN-β浓度的工具，使得研究者能够直接观察到mRNA疫苗注射后IFN-β的产生情况。这对于验证IFN-β在疫苗诱导的免疫反应中的作用至关重要。通过该试剂盒，研究者能够清楚地看到IFN-β的产生与mDC_ISGs的诱导以及细胞免疫反应的增强之间的关联。
重组小鼠Beta干扰素, 无载体（Mouse Interferon Beta, carrier-free，货号12401-1）：通过外源性补充IFN-β，研究者能够直接观察IFN-β对疫苗诱导的免疫反应的影响。这一实验设计不仅验证了IFN-β在促进细胞免疫反应中的重要作用，也为未来开发更高效的mRNA疫苗提供了思路。通过调节IFN-β的产生或应用，可能能够进一步增强mRNA疫苗的免疫效果。
讨论：本研究通过深入的单细胞转录组分析，揭示了mRNA疫苗注射部位复杂的免疫反应网络，并特别强调了IFN-β在促进细胞免疫中的作用。以下是对研究结果的进一步讨论：
IFN-β作为mRNA疫苗的重要免疫佐剂：传统上，LNP被认为是mRNA疫苗的主要免疫佐剂，因为它能够诱导强烈的炎症反应。然而，本研究发现mRNA成分同样具有重要的免疫学作用，特别是通过诱导IFN-β的产生来促进细胞免疫。这一发现挑战了以往对mRNA疫苗佐剂作用的认知，并强调了mRNA疫苗各组分之间的协同作用。
IFN-β在细胞免疫中的多重作用：IFN-β不仅能够直接促进树突状细胞的活化和迁移，还能够通过上调ISGs的表达来增强抗原呈递和T细胞活化。此外，IFN-β还可能通过调节免疫微环境来间接促进细胞免疫。这些多重作用共同构成了IFN-β在mRNA疫苗诱导的免疫反应中的核心地位。
对未来mRNA疫苗开发的启示：本研究的结果为开发更高效的mRNA疫苗提供了重要思路。通过优化mRNA疫苗的设计，如调整mRNA序列、修饰LNP配方或结合其他免疫佐剂，可能能够进一步增强IFN-β的产生和细胞免疫的诱导。此外，针对特定病原体或疾病状态，开发个性化的mRNA疫苗也可能成为未来的研究方向。
https://www.amyjet.com/products/PBL-12401-1.shtml