EpiNext CUT&LUNCH检测试剂盒：快速高效的研究体内DNA-蛋白质相互作用
在体内富集组蛋白或转录因子（TF）复合DNA，然后进行qPCR和/或下一代测序，为研究全基因组蛋白质-DNA相互作用提供了有利的工具。通常用于实现这一目标的主要方法是染色质免疫沉淀，然后进行测序（ChIP-seq）。该方法包括高度特异的ChIP-exo和ChIP-nexus。这两种分析提供了高分辨率的绘图。然而，这些检测的主要局限性在于，它们需要大量的输入材料、细胞或组织才能在背景噪声中产生足够强的信号。CUT&RUN（靶下切割和核酸酶下释放）是为绘制蛋白质与DNA与有限生物材料的相互作用而开发的，这需要更少的样品量，也显著提高了绘制分辨率。然而，该测定的一个相当大的缺点是抗体未偶联的pAG-MNase的非特异性切割，显著限制了CUT和RUN对不同物种和细胞/组织类型中大多数转录因子的特异性。此外，原始的CUT&RUN步骤复杂，需要优化测定条件，这仍然很耗时。
艾美捷EpiNext CUT&LUNCH检测试剂盒：
货号：P-2035-24
输入类型：细胞、组织
研究领域：染色质与转录
目标应用：蛋白质-DNA富集
容器格式：管
100%保证：6个月
EpiNext CUT&LUNCH检测试剂盒组成：
*使用前将溶液旋转到底部。
EpiNext CUT&LUNCH检测试剂盒检测原理：
EpiNext™ CUT&LUNCH（目标下切割并均匀释放独特核酸复合物）试剂盒提供了一种快速高效的方法来研究体内DNA-蛋白质相互作用。它整合了ChIP和CUT&RUN的所有优势，同时有效解决了它们的局限性。
EpiNext CUT&LUNCH检测试剂盒具有以下优点和特点：
极快速的三步协议：直接从完整的细胞开始，无需ConA固定。程序可以在1小时50分钟内完成，最小化核损伤和染色质损失，同时保持天然染色质结构。
增强的特异性和最小化的背景：独特的核酸切割酶通过选择性地在目标蛋白/DNA复合物两端切割DNA，确保低序列偏差，不影响与蛋白质结合的DNA。非特异性蛋白-DNA复合物被选择性消除，实现目标蛋白富集区域的高分辨率映射。
低输入材料：在最短时间内完成强大的未结合DNA切割和免疫捕获。这种方法同时使用细胞和组织，同时提供目标蛋白的最大降解保护和最小样本损失。因此，输入的细胞数量可以少至500个细胞。
广泛的适用性：适用于各种物种的培养细胞以及新鲜或冷冻组织，与组蛋白和转录因子兼容，同时保持检测的特异性和灵敏度。
高度便捷：试剂盒包含所有必要的组分，使EpiNext™ CUT&LUNCH检测试剂盒既方便又经济。
与现有流程的无缝集成：用于NGS的富集DNA可以与现有的、经过时间考验的ChIP-seq生物信息学软件和工具一起分析。
EpiNext CUT&LUNCH检测试剂盒保存建议：
该试剂盒分两部分运输：第一部分在室温下，第二部分在4°C的冷冻冰袋上。
收到后，根据上表中的温度避光储存组件。
注：使用前检查WB（清洗缓冲液）和PB（透化缓冲液）是否含有盐沉淀。 如果是这样，请在室温或37°C下短暂加热并摇晃，直至盐重新溶解。
试剂盒的所有组分在适当储存的情况下，自装运之日起可稳定储存6个月
https://www.amyjet.com/products/P-2035-24.shtml
CD19:CD3双特异性桥接化学发光ELISA试剂盒：双抗原靶标结合评估专用
双特异性CD19:CD3桥接化学发光ELISA试剂盒是一种ELISA，旨在分析双特异性抗体（BsAbs）桥接CD19（分化簇19）和CD3（分化簇3）的能力，以用于筛查和分析应用。该检测试剂盒可以确定抗CD19-抗CD3双特异性抗体是否同时结合两个靶标并将CD19连接到CD3。双特异性CD19:CD3桥接化学发光ELISA检测试剂盒配有足够的重组人CD19（氨基酸20-291）、含CD3的检测试剂和用于100种酶反应的检测缓冲液。该试剂盒还包括作为阳性对照的抗CD19-抗CD3双特异性抗体。
艾美捷CD19:CD3双特异性桥接化学发光ELISA试剂盒：
货号：BPS-82764
同义词：簇分化19，也称为B淋巴细胞表面抗原B4，分化抗原CD19，T细胞表面抗原Leu-12，CVID3，B4
试剂盒格式：化学发光
物种：人类
所需但未提供的物料：
测试样本（纯化的重组蛋白、人血清、细胞培养上清液）
1x PBS（磷酸盐缓冲液）
PBST缓冲液（含0.05% Tween-20的1x PBS）
能够读取发光的微孔板读取器
可调微量移液器和无菌尖头
轨道摇床
储存/稳定性：如果按照指示储存，该试剂盒从收货之日起6个月内性能最佳。
应用：研究CD19:CD3复合物形成，同时评估双特异性抗体与其双重抗原靶标的结合，用于药物发现和高通量筛选（HTS）。
注意：适用于人血清、细胞培养上清液，以及纯化蛋白的使用。
运输温度：-80°C
科学类别：免疫治疗靶点
仅限研究使用
CD19:CD3双特异性桥接化学发光ELISA试剂盒数据示例：
图：两种不同的抗CD19-抗CD3双特异性抗体对其双抗原靶标的同时结合能力。
CD19:CD3双特异性桥接化学发光ELISA试剂盒文献参考：
Robinson H., et al., 2018 Blood 132 (5): 521-532.
Ma J., et al., 2021 Front Immunol. 12:626616.
相关产品：
抗CD19 CAR/NFAT（萤光素酶）报告基因Jurkat细胞系（CD19 SCFV-CD28-4-1BB-CD3ζ）
抗CD19 CAR-T细胞
萤火虫荧光素酶CD19敲除Raji细胞系
CD19敲除Raji细胞系
萤火虫荧光素酶CD19敲除NALM6细胞系
CD19，Fc融合（IgG1），Avi-Tag重组
https://www.amyjet.com/products/P-2035-24.shtml
胰高血糖素ELISA试剂盒Glucagon ELISA：精准测定血浆中胰高血糖素水平
胰高血糖素ELISA试剂盒Glucagon ELISA是一种定量酶联免疫吸附试验，用于测定人EDTA血浆样本中的胰高血糖蛋白。胰高血糖素ELISA显示21种交叉反应物（包括胃泌酸调节蛋白和Glicentin）的交叉反应不可检测。
结果应与其他临床和实验室数据相结合，以帮助医生诊断与胰高血糖素水平相关的碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病、高血糖和低血糖。
本试剂盒仅供专业使用，仅供实验室使用。
艾美捷胰高血糖素ELISA试剂盒Glucagon ELISA（ALP-11-GLUHU-E01）预期用途：
胰高血糖素ELISA是一种定量酶联免疫吸附测定（ELISA），用于测定人类EDTA血浆样本中的胰高血糖素。结果应与其他临床和实验室数据结合，以帮助医生诊断与胰高血糖素水平相关的碳水化合物代谢障碍，包括糖尿病、高血糖和低血糖。该试剂盒仅供专业人员使用，仅限于实验室使用。在美国仅用于体外诊断。在美国以外地区仅供研究使用。该试剂盒旨在手动使用，但也可以适应开放式自动分析仪。用户有责任验证该试剂盒在任何自动分析仪上的性能。
测试原理：
ALPCO胰高血糖素ELISA是一种两步捕获或“夹心”型免疫测定。该测定利用了两种高度特异性的单克隆抗体：一种特异于胰高血糖素的单克隆抗体被固定在微孔板上，另一种特异于胰高血糖素不同表位的单克隆抗体则与辣根过氧化物酶（HRP共轭）结合。在第一步孵育中，样本、标定物和对照中存在的胰高血糖素与固定在微孔板上的抗体结合。通过洗涤步骤去除多余和未结合的物质。
在第二步孵育中，加入HRP共轭抗体（HRP共轭），该抗体特异性结合任何固定的胰高血糖素，从而形成夹心复合物。未结合的HRP共轭通过洗涤步骤去除。接下来，加入TMB底物（酶底物），该底物与HRP反应生成蓝色产物，其颜色深浅与胰高血糖素的量成正比。通过加入终止溶液终止酶反应，使颜色从蓝色转变为黄色。使用微孔板读取器在450 nm处测量吸光度。使用一组标定物绘制标定曲线，从中可以直接读取样本和对照中的胰高血糖素含量。
补充信息：
胰高血糖素是一种由29个氨基酸组成的肽，是由胰腺α细胞中的前胰高血糖素（160个氨基酸）通过前蛋白转化酶2切割产生的。在肠道L细胞中，前胰高血糖素被切割成69个氨基酸的肽类物质glicentin。glicentin可以进一步加工成37个氨基酸的肽oxyntomodulin。这些肽在刺激下同时释放。
胰高血糖素参与碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢，是身体的主要分解代谢激素。胰高血糖素提高血液中葡萄糖和脂肪酸的浓度，并通过促进糖异生和糖原分解在维持葡萄糖稳态中发挥重要作用。胰高血糖素传统上被认为是胰岛素的拮抗剂，胰岛素降低血糖水平，而胰高血糖素则增加血糖水平。随着血糖水平的降低，胰腺释放更多的胰高血糖素；而当血糖水平升高时，胰腺释放的胰高血糖素减少。一旦血糖水平恢复正常，胰高血糖素的分泌就会停止。
胰高血糖素还减少脂肪组织和肝脏中的脂肪酸合成，并促进这些组织中的脂解，使脂肪酸释放到循环中，以便在需要时在骨骼肌等组织中被分解以产生能量。胰高血糖素还通过脂解调节葡萄糖的生产速率。
在胰岛素抑制的情况下，胰高血糖素会在人类体内诱导脂解。胰高血糖素由胰腺朗格汉斯岛的α细胞分泌。最近的研究表明，胰高血糖素的产生也可能发生在胰腺以外，肠道是最可能的胰腺外胰高血糖素合成部位。研究发现，糖尿病患者的胰高血糖素水平相对于胰岛素可能升高，且有提出胰高血糖素可能促进高血糖和低血糖的发展。研究人员发现，糖尿病患者更容易发展为胰腺炎。
文献参考：
1. Kobayashi M et al. A newly developed glucagon sandwich ELISA is useful for more accurate
glucagon evaluation than the currently used sandwich ELISA in subjects with elevated plasma proglucagon-derived peptide levels. J Diabetes Investig. 2023; May;14(5):648-658;
Epub 2023 Feb 2.
2. Rix I, Nexøe-Larsen C, Bergmann NC, et al. Glucagon Physiology. [Updated 2019 Jul 16].In: Feingold KR, Anawalt B, Blackman MR, et al., editors. Endotext [Internet]. South Dartmouth (MA): MDText.com, Inc.; 2000-.
3. Taborsky GJ Jr. The physiology of glucagon. J Diabetes Sci Technol. 2010 Nov 1;4(6):1338-44. doi: 10.1177/193229681000400607. PMID: 21129328; PMCID: PMC3005043.
4. Sandoval DA, D'Alessio DA. Physiology of proglucagon peptides: role of glucagon and GLP1 in health and disease. Physiol Rev. 2015 Apr;95(2):513-48. doi:10.1152/physrev.00013.2014. PMID: 25834231.
https://www.amyjet.com/products/ALP-11-GLUHU-E01.shtml
Wheat Germ Agglutinin, AF488 Labeled小麦胚芽凝集素，AF488标记：细胞分析和成像研究的关键试剂
AAT Bioquest-XFD488化学结构与Alexa Fluor®488相同（Alexa Fluor™是ThermoFisher的商标）。麦胚凝集素（WGA）是一种与N-乙酰-D-葡糖胺和唾液酸结合的凝集素。由于其生物学应用，它是研究最多、最有用的凝集素之一。由于WGA与糖复合物结合，其衍生物和偶联物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。WGA的碳水化合物结合特异性针对β-1,4-GlcNAc连接的残基序列，即壳聚糖。每个单体包含两个相同的、不相互作用的结合位点，它们与3或4个β-1,4-GlcNAc单元互补。在所研究的单糖中，只有GlcNAc与WGA结合。ManNAc不结合，GalNAc只弱结合。WGA的XFD488共轭物相当于WGA的Alexa Fluor®488共轭物。它表现出明亮的绿色荧光。XFD488 WGA缀合物与唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖残基结合。
艾美捷Wheat Germ Agglutinin, AF488 Labeled小麦胚芽凝集素，AF488标记：
货号：AAT-25500
修正因子（260纳米）：0.30
修正因子（280纳米）：0.11
消光系数（厘米^-1 摩尔^-1）：71000
激发（纳米）：499
发射（纳米）：520
量子产率：0.921
预期用途：仅限研究使用（RUO）
储存：冷冻（< -15°C）；尽量减少光照
荧光显微镜
激发 FITC滤光片组
发射 FITC滤光片组
推荐板 黑色壁，透明底部
图：活HeLa细胞用5µg/mL标记的小麦胚凝集素XFD488染色30分钟，然后用Hoechst 33342（目录号17535）染色。使用FITC和DAPI滤光片组通过荧光显微镜获取图像。
Wheat Germ Agglutinin, AF488 Labeled小麦胚芽凝集素，AF488标记文献参考：
Wheat germ agglutinin is involved in the protective action of 24-epibrassinolide on the roots of wheat seedlings under drought conditions.
Authors: Avalbaev, Azamat and Bezrukova, Marina and Allagulova, Chulpan and Lubyanova, Alsu and Kudoyarova, Guzel and Fedorova, Kristina and Maslennikova, Dilara and Yuldashev, Ruslan and Shakirova, Farida
Journal: Plant physiology and biochemistry : PPB (2020): 420-427
Membrane-associated gamma-glutamyl transferase and alkaline phosphatase in the context of concanavalin A- and wheat germ agglutinin-reactive glycans mark seminal prostasome populations from normozoospermic and oligozoospermic men.
Authors: Janković, Tamara and Goč, Sanja and Mitić, Ninoslav and Danilović Luković, Jelena and Janković, Miroslava
Journal: Upsala journal of medical sciences (2020): 10-18
Succinylated Wheat Germ Agglutinin Colocalizes with the Toxoplasma gondii Cyst Wall Glycoprotein CST1.
Authors: Guevara, Rebekah B and Fox, Barbara A and Bzik, David J
Journal: mSphere (2020)
Wheat germ agglutinin is a biomarker of whole grain content in wheat flour and pasta.
Authors: Killilea, David W and McQueen, Rebecca and Abegania, Judi R
Journal: Journal of food science (2020): 808-815
Wheat germ agglutinin liposomes with surface grafted cyclodextrins as bioadhesive dual-drug delivery nanocarriers to treat oral cells.
Authors: Wijetunge, Sashini S and Wen, Jianchuan and Yeh, Chih-Ko and Sun, Yuyu
Journal: Colloids and surfaces. B, Biointerfaces (2020): 110572
https://www.amyjet.com/products/AAT-25500.shtml
ReadiLink xtra快速iFluor 350抗体标记试剂盒(与BSA兼容)解决方案
ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂盒基本上只需要2个简单的混合步骤，不需要柱纯化。ReadiLink™试剂盒中使用的预激活iFluor®350非常稳定，与抗体具有良好的反应性和选择性。该试剂盒具有标记约2x50 ug抗体的所有基本成分。试剂盒中提供的两瓶预活化iFluor®350染料中的每一瓶都针对标记约50µg抗体进行了优化。ReadiLink™xtra iFluor®350快速抗体标记试剂盒提供了一种方便而稳健的方法，可以用亮蓝色荧光iFluro®350荧光团标记单克隆和多克隆抗体。AAT Bioquest的iFluor®染料经过优化，可用于标记蛋白质，特别是抗体。这些染料明亮、耐光，对蛋白质的淬灭作用最小。它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如350、405、488、555和633nm）很好地激发。
艾美捷ReadiLink xtra快速iFluor 350抗体标记试剂盒(与BSA兼容)：
货号：AAT-1950
单位尺寸：2次标记
修正因子（260纳米）：0.83
修正因子（280纳米）：0.23
消光系数（厘米^-1 摩尔^-1）：200001
激发（纳米）：345
发射（纳米）：450
量子产率：0.95
预期用途 仅限研究使用（RUO）
组分：
组分A：预活化的iFluor® 350 2瓶
组分B：反应缓冲液 1瓶（20微升）
组分C：TQ™-染色的猝灭缓冲液 1瓶（20微升）
样品实验协议：
运行偶联反应
将蛋白质工作溶液（溶液A）加入标记染料的一个瓶中（组分A），并通过反复吹打几次或短时间涡旋瓶来充分混合。
注意：如果标记100微克蛋白质，使用两瓶（组分A）标记染料，将100微克蛋白质分成2 x 50微克蛋白质，并分别与一瓶标记染料反应。然后在下一步中合并两个瓶。
将偶联反应混合物在室温下保持30-60分钟。
注意：如果需要，偶联反应混合物可以旋转或摇晃更长时间。
停止偶联反应：
加入5微升（对于50微克蛋白质）或10微升（对于100微克蛋白质），即总反应体积的10%的TQ™-染色的猝灭缓冲液（组分C）到偶联反应混合物中；充分混合。
在室温下孵育10分钟。标记的蛋白质（抗体）现在可以使用。
蛋白质偶联物的储存：
蛋白质偶联物应在载体蛋白存在下（例如，0.1%牛血清白蛋白）以> 0.5毫克/毫升的浓度储存。对于更长时间的储存，蛋白质偶联物可以冻干或分成单次使用的小份，并储存在≤ -20°C。
工作溶液的准备：
蛋白质工作溶液（溶液A）
对于标记50微克蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1毫克/毫升），将5微升（总反应体积的10%）的反应缓冲液（组分B）与50微升的目标蛋白质溶液混合。
注意：如果您有不同的蛋白质浓度，请相应调整蛋白质体积，以使标记反应中有大约50微克的蛋白质可用。
注意：对于标记100微克蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1毫克/毫升），将10微升（总反应体积的10%）的反应缓冲液（组分B）与100微升的目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲液（PBS）中，pH 7.2 - 7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须对其进行透析，以对抗1X PBS，pH 7.2 - 7.4，或者使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（产品编号UFC501008来自Millipore）以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：含有0.1至0.5%牛血清白蛋白（BSA）的不纯抗体或稳定化的抗体将被很好地标记。
注意：为了获得最佳的标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2毫克/毫升，低于1毫克/毫升的浓度会显著降低偶联效率。
图：HeLa细胞微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4%PFA固定，用0.1%Triton X-100渗透并封闭。然后用兔抗微管蛋白单克隆抗体孵育细胞，并用ReadiLink™xtra Rapid iFluor®350抗体标记试剂盒（目录号1950）标记的山羊抗兔IgG染色。
Wheat Germ Agglutinin, AF488 Labeled小麦胚芽凝集素，AF488标记文献参考：
Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.
Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min
Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43
Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.
Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061
Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.
Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald
Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66
A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.
Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L
Journal: NPJ vaccines (2019): 3
Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.
Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi
Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526
https://www.amyjet.com/products/AAT-1950.shtml
钙离子荧光探针Fluo-3,AM,超级纯，细胞内钙离子动态精准监测
钙测量对于许多生物学研究至关重要。结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光微孔板读数器来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Fluo-3和Rhod-2是可见光兴奋性钙指示剂中最常用的。Fluo-3指示剂广泛应用于流式细胞术和共聚焦激光扫描显微镜。最近，Fluo-3，AM已被广泛用于基于细胞的高通量筛选试验，用于功能性GPCR试验。Fluo-3基本上是不荧光的，除非与Ca2+结合，并且在饱和Ca2+时的量子产率为~0.14，Ca2+的Kd为390 nM。
艾美捷钙离子荧光探针Fluo-3,AM,超级纯：
货号：AAT-21011
单位尺寸：1毫克
解离常数（Kd，纳摩尔）：390
分子量：1129.85
溶剂：DMSO
消光系数（厘米^-1 摩尔^-1）：86,0001
激发（纳米）：506
发射（纳米）：515
量子产率：0.151
仅限研究使用（RUO）
储存：冷冻（< -15°C）；尽量减少光照
CAS：121714-22-5
激发：FITC
发射：FITC
推荐板：黑色壁，透明底部
激发：490
发射：525
截止：515
推荐板：黑色壁，透明底部
仪器规格：底部读取模式，可编程液体处理
制备母液：除非另有说明，所有未使用的母液应在制备后分装成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。
Fluo-3 AM 超纯级别母液：在高质量的无水DMSO中制备Fluo-3 AM的2至5 mM母液。
制备工作溶液：
Fluo-3 AM 超纯级别工作溶液
在实验当天，将Fluo-3 AM溶解在DMSO中，或将指示剂母液的小份解冻至室温。
在您选择的缓冲液中（例如，Hanks和Hepes缓冲液）用0.04%的Pluronic® F-127制备2至20 µM的Fluo-3 AM工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用最终浓度为4-5 μM的Fluo-3 AM。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须通过实验确定。
注意：非离子洗涤剂Pluronic® F-127有时被用来增加Fluo-3 AM的水溶性。可以从AAT Bioquest购买各种Pluronic® F-127溶液。
注意：如果您的细胞包含有机阴离子转运体，可以在染料工作溶液中加入丙磺舒（1-2 mM）（最终浓度为0.5-1 mM），以减少脱酯化指示剂的泄漏。可以从AAT Bioquest购买各种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液。
样品实验协议：
以下是AAT推荐的将AM酯加载到活细胞中的协议。此协议仅提供指导，并应根据您的具体需求进行修改。
在生长介质中准备细胞过夜。
第二天，将1X Fluo-3 AM工作溶液添加到您的细胞板中。
注意：如果您的化合物与血清发生干扰，在染料加载前用新鲜的HHBS缓冲液替换生长介质。
将染料加载的板在37°C的细胞培养箱中孵育30至60分钟。
注意：将染料孵育超过2小时可以提高某些细胞系的信号强度。
将染料工作溶液替换为HHBS或您选择的缓冲液（如果适用，含有阴离子转运体抑制剂，如1 mM丙磺舒），以去除多余的探针。
根据需要添加刺激剂，并同时使用配备FITC滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统的荧光板读取器（如FDSS、FLIPR或FlexStation）在490/525 nm截止515 nm处测量荧光。
钙离子荧光探针Fluo-3,AM,超级纯文献参考：
A flow cytometric comparison of Indo-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux
Authors: Bailey S, Macardle PJ.
Journal: J Immunol Methods (2006): 220
Functional fluo-3/AM assay on P-glycoprotein transport activity in L1210/VCR cells by confocal microscopy
Authors: Orlicky J, Sulova Z, Dovinova I, Fiala R, Zahradnikova A, Jr., Breier A.
Journal: Gen Physiol Biophys (2004): 357
Comparison of human recombinant adenosine A2B receptor function assessed by Fluo-3-AM fluorometry and microphysiometry
Authors: Patel H, Porter RH, Palmer AM, Croucher MJ.
Journal: Br J Pharmacol (2003): 671
Measurement of the dissociation constant of Fluo-3 for Ca2+ in isolated rabbit cardiomyocytes using Ca2+ wave characteristics
Authors: Loughrey CM, MacEachern KE, Cooper J, Smith GL.
Journal: Cell Calcium (2003): 1
[Ca2+]i following extrasystoles in guinea-pig trabeculae microinjected with fluo-3 - a comparison with frog skeletal muscle fibres
Authors: Wohlfart B., undefined
Journal: Acta Physiol Scand (2000): 1
https://www.amyjet.com/products/AAT-21011.shtml
Cy3酪胺(Cy3 tyramite)：在分子生物学和细胞成像中的应用
对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶扩增程序足以实现足够的抗原检测。然而，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。酪胺信号扩增（TSA）已被证明是一种特别通用和强大的酶扩增技术，具有提高的检测灵敏度。TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将标记的含酪胺底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可以共价结合HRP处或附近的酪氨酸残基。为了实现最大的IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记的多个酪胺底物的周转所赋予的信号放大转化为对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用少量抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，TSA方法产生的灵敏度增强允许增加一次抗体稀释液以减少非特异性背景信号，并可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。Cy3-酪胺含有明亮的Cy3，可以用标准的Cy3过滤器组很容易地检测到。
艾美捷Cy3酪胺(Cy3 tyramite)：
货号：AAT-11065
单位尺寸：1毫克
分子量：863.96
H-phrase：H303, H313, H333
仅限研究使用（RUO）
R-phrase：R20, R21, R22
储存：冷冻（< -15°C）；尽量减少光照
激发：Cy3, TRITC滤光片组
发射：Cy3, TRITC滤光片组
推荐板： 黑色壁，透明底部
母液的制备：
除非另有说明，所有未使用的母液应在制备后分装成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。
酪胺母液（1000X）：加入适量的DMSO以制备1-5 mM的酪胺母液。
注意：制作单次使用的小份，并在2-8°C下避光储存未使用的1000X母液。避免反复冻融。
工作溶液的制备：
酪胺工作溶液（1X）
在含有0.003% H2O2的您选择的缓冲液中加入1 µL的酪胺母液。
注意：为了最佳性能，请使用pH=7.4的Tris缓冲液。
注意：酪胺工作溶液应立即使用，并在当天新鲜制备。避免直接暴露于光线。
二抗-HRP工作溶液
根据制造商的建议，制备适当浓度的二抗-HRP工作溶液。
样品实验协议：
此协议适用于细胞和组织的染色。
细胞固定和渗透
用3.7%甲醛或多聚甲醛在PBS中室温固定细胞或组织20分钟。
用PBS冲洗细胞或组织两次。
用0.1% Triton X-100溶液在室温下渗透细胞1-5分钟。
用PBS冲洗细胞或组织两次。
组织固定、脱蜡和再水化
根据标准IHC协议进行组织的脱蜡和脱水。
过氧化物酶标记：
可选：通过在过氧化物酶封闭溶液（如3%过氧化氢）中孵育细胞或组织样本10分钟来抑制内源性过氧化物酶活性。用PBS在室温下冲洗两次。
可选：如果使用HRP共轭的链霉亲和素，建议用生物素封闭缓冲液阻断内源性生物素。
用首选的封闭溶液（如含1% BSA的PBS）在4°C下封闭30分钟。
移除封闭溶液，并加入推荐稀释液中稀释的一抗，在室温下孵育60分钟或在4°C下过夜。
用PBS冲洗三次，每次5分钟。
向每个样本施加100 µL的二抗-HRP工作溶液，并在室温下孵育60分钟。
注意：孵育时间和浓度可根据信号强度进行调整。
用PBS冲洗三次，每次5分钟。
酪胺标记：
准备并施加100 µL的酪胺工作溶液到每个样本，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果观察到非特异性信号，可以缩短与酪胺的孵育时间。您应该使用不同孵育时间点的阳性和阴性对照样本来优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用更低浓度的酪胺。
用PBS冲洗三次。
对比染色和荧光成像
根据需要对细胞或组织样本进行对比染色。AAT提供了一系列核对比染色试剂，如表1所列。请遵循试剂附带的说明。
使用具有防褪色特性的封片介质安装盖玻片。
注意：为确保最佳结果，建议使用ReadiUse™显微镜封片溶液（目录号20009）或FluoroQuest™ TSA/PSA防褪色封片介质*优化用于酪胺和丙烯酰胺成像*（目录号44890）代替Vectashield®封片介质。在某些情况下，Vectashield®封片介质可能不适用于某些TSA/PSA缀合物。
使用适当的滤光片组来观察酪胺标记的信号。
图：石蜡包埋的人肺癌的免疫荧光图像，用EpCAM兔单克隆抗体标记，然后用HRP标记的山羊抗兔IgG（H+L）标记（Cat#16793）。该信号是用AAT的Cy3-酪胺（Cat#11065，红色）产生的。细胞也用DAPI（蓝色）复染。
Cy3酪胺(Cy3 tyramite)文献参考：
Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326
Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161
Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100
Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46
KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75
https://www.amyjet.com/products/AAT-11065.shtml
RecombiMAb抗小鼠Ly6G/RecombiMAb anti-mouse Ly6G：精准识别小鼠中性粒细胞的强效工具
1A8-CP129单克隆抗体是原始1A8抗体的嵌合版本。可变结构域序列与原始1A8相同，但恒定区序列已从大鼠IgG2a切换到小鼠IgG2a。1A8-CP129抗体不含Fc突变，就像原始大鼠IgG2a抗体不含一样。1A8-CP129单克隆抗体与小鼠Ly6G发生反应。Ly6G是GPI锚定细胞表面蛋白Ly-6超家族的21-25kDa成员，在细胞信号传导和细胞粘附中发挥作用。Ly6G在髓系细胞发育过程中表达不同，包括单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和中性粒细胞。单核细胞在发育过程中通常短暂表达Ly6G，而成熟粒细胞和外周中性粒细胞保持表达，使Ly6G成为这些群体的良好细胞表面标志物。与RB6-8C5抗体不同，1A8-CP129抗体与小鼠Ly6G特异性反应，与Ly6C没有交叉反应。
艾美捷RecombiMAb抗小鼠Ly6G/RecombiMAb anti-mouse Ly6G：
货号 BXC-CP129
亚型 小鼠IgG2a，κ
推荐亚型对照 InVivoPlus小鼠IgG2a亚型对照，未知特异性
推荐稀释缓冲液 InVivoPure pH 7.0稀释缓冲液
偶联 此产品未偶联。我们的抗体偶联服务可提供偶联服务。
免疫原 EL4J细胞转染Ly6G
报告应用
体内中性粒细胞耗竭*
体内MDSC耗竭*
免疫荧光*
石蜡免疫组化*
冰冻免疫组化*
流式细胞术*
*报告适用于原始的大鼠IgG2a 1A8抗体
配方 PBS，pH 7.0
不含稳定剂或防腐剂
内毒素 <1EU/mg (<0.001EU/μg)
通过LAL凝胶凝集试验确定
聚集 <5%
通过SEC确定
纯度 >95%
通过SDS-PAGE确定
无菌 0.2 µm过滤
生产 从无动物设施中的CHO细胞上清液中纯化
纯化 Protein G
分子量 150 kDa
小鼠病原体检测 鼠痘病毒/鼠痘：阴性
汉坦病毒：阴性
K病毒：阴性
乳酸脱氢酶升高病毒：阴性
淋巴细胞性脑膜炎病毒：阴性
小鼠腺病毒：阴性
小鼠巨细胞病毒：阴性
小鼠肝炎病毒：阴性
小鼠微小病毒：阴性
小鼠诺罗病毒：阴性
小鼠细小病毒：阴性
小鼠轮状病毒：阴性
肺炎鼠疫杆菌：阴性
小鼠肺炎病毒：阴性
多瘤病毒：阴性
鼠脑心肌炎病毒：阴性
仙台病毒：阴性
储存 抗体溶液应以原始浓度在4°C下储存。不要冷冻。
文献参考：
in vivo neutrophil depletion
Davis, R. W. t., et al. (2018). "Luminol Chemiluminescence Reports Photodynamic Therapy-Generated Neutrophil Activity In Vivo and Serves as a Biomarker of Therapeutic Efficacy" Photochem Photobiol .
in vivo neutrophil depletion
Moynihan, K. D., et al. (2016). "Eradication of large established tumors in mice by combination immunotherapy that engages innate and adaptive immune responses" Nat Med. doi : 10.1038/nm.4200.
in vivo neutrophil depletion
Conde, P., et al. (2015). "DC-SIGN(+) Macrophages Control the Induction of Transplantation Tolerance" Immunity 42(6): 1143-1158.
https://www.amyjet.com/products/BXC-CP129-1mg.shtml