2024年7月26日，美国药典（USP）微生物专家委员会正式宣布，将第<86>章“使用重组试剂的细菌内毒素测试”纳入《美国药典-国家处方集》（USP-NF）。根据公告内容，第<86>章详尽阐述了利用重组级联试剂（rCR）等创新非动物源试剂进行细菌内毒素检测的具体技术规范。该章节的最终版本预计将于2024年11月对外公布，为行业预留充足时间进行预适应与采纳，而正式生效日期则设定为2025年5月。
为了帮助行业更好地理解和实施这一新章节，美国药典（USP）提供了针对第<86>章使用“使用重组试剂的细菌内毒素测试”的常见问题解答，旨在全面解析和澄清相关疑问，确保行业能准确理解和高效应用这一创新试剂进行细菌内毒素检测。以下是对这些问题的详细梳理：
Q1：如果第<86>章“使用重组试剂进行细菌内毒素检测”是1000以下的章节，为什么需要按照该章节的规定完成附加验证？
目前，第<86>章中的方法被视为第<85>章“细菌内毒素检测（BET）”的替代方法。替代方法的定义可在一般注意事项6.30中找到:“替代方法或程序是指除相关物品的药典方法或程序以外的任何方法或程序。”
由于第<86>章包含替代方法，因此用户有责任确保主要方法（非产品特定方法）已经过验证（根据<1225>药典程序验证），并且该方法经过验证，适用于所测产品/材料（根据<1226>药典程序验证），从而确认方法是否适用于检测特定产品或材料。对于第<86>章，应评估供应商对检测试剂盒的主要验证，以确定其是否符合USP<1225>中要求的方法验证要求。符合药典方法验证要求（第<1226>章包含在第<86>章“准备检测”一节中。
如第<86>章所述，用户需要查看供应商提供的（或内部开发的）主要验证包，以确保该方法的验证状态适合其预期用途。成功完成这些步骤（第<86>章中的主要验证审查和成功完成预备测试）可用于证明所选方法适用于所测试的特定材料。由于迄今为止使用这些试剂的经验有限，监管机构可能在验收前要求提供更多的具体验证数据。
Q2：第<86>章是否与Ph Eur2.6.32协调？如果不协调，可以协调吗？
对于美国药典（USP）、标准，跨药典协调工作是通过药物讨论组（PDG）进行的，与ICHQ4B保持一致。
美国药典（USP）、欧洲药典（EP）、印度药典委员会（IPC）和日本药典（JP）使用鲎源检测试剂进行的细菌内毒素检测已协调一致，为全球和认可主要药典的市场中的最终用户带来了巨大利益。通过PDG进行协调是可以实现的，也是人们所期望的；目前正在努力开展讨论，以便今后与PDG实现协调。
Q3：为什么重组试剂没有添加到第<85>章？
因为第<85>章是一个与欧洲、印度和日本的相应章节相协调的章节。这些章节是ICHQ4B的一部分，这意味着它们在ICH地区的监管机构内被认为是可以互换的。因此，要及时进行修改比较困难。希望协调当前和未来的rBET章节；请参阅上面有关协调的问题。
Q4：USP如何评估多种产品和材料的研究数据，以证明将第<86>章确立为适用章节是合理的？
USP通用章节微生物学专家委员会的内毒素和热原小组委员会根据小组委员会的集体专业知识、现有的同行评审文献、对公开和提交的机密最终用户数据和验证的广泛审查以及政府联络人的意见制定了第<86>章。继续生成rBET数据并提交给全球药典将能够确定跨产品的适用性。
Q5：为什么重组级联试剂（rCR）被纳入第<86>章？
USP微生物专家委员会（MEC）内毒素小组委员会在广泛审查公开和提交的机密最终用户数据和验证以及现有的同行评审文献的基础上制定了第<86>章。同行评审文献中存在大量使用rFC和rCR的BET数据，MEC在制定本章时还审查了非公开/保密数据。在考虑这些信息的同时，还认识到重组试剂相当于天然因子C的生物技术，而天然因子C是负责检测马蹄蟹内毒素的生物传感器。
此外，rCR酶级联始于rFC。综合所有这些信息和数据，MEC一致认为，纳入rCR得到了所审查的科学和数据的支持。推进rBET章节符合USP扩大使用无动物方法和材料的承诺。
Q6：是否需要进行广泛的可比性/等效性研究，以证明从第<85>章过渡到第<86>章是合理的？
对于大多数内毒素检测产品来说，不需要进行广泛的可比性/等效性研究。在大多数情况下，只需证明产品特定方法的适用性即可，这在实践中与第<85>章类似。可能总会有例外情况，这些例外情况应基于最终用户的经验和材料特性。在某些情况下，可与相关监管机构一起对方法进行主动审查。
第<86>章采用了与第<85>章相同的内毒素容许限度、测量单位和主要参考标准。这与从兔热原试验（RPT）过渡到内毒素检测时实施的第<85>章形成鲜明对比，后者没有这些质量控制功能，仅包括动物饲养最佳实践。
此外，rBET是建立在数十年成熟的生物技术科学基础之上的，其作用机制相同：rFC是鲎因子C的克隆，细菌内毒素的检测是通过生物传感器鲎因子C进行的。
Q7：第<86>章的实施是否会影响USP第<151>章热原检测法的使用？
第<86>章的引入是USPMEC开发非动物测试模型的第一步。虽然第<86>章的引入对章节<151>没有直接影响，但它为引入可替代动物测试模型的新技术提供了一个框架。在MEC利益相关者的支持下，正在探索其他技术（例如单核细胞活化测试，MAT）以供未来引入。增加新的体外技术和/或仪器技术是USP致力于扩大无动物试验方法和材料使用范围的一部分。