Phosphosolutions--Anti-RBPMS抗体的应用和特异性说明
RBPMS（具有多重剪接的RNA结合蛋白），也称为HERMES，含有一个RRM（RNA识别基序）结构域，属于RNA结合蛋白的RRM家族。RBPMS以多种选择性剪接的异构体存在，被认为与RNA结合，可能起作用在RNA相关事件中，如转录和翻译。特异性RNA结合蛋白视网膜神经节细胞（RGCs）先前已被确定为RGCs的优秀标志物（邝等人，2010）。最近的研究结果表明，针对RBPMS的抗体是强效试剂专门鉴定多种哺乳动物物种中的RGC（Rodriguez等人，2014）。
艾美捷Anti-RBPMS抗体：
目录编号：1830-RBPMS
宿主物种：兔多克隆
格式：抗原亲和纯化
应用：WB（Western Blot）1:1000，IHC（免疫组化）1:100-1:2000，ICC（免疫细胞化学）1:200-1:500
测试物种：猫、豚鼠、人、小鼠、非人灵长类、猪、兔、大鼠、树鼩、鲸鱼、斑马鱼
预期反应性：犬、仓鼠
免疫原：对应于大鼠RBPMS蛋白N端区域的合成肽段，与钥匙孔蛤血蓝蛋白（KLH）结合。
分子量：24 kDa
引用此抗体：PhosphoSolutions 目录号1830-RBPMS，RRID: AB_2492225
特异性：特异于内源性约24 kDa RBPMS蛋白的水平。
生产/纯化：通过亲和层析在含有抗原肽的亲和柱上进行亲和纯化。
质量控制：每批进行Western blot检测。
缓冲液：PBS + 0.03% NaN3
储存：建议收到未稀释的抗体后，将其分装成较小的工作量（根据使用量10-30 µL/管），长期储存于-20°C或-80°C，同时保持一个工作量储存于4°C短期使用。避免冻融循环。
稳定性：自收到日期起，至少在-20°C下稳定1年。
Anti-RBPMS抗体图例：
左图：大鼠心脏裂解液的蛋白质印迹显示特异性标记约24kDa的RBPMS蛋白。
右图：小鼠视网膜神经节细胞的免疫染色显示红色RBPMS（1:1000）的特异性免疫标记。照片加州大学洛杉矶分校Allen Rodriquez提供天使。
Anti-RBPMS抗体文献参考：
Su, J., Byer, L., Liang, Y. and Fox, M.A. (2024). Distribution, development, and identity of retinal ganglion cells labeled in the Sert-Cre reporter mouse. The Journal of
Comparative Neurology, [online] 532(3), p.e25606. (IHC, 1:500, mouse)
Guo, C., Deshpande, M., Niu, Y., Kachwala, I., Flores-Bellver, M., Megarity, H., Nuse, T., Babapoor-Farrokhran, S., Ramada, M., Sanchez, J., Inamdar, N., Johnson, T.V.,
Canto-Soler, M.V., Montaner, S. and Sodhi, A. (2023). HIF-1α accumulation in response to transient hypoglycemia may worsen diabetic eye disease. Cell Reports,
[online] 42(1), p.111976. (IHC, human)
Wang, A.Y.M., Kulkarni, M.M., McLaughlin, A.J., Gayet, J., Smith, B.E., Hauptschein, M., McHugh, C.F., Yao, Y.Y. and Puthussery, T. (2023). An ON-type directionselective ganglion cell in primate retina. Nature, [online] 623(7986), pp.381–386. (IHC, NHP)
Ruzafa, N., Pereiro, X. and Vecino, E. (2022). Immunohistochemical Characterisation of the Whale Retina. Frontiers in Neuroanatomy, [online] 16, p.813369. (IHC,
1:4000, Whale)
Puller, C., Duda, S., Lotfi, E., Yousef Arzhangnia, Block, C.T., Ahlers, M.T. and Greschner, M. (2020). Electrical Coupling of Heterotypic Ganglion Cells in the Mammalian
Retina. The journal of neuroscience/ The Journal of neuroscience, 40(6), pp.1302–1310. (IHC, 1:500, guinea pig)
Johnson, E.N., Westbrook, T., Shayesteh, R., Chen, E.L., Schumacher, J.W., Fitzpatrick, D. and Field, G.D. (2019). Distribution and diversity of intrinsically
photosensitive retinal ganglion cells in tree shrew. The Journal of Comparative Neurology, [online] 527(1), pp.328–344. (IHC, 1:500, tree shrew)
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Phosphosolutions--抗GluR1亚基（Ser845）抗体，可完全消除免疫标记
由谷氨酸激活的离子通道通常被分为两类。那些对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）敏感的被称为NMDA受体（NMDAR），而那些由α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸（AMPA）激活的则被称为AMPA受体（AMPAR）。AMPAR由四个不同的谷氨酸受体亚单位组成，分别被指定为（GluR1-4），它们在大脑中几乎所有的兴奋性神经传递中都扮演着关键角色（Keinänen等人，1990年；Hollmann和Heinemann，1994年）。GluR1亚单位在神经系统中广泛表达。GluR1上的Ser-845位点的磷酸化被认为是由蛋白激酶A（PKA）介导的，而这个位点的磷酸化增加了AMPAR的导电性（Roche等人，1996年；Banke等人，2000年）。此外，这个位点的磷酸化还与突触可塑性以及学习和记忆联系在一起（Lee等人，2003年；Esteban等人，2003年）。
艾美捷抗GluR1亚基（Ser845）抗体：
目录编号：p1160-845
宿主物种：兔多克隆
格式：从混合血清中亲和纯化的抗原
应用：WB（Western Blot）1:1000，IHC（免疫组化）1:1000
测试物种：小鼠、大鼠
预期反应性：人、非人灵长类
免疫原：合成的磷酸化肽段，对应于大鼠GluR1蛋白中Ser845周围的氨基酸残基，与钥匙孔蛤血蓝蛋白（KLH）结合。
分子量：100 kDa
引用此抗体：PhosphoSolutions 目录号p1160-845，RRID: AB_2492128
特异性：特异于在Ser845位点磷酸化的约100 kDa GluR1蛋白的内源性水平。使用λ-磷酸酶处理可以完全消除免疫标记。
生产/纯化：通过在磷酸化和非磷酸化肽亲和柱上的顺序层析，从混合兔血清中亲和纯化制备。
质量控制：每批进行Western blot检测。
缓冲液：10 mM HEPES（pH 7.5），150 mM NaCl，每毫升100 µg BSA和50%甘油。
储存：建议在-20°C下储存，由于含有50%甘油，可以取出小份量而不进行冻融循环。
稳定性：自收到日期起，至少在-20°C下稳定1年。
抗GluR1亚基（Ser845）抗体图例：
大鼠海马裂解物的蛋白质印迹显示~100 kDa GluR1的特异性免疫标记蛋白质在第一泳道的Ser845处磷酸化（-）。磷特异性显示在第二条泳道（+）中通过印迹消除免疫标记用λ-磷酸酶（λ-Ptase，1200）治疗单位30分钟）。
抗GluR1亚基（Ser845）抗体文献参考：
Fabio Squarcio, Giulio Tononi and Cirelli, C. (2024). Effects of non‐rapid eye movement sleep on the cortical synaptic expression of GluA1‐containing AMPA
receptors. European Journal of Neuroscience. [online]
Fetterly, T.L., Catalfio, A.M. and Ferrario, C.R., 2023. Effects of junk-food on food-motivated behavior and nucleus accumbens glutamate plasticity; insights into the
mechanism of calcium-permeable AMPA receptor recruitment. Neuropharmacology, p.109772.
Hassan, Z., Coelho, D., Bossenmeyer-Pourié, C., Matmat, K., Arnold, C., Savladori, A., Alberto, J.M., Umoret, R., Guéant, J.L. and Pourié, G., 2023. Cognitive Impairment
Is Associated with AMPAR Glutamatergic Dysfunction in a Mouse Model of Neuronal Methionine Synthase Deficiency. Cells, 12(9), p.1267.
Mao, L.M., Mathur, N. and Wang, J.Q., 2022. An allosteric potentiator of metabotropic glutamate (mGlu) 2 receptors reduces the cocaine-stimulated ERK1/2
phosphorylation in the mouse striatum. Neuroscience Letters, p.137028.
Wei, W., Yount, S.T., Allen, Z.D., Bechdol, K.F., Xia, W., Mo, H. and Mabb, A.M., 2023. The mevalonate suppressor δ-tocotrienol increases AMPA receptor-mediated
neurotransmission. Biochemical and Biophysical Research Communications, 638, pp.112-119.
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Phosphosolutions--抗NCC（噻嗪敏感NaCl共转运体）（Thr53）抗体解决方案
噻嗪敏感的氯化钠共转运蛋白NCC是体内主要的NaCl转运蛋白远端曲小管（DCT）在维持血压方面起着重要作用（Rosenbaek等，2014；冯等，2015）。NCC在Thr-53、Thr-58和Ser-71处的磷酸化是NCC功能的重要介质（Rosenbaek等人，2014）。NCC按规定循环至质膜，在刺激后，它可以被磷酸化，从而增加NCC活性并减少NCC内吞作用，同时增加DCT中的NaCl转运（Feng等人，2015）。
艾美捷抗NCC（噻嗪敏感NaCl共转运体）（Thr53）抗体：
目录编号：p1311-53
宿主物种：兔多克隆
格式：从混合血清中亲和纯化的抗原
应用：WB（Western Blot）1:1000-1:6000，IHC（免疫组化）1:100-1:10,000
测试物种：人、小鼠、大鼠
预期反应性：豚鼠、仓鼠
免疫原：合成的磷酸化肽段，对应于小鼠NCC蛋白中Thr53周围的氨基酸残基，与钥匙孔蛤血蓝蛋白（KLH）结合。
分子量：160 kDa
引用此抗体：PhosphoSolutions 目录号p1311-53，RRID: AB_2650477
特异性：特异于在Thr53位点磷酸化的约160 kDa NCC蛋白的内源性水平。感兴趣的条带可能会因为糖基化而出现模糊。使用λ-磷酸酶处理可以完全消除免疫标记。
生产/纯化：通过在磷酸化和非磷酸化肽亲和柱上的顺序层析，从混合兔血清中亲和纯化制备。
质量控制：每批进行Western blot检测。
缓冲液：10 mM HEPES（pH 7.5），150 mM NaCl，每毫升100 µg BSA和50%甘油。
储存：建议在-20°C下储存，由于含有50%甘油，可以取出小份量而不进行冻融循环。
稳定性：自收到日期起，至少在-20°C下稳定1年。
抗NCC（噻嗪敏感NaCl共转运体）（Thr53）抗体图例：
左图：小鼠肾脏裂解物的Western blot结果显示，在第一道（-）中特异性免疫标记了约160 kDa的NCC蛋白，该蛋白在Thr53位点被磷酸化。第二道（+）显示了磷酸化特异性，其中免疫标记通过与lambda磷酸酶（λ-Ptase，1200单位处理30分钟）处理膜片被完全消除。
右图：对WT（野生型）和NCC KO（敲除型）小鼠的PFA灌注冷冻肾脏切片进行免疫染色，显示了在Thr53位点被磷酸化的NCC蛋白的特异性标记（目录号p1311-53，红色，1:100,000），在顶部可以看到，而在KO（底部）则没有染色。（图片由Lauren Miller，Ellison实验室，OHSU提供。）
抗NCC（噻嗪敏感NaCl共转运体）（Thr53）抗体文献参考：
Shu, T.-T., Gao, Z.-X., Mao, Z.-H., Yang, Y.-Y., Fu, W.-J., Pan, S.-K., Zhao, Q.-Q., Liu, D.-W., Liu, Z.-S. and Wu, P. (2024). Defective natriuresis contributes to hyperkalemia
in db/db mice during potassium supplementation. Journal of Hypertension. [online]
Wu, P., Li, S.-T., Shu, T.-T., Mao, Z.-H., Fu, W.-J., Yang, Y.-Y., Pan, S.-K., Liu, D.-W., Liu, Z.-S. and Gao, Z.-X. (2024). Impaired distal renal potassium handling in streptozotocin-induced diabetic mice. American Journal of Physiology. Renal Physiology, [online] 327(1), pp.F158–F170.
Zuchowski, Y., Carty, J.S., Trapani, J.B., Watts, J.A., Bock, F., Zhang, M., Terker, A.S., Zent, R., Delpire, E., Harris, R.C. and Arroyo, J.P. (2024). Kidney collecting ductderived vasopressin is not essential for appropriate concentration or dilution of urine. American Journal of Physiology. Renal Physiology, [online] 326(6), pp.F1091–F1100.
Aly, R., Darwish, S., Bala, N., Ebrahim, A., Shoemaker, L.R., McCray, J., Garrett, T.J. and Alli, A.A. (2024). Functional and metabolomic analysis of urinary extracellular
vesicles from juvenile mice with renal compensatory hypertrophy. Biochimica Et Biophysica Acta. Molecular Basis of Disease, [online] 1870(5), p.167096.
Castro, P.C., Santos-Rios, T.M., Martins, F.L., Crajoinas, R.O., Caetano, M.V., Lessa, L.M.A., Luchi, W.M., McCormick, J.A. and Girardi, A.C.C. (2024). Renal upregulation
of NCC counteracts empagliflozin-mediated NHE3 inhibition in normotensive but not in hypertensive male rat. American Journal of Physiology. Cell Physiology,[online] 326(6), pp.C1573–C1589.
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人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）直接分离DNA/topo复合物
人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）：
TopoGEN在拓扑异构酶靶向细胞筛选方面拥有丰富的经验。TopoGEN科学家团队开发并发表了一种检测活细胞中共价拓扑异构酶/基因组DNA复合物的方法（1,2），该方法在该领域得到了广泛应用。该方法称为ICE测定（体内酶复合物），最初需要CsCl梯度来纯化基因组DNA和特异性拓扑异构酶抗体，以检测DNA组分中捕获的拓扑异肽。这种方法虽然强大，但速度慢，劳动强度大，需要大型昂贵的设备。TopoGEN修改了该技术，允许在一步中直接分离DNA/topo复合物，省略了CsCl梯度步骤，并迅速提高了该方法的通量（见下图）。
特异性的关键是使用TopoGEN的高度定向抗体试剂来检测复合物。ICE检测可以在一天半内进行，第二天一早就能看到结果。只要进行适当的控制并使用单特异性抗体试剂，几乎可以在任何细胞或组织系统上进行分析。最后，该分析不再局限于每次运行6个样本（对于超速离心机转子），因此可以实现更大的通量。TopoGEN的新ICE方法快速方便，可用于任何拓扑异构酶靶标（I、II、III）。
高通量体内酶复合物（ICE）测定，用于测量内源性拓扑异构酶/基因组DNA共价复合物。一天的程序不需要CsCl离心步骤。ICE检测试剂盒具有拓扑特异性，因为TopoGEN提供与拓扑/DNA复合物相对应的抗体。
艾美捷人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）（#TopoGEN-TG1020-0）内容：
拓扑异构酶ICE检测试剂盒中包含足够进行24次检测的材料（每次检测需要一个60毫米的培养皿）。
特定抗体为每个试剂盒定义目标酶。
1、喜树碱（随拓扑异构酶I试剂盒提供）：冻干粉；用0.25毫升DMSO重悬以制备10 mM的库存溶液。
2、依托泊苷（随拓扑异构酶IIα和IIβ试剂盒提供）：冻干粉；用0.25毫升DMSO重悬以制备10 mM的库存溶液。
3、用于裂解和DNA制备的A-E缓冲液。
4、每个试剂盒都配有特定的抗体：
无抗体（客户自备）（目录号TG1020-0）
针对人拓扑异构酶I的抗体（目录号TG1020-1）。
针对人拓扑异构酶IIα的抗体（目录号TG1020-2a）
针对拓扑异构酶IIβ的抗体（目录号TG1020-2b）
针对拓扑异构酶IIIα的抗体（目录号TG1020-3a；包含拓扑异构酶I抗体对照）。
针对拓扑异构酶IIIβ的抗体（目录号TG1020-3b；包含拓扑异构酶I抗体对照）。
*由于没有经过验证的拓扑异构酶IIIα或β的毒物，我们包含拓扑异构酶I作为对照。通过包含拓扑异构酶I抗体和喜树碱，您可以确保ICE检测按预期工作。
TG1020-1REF说明：
作为TopoGEN人类拓扑异构酶ICE检测试剂盒的配套对照/参考，TopoGEN提供方便的内部控制，以有效评估和验证结果。该参考文献是从用喜树碱处理的细胞和相应的阴性药物对照制备的基因组DNA。TG1020-1REF产品具有非常高的+药物：无药物基因组DNA（来自Hela细胞）的比例，对应于理想的ICE Delta（或ICE-D）。该参考对照DNA是人类Top1共价复合物ICE检测试剂盒的配套产品。TopoGEN实际上提供了两种基因组DNA参考：一种来自未经处理的人类细胞，另一种来自用喜树碱（30分钟2.5μM）处理的人细胞。如果您以前从未进行过ICE检测，这些REFS将帮助您在自己的实验室中快速有效地建立检测。
样本数据显示了REF标记DNA的特异性（用单克隆抗体检测人Top1的印迹）。产品中包含两种基因组DNA（NEG和POS或阴性CPT和阳性CPT处理的基因组DNA）。还显示了VP16处理的对照（未包括在内），显示该测定对Top1的反应与预期一致。
人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）文献参考：
1. Subramanian, D., Furbee, C. and Muller, M. (2000) ICT Bioassay: Isolation of In Vivo Complexes of Enzyme to DNA. DNA Topoisomerase Protocols Vol. II: Enzymology and Drugs. Humana Press.
2. Subramainian, D., Kraut, E., Staubus, A., Young, D., and Muller, M.T. (1995) Analysis of Topoisomerase I DNA complexes in patients administered topotecan. Cancer Research 55:2097-2103.
https://www.amyjet.com/products/TopoGEN-TG1020-0.shtml
人拓扑异构酶I电泳迁移率变化分析试剂盒操作手册
TopoGEN人拓扑异构酶I电泳迁移率变化分析试剂盒包含使用免疫荧光对人Top2a进行细胞定位的所有试剂。该系统经过优化，可与FITC或罗丹明标记的具有贴壁细胞的二抗一起使用。该方法可能适用于除人类外的其他细胞。小鼠、大鼠和猴细胞会与拓扑异构酶II抗体发生交叉反应。该抗体对p170（拓扑异构酶IIα）具有特异性。
艾美捷人拓扑异构酶I电泳迁移率变化分析试剂盒：
SKU：TG1030
类别：抗体试剂盒，拓扑异构酶抗体，拓扑试剂盒
标签：人类拓扑异构酶2，免疫荧光试剂盒，拓扑异构酶2
抗拓扑异构酶II（p170）抗体。这是一种针对p170的C末端区域的兔源抗体（多克隆）。使用肽段来诱导产生这种抗血清；抗体已经过免疫亲和纯化。试剂盒包含100微升的抗体。
肽段试剂。包含总共50微克（2毫克/毫升）的肽段。该序列是p170的C末端16个氨基酸残基。此肽段位于磷酸钠缓冲液中。
详细操作手册。该协议是为使用贴壁细胞培养（HeLa、Vero、3T3等）开发的。涉及悬浮细胞培养、薄片或辣根过氧化物酶染色的应用将需要研究者自行调整。需要注意的是，由于拓扑异构酶II在染色体中高度富集，方法内建了内部对照；在有丝分裂细胞中，您应该能看到明亮的荧光染色体。
将此试剂盒储存在-20°C。
人拓扑异构酶I电泳迁移率变化分析试剂盒文献参考：
As noted above topoisomerase II has a characteristic distribution pattern in cells that clearly indicates whether the procedure is working. In interphase cells, the pattern of distribution of topo II is almost totally nuclear and appears to be punctiform or pin-point in nature. The signal is clearly amplified in metaphase cells when chromosomes are visible. There should be about a 5-10 fold increase in fluorescent intensity in the latter cells.
The peptide that is included is an important control reagent. Incubating the cells with peptide plus primary topo II antibody should neutralize the fluorescent signal.
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DNA旋转酶检测试剂盒的应用说明&测定过程
TopoGEN-DNA旋转酶检测试剂盒旨在快速、特异地检测DNA旋转酶。该试剂盒有助于II型拓扑异构酶（DNA Gyrase）的纯化和鉴定，并含有对具有或不具有超螺旋能力的II型酶进行常规检测所需的所有试剂。
艾美捷DNA旋转酶检测试剂盒：
SKU：TG1003
类别：Topo套件
标签：DNA旋转酶、EC DNA旋转酶和旋转酶测定
旋转酶测定试剂盒内容：
足够进行100次测定的动基体DNA [kDNA]
线性kDNA标记
经拓扑异构酶II处理的解链kDNA标记（topo II处理）
10X旋转酶测定缓冲液
旋转酶停止和装载缓冲液
详细说明书
DNA旋转酶测定试剂盒应用说明：
拓扑异构酶II或DNA旋转酶对kDNA的解链程度与酶的量和孵育时间成正比。为了筛选柱分离的分数以确定活性峰，最好使用短的（5分钟）孵育时间，这样只有最活跃的分数会完全解链kDNA。对于筛选柱分离的分数或其他需要进行许多反应的测定，最好设置一个包含所有试剂的主反应混合物，除了待测分数，然后将这个混合物分装到反应管中，再添加待测分数。
高浓度的盐会抑制拓扑异构酶；因此，待测分数对最终反应的贡献不应超过30 mM单价盐。如果离子浓度超过这个值，则应使用低盐缓冲液进行补偿。
最好包括一个完整的反应，缺少蛋白分数，但包含待测分数所在的缓冲液。如果蛋白分数中含有改变DNA电泳迁移率的试剂，可能需要在加载凝胶前对样本进行苯酚/氯仿处理和/或乙醇沉淀。
凝胶解读：
解链的DNA标记将是开放环状DNA（OC，2.5 KB单体，至少有一个缺口）和一些闭环状DNA（CC）DNA。kDNA通常包含缺口DNA单体；因此，OC和CC DNA都将被看到。相比之下，不应产生线性DNA，因为这意味着核酸酶污染。还要注意，可以使用kDNA测定旋转酶来识别稳定缺口或切割中间体的试剂（见上文链接）。
并发症
最严重的问题出现在被测定的提取物中有干扰蛋白或物质时。粗细胞提取物可能含有过量的DNA结合蛋白或正电荷蛋白，它们会粘附在DNA上并抑制酶的接触。此外，核酸酶污染物可能会降解或缺口kDNA底物，因此模糊结果。解决这个问题的一个好方法是通过硫酸铵沉淀后跟柱层析来清理粗提取物。此外，通过稀释提取物和/或添加tRNA载体（以竞争基本蛋白），有时可以最小化这些问题。
该试剂盒可以储存在4°C；然而，对于长期储存（超过1个月），我们建议将其放置在-20°C。尽量避免反复冷冻和解冻kDNA，因为这会加速网络的降解。
旋转酶测定基于两步过程
1. 动基体DNA（kDNA）的解链
2. 由此产生的解链单体kDNA种类的超螺旋化
DNA旋转酶测定过程：
反应产物是使用TopoGEN开发的一种新型凝胶系统来解析的，该系统允许极其快速和明确地检测旋转酶活性。包括适当的缓冲液、DNA底物和DNA标记。本试剂盒不包括纯化的旋转酶；但是，包括了解链和线性DNA标记，以便用户可以清晰、方便地识别提取物或分数中的产品（见上文链接）。kDNA测定可以检测刺激旋转酶切割DNA的毒物以及仅仅抑制催化活性的试剂。基于kDNA的旋转酶测定的优势在于，它快速且简单，允许从粗混合物或提取物中进行活性引导的抑制剂纯化。
https://www.amyjet.com/products/TopoGEN-TG1003.shtml
纯化的大肠杆菌DNA旋转酶和松弛DNA检测试剂盒解决方案
TopoGEN大肠杆菌DNA回旋酶和松弛DNA检测试剂盒旨在为研究人员提供快速和特异的DNA回旋酶检测。这些试剂盒通过提供TopoGEN证明有效的受控试剂来促进回转酶的纯化和表征。这些试剂盒也适用于对大规模筛选新型抗回转酶活性剂感兴趣的研究人员。TopoGEN将DNA旋转酶的量与松弛的pHOT-1 DNA的量相匹配，以让你继续寻找新的活性物质和线索。
艾美捷纯化的大肠杆菌DNA旋转酶和松弛DNA检测试剂盒：
SKU：TG2000GKIT
类别：拓扑试剂盒
标签：DNA旋转酶，DNA旋转酶解链DNA测定试剂盒，EC DNA旋转酶，大肠杆菌DNA旋转酶，旋转酶
旋转酶和解链DNA试剂盒（显示为100次反应的规格）：
高纯度的大肠杆菌DNA旋转酶（100单位）
解链pHOT-1 DNA（50微克）
超螺旋pHOT-1 DNA标记（25微升）
测定缓冲液（0.6毫升）
酶稀释缓冲液（0.6毫升）
停止缓冲液/凝胶上样染料（0.6毫升）
详细说明手册
注意：请不要将此试剂盒与DNA旋转酶测定试剂盒混淆，后者是为希望在研究者准备的提取物中测定旋转酶活性的研究人员设计的。DNA旋转酶测定试剂盒不包括酶。
该试剂盒在干冰上运输，必须长期储存于-70°C或短期储存于-20°C。请注意，含ATP的缓冲液在反复冻融循环中会失活。鉴于我们旋转酶的优良稳定性和纯度，我们建议您在假设酶活性丧失之前，先检查缓冲液的劣化情况。
纯化的大肠杆菌DNA旋转酶和松弛DNA检测试剂盒文献参考：
Phillips JW, Goetz MA, Smith SK, Zink DL, Polishook J, Onishi R, Salowe S, Wiltsie J, Allocco J, Sigmund J, Dorso K, Lee S, Skwish S, de la Cruz M, Martin J, Vicente F, Genilloud O, Lu J, Painter RE, Young K, Overbye K, Donald RGK, Singh SB: Discovery of Kibdelomycin, A Potent New Class of Bacterial Type II Topoisomerase Inhibitor by Chemical-Genetic Profiling in Staphylococcus aureus. Cell Chemistry and Biology 2011, 18: 955-965. doi: 10.1016/j.chembiol.2011.06.011.
https://www.amyjet.com/products/TopoGEN-TG2000G-1KIT.shtml
纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒-药物筛选实验工具箱
TopoGEN纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒旨在筛选新型的回转酶靶向药物，无论是作为界面毒物（或诱导DNA切割的IFP）还是催化抑制化合物（通过多种机制阻断回转酶作用的CIC）。它是一种易于采用的直接凝胶分析试剂盒。
DNA超螺旋分析：该药物筛选试剂盒基于对提供的松弛质粒DNA底物（pHOT1，pBR322的衍生物）和约2.7 KB的回旋酶超螺旋作用。一个单位的gyrase在37℃下1小时内将超冷200-500ng。该酶通过符号反转模型将负超螺旋引入松弛的pHOT1质粒底物中。能量辅因子（ATP）是完成超螺旋反应所必需的。非EB凝胶是检测旋转酶活性的理想选择，超螺旋和松弛DNA形式之间的出色分辨率证明了这一点。
药物筛选试验。该试剂盒旨在鉴定IFP和CIC（分别为毒物和抑制剂）。典型的IFP（如氟喹诺酮）会诱导双链DNA断裂，而原型CIC只会阻止enyzme作用于松弛的DNA（如新生霉素、一些嵌入剂）。因此，IFP（环丙沙星）将导致线性DNA产物的形成，而CIC将阻断超螺旋活性。使用此套件可以很容易地检测到这些事件。
艾美捷纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒：
SKU：TG2001GKIT
类别：药物筛查试剂盒
标签：DNA旋转酶，药物筛选，EC DNA旋转酶
纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒包含了纯化的细菌（大肠杆菌）DNA旋转酶，纯度达到均一性（基于SDS-PAGE的测定结果超过98%）。旋转酶是从过表达菌株中制备的，并以A2B2复合体形式提供的纯化完整酶。酶的单位浓度根据试剂盒附带的质量控制数据提供。它还储存在稳定化缓冲液中[50 mM Tris-Cl pH 7.5，100 mM KCl，2 mM二硫苏糖醇，1 mM EDTA，50%甘油]。包括底物解链DNA（质粒pHOT1）。
EC DNA旋转酶测定药物试剂盒内容（100次测定）：
1. 解链pHOT1 DNA（50微克）
2. 超螺旋pHOT1 DNA（25微升，含凝胶上样缓冲液）
3. 线性化pHOT1 DNA（25微升，含凝胶上样缓冲液）
4. 5倍旋转酶测定缓冲液（0.6毫升）
5. 稀释缓冲液（0.6毫升）
6. 10倍凝胶上样缓冲液（0.3毫升）
7. 10倍蛋白酶K（0.5毫升）
8. 10% SDS（0.3毫升）。
9. 纯化DNA旋转酶（100单位）
10. 环丙沙星10微克/毫升（50微升）
DNA旋转酶质量控制：
对我们纯化的酶进行QC测试：
1. 通过测定线性质粒DNA和线性pUC19 DNA的形成来进行核酸酶污染测试。在10 mM MgCl2存在下，对1微克的连接kDNA或超螺旋pUC19 DNA进行孵化（37°C下4小时）。在这些条件下没有产生线性DNA或分解产物。
2. A和B亚基纯度超过98%，基于SDS-PAGE，并认证为内切核酸酶自由。
3. 注意：在高输入水平的DNA旋转酶下，可能会因为自发中止的反应而检测到少量线性DNA。这很正常，实际上可以作为线性DNA的内部标记。
https://www.amyjet.com/products/TopoGEN-TG2001G-1KIT.shtml