TopoGEN/艾美捷DNA拓扑异构酶一站式解决方案
TopoGEN 致力于提供拓扑异构酶试剂和分析试剂盒，他们的药物筛选试剂盒可用于鉴定拓扑异构酶靶向分子，用于癌症化疗和抗菌应用。TopoGEN还可提供检测和定量原核（DNA回旋酶，拓扑异构酶IV）和真核拓扑异构酶（拓扑异构酶I，IIa，IIb，III）的检测试剂盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶标、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抗体和试剂盒补充试剂，DNA修复的相关系列产品也是他们产品的特色产品。
艾美捷TopoGEN拓扑异构酶和DNA回旋酶：
TG2000EC
E. coli Topoisomerase IV Enzyme
大肠杆菌IV型拓扑异构酶
肠杆菌拓扑异构酶IV（top4）是一种II型拓扑异构酶，TopoGEN提供纯化的Top4，用于药物开发和筛选实验的各个方面。该酶在解链动粒DNA（kDNA）方面非常活跃，但也会使超螺旋质粒DNA松弛。然而，其在松弛活性方面较为脆弱。
TopoGEN拓扑异构酶和回转酶分析检测试剂盒
TG1015
Human Topoisomerase I Assay Kit/人拓扑异构酶I检测试剂盒
用于常规检测拓扑异构酶I的活性
TopoGEN药物筛选试剂盒
TG2001GKIT
E. coli DNA Gyrase Drug Screening Kit/大肠杆菌DNA回旋酶药物筛选试剂盒
筛选针对回旋酶的新药物，无论是作为界面毒物（IFPs，诱导DNA断裂）还是催化抑制化合物（CICs，通过多种机制阻止回旋酶的作用）
作为TopoGEN在中国的代理商，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的TopoGEN以及客户订制化服务。
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TopoGEN拓扑异构酶II检测试剂盒：深入研究DNA超螺旋动态
人拓扑异构酶II检测试剂盒旨在检测任何II型拓扑异异构酶，无论是真核还是原核。具体来说，我们的Top2测定有助于II型酶的纯化和表征，并含有II型拓扑异构酶常规测定所需的所有试剂。该测定基于动基质DNA（kDNA）的脱触手，由于它对II型活性（不是I型）具有特异性，因此可以用粗细胞提取物进行。使用TopoGEN开发的新型凝胶系统分解反应产物，该系统可以极其快速和明确地检测拓扑异构酶II的活性。包括适当的缓冲液、DNA底物和DNA标记。Human Top2a包含在目录号中用-A表示的试剂盒中。包括拓扑异构酶II脱乙酰化和线性DNA标记，以便清楚、容易地鉴定用户定义的提取物或组分中的拓扑异酶II活性。该检测试剂盒还可以与纯化的酶（由TopoGEN提供）结合使用，以检测topo II的抑制剂。kDNA测定将检测刺激拓扑异构酶II切割DNA的毒物以及简单抑制催化活性的试剂。基于kDNA的测定的优点是，该测定快速且容易，可以从粗混合物或提取物中以活性为导向纯化抑制剂。
TopoGEN 拓扑异构酶II检测试剂盒旨在快速、特异地检测任何II型拓扑异构酶，无论是真核还是原核。该试剂盒有助于II型酶的纯化和表征，并含有拓扑异构酶II常规检测所需的所有试剂。
艾美捷TopoGEN拓扑异构酶II检测试剂盒（20微克kDNA）：
编号：TG1001
分类：拓扑试剂盒
标签：人类拓扑异构酶2，top2a，拓扑异构酶2，拓扑异构酶2测定，拓扑异构酶2测定试剂盒
该试剂盒在环境温度下运输，如果与酶一起购买，则在干冰上运输。将酶储存在-70°C。DNA应储存在4°C。收到分析缓冲液成分后，应储存在-20°C。
人类拓扑异构酶II测定试剂盒内容（适用于100次测定试剂盒规格）
100单位人类Top2a酶（可使用目录编号TG1001-1A获取）
20微克的Kinetoplast DNA (kDNA)
线性kDNA标记在凝胶加载缓冲液中
解链kDNA标记（经拓扑异构酶II处理）
10倍拓扑异构酶II测定缓冲液*
5倍停止缓冲液/凝胶加载染料
详细说明书
*为了提高稳定性，10倍拓扑异构酶II测定缓冲液提供为两个组分：缓冲液A（不含ATP）和缓冲液B（含ATP）。每次通过混合缓冲液A和B新鲜配制完整的10倍测定缓冲液。
使用人类拓扑异构酶II测定试剂盒进行拓扑异构酶II活性滴定：
人类拓扑异构酶II测定
第1道：200纳克线性化kDNA
第2道：200纳克解链kDNA
第3道：无拓扑异构酶II
第4道：1:2稀释的拓扑异构酶II
第5道：1:4稀释的拓扑异构酶II
第6道：1:8稀释的拓扑异构酶II
第7道：1:16稀释的拓扑异构酶II
第8道：1:32稀释的拓扑异构酶II
第9道：1:64稀释的拓扑异构酶II
人类拓扑异构酶II酶与kDNA在37°C下孵育15分钟，使用试剂盒提供的测定缓冲液。酶浓度大约为每微升2单位。反应用停止缓冲液终止，并直接加载到含有乙酰胺（0.5微克/毫升）的1%琼脂糖凝胶上。电泳后，凝胶脱色30分钟并拍照。请注意，解链产物包含开放环（上带）和共价闭合环（松弛）小环DNA。还要注意，线性DNA在断裂和松弛物种之间迁移。所有kDNA制备中都存在断裂的小环DNA。此外，不同kDNA制备中断裂DNA的数量可能有所不同。试剂盒中提供线性和解链kDNA标记。运行这些标记以识别不同形态的位置非常重要。当测定粗提物时，还需要注意提取物通常可能含有紫外线荧光污染物（例如RNA或DNA分解产物）。这些标记将有助于识别此类伪影；然而，我们也建议您运行一条不含kDNA底物的蛋白提取物，以揭示这些污染物。
并发症：
最严重的并发症出现在被测定的提取物中存在干扰蛋白或物质时。粗提物、无细胞提取物可能含有过量的DNA结合蛋白或正电荷蛋白，它们粘附在DNA上并抑制酶的接触。此外，核酸酶污染物可能会降解或切割kDNA底物，因此模糊结果。处理这个问题的一个好方法包括通过硫酸铵沉淀和柱层析来清理粗提物。此外，通过稀释提取物和/或添加tRNA载体（以竞争基本蛋白），有时可以最小化此类问题。
TopoGEN拓扑异构酶II检测试剂盒文献参考：
Huimin Zhang, Yun Xiong, Yilun Sun, Jeong-Min Park, Dan Su, Xu Feng, Sarah Keast, Mengfan Tang, Min Huang, Chao Wang, Mrinal Srivastava, Chang Yang, Dandan Zhu, Zhen Chen, Siting Li, Ling Yin, Yves Pommier, Junjie Chen: RAD54L2-mediated DNA damage avoidance pathway specifically preserves genome integrity in response to topoisomerase 2 poisons. Science Advances 9 (49), eadi6681.
Aruna S Jaiswal, Arijit Dutta, Gayathri Srinivasan, Yaxia Yuan, Daohong Zhou, Montaser Shaheen, Doraid T Sadideen, Austin Kirby, Elizabeth A Williamson, Yogesh K Gupta, Shaun K Olsen, Mingjiang Xu, Eva Loranc, Pramiti Mukhopadhyay, Alexander Pertsemlidis, Alexander J R Bishop, Patrick Sung, Jac A Nickoloff, Robert Hromas: TATDN2 resolution of R-loops is required for survival of BRCA1-mutant cancer cells. Nucleic Acids Research, gkad952,
Gardner L, Malik R, Shimizu Y, Mullins N, Elshamy WM: Geminin overexpression prevents the completion of topoisomerase IIα chromosome decatenation, leading to aneuploidy in human mammary epithelial cells. Breast Cancer Research 2011, 13(3): R53. doi: 10.1186/bcr2884
Bower J, Karaca GF, Zhou Y, Simpson DA, Cordeiro-Stone M, Kaufman WK: Topoisomerase IIa maintains genomic stability through decatenation G2 checkpoint signaling. Oncogene 2010, 29(34): 4787-4799. doi: 10.1038/onc.2010.232
Polycarpou-Schwarz M, Müller K, Denger S, Riddell A, Lewis J, Gannon F, Reid G: Thanatop: A Novel 5-Nitrofuran that is a highly active, cell-permeable inhibitor of topoisomerase II. Cancer Research 2007, 67: 4451-4458. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-07-0393
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TopoGEN拓扑异构酶IIa核提取/检测试剂盒：专为DNA超螺旋分析设计
TopII NucEx试剂盒旨在让研究人员制备富含II型拓扑异构酶（topo II）活性的核提取物。包括拓扑异构酶II特异性的适当测定缓冲液。该试剂盒适用于大多数体外生长的动物细胞系，但针对人类和啮齿动物物种进行了优化。该试剂盒还允许研究人员量化任何给定细胞系中的拓扑异构酶II活性。TopII NucEx试剂盒为最终用户提供了一种酶源，用于拓扑异构酶II活性剂的初步药物筛选。
总之，该试剂盒包含测定粗提取物中拓扑异构酶II所需的一切（包括kDNA、缓冲液和标记物），以及从贴壁细胞系（HeLa）中制备粗核提取物所需的所有东西。该提取方法经过一定优化后可用于组织或其他细胞系。如前所述，该试剂盒适用于药物筛选实验。我们建议在所有药物筛选实验中纳入药物控制（+/-依托泊苷）。Topo II药物可在我们的网站上获得。
艾美捷TopoGEN拓扑异构酶IIa核提取/检测试剂盒：
产品编号：TG1050-1
分类：拓扑试剂盒
标签：核提取试剂盒，拓扑2核提取试剂盒
该套件可以在环境温度下或冰上（干冰或湿冰）运输，收到后应存放在-20°C的温度下。避免频繁的冻融循环，这可能会导致DNA断裂。该试剂盒可在4°C下储存长达1个月。
TopoGEN拓扑异构酶IIa核提取/检测试剂盒（100次反应套装）：
1. 10倍TEMP缓冲液（10 mM Tris-HCl（pH 7.5），1 mM EDTA，4 mM MgCl2，0.5 mM PMSF）。试剂盒包含10 mL（在15 mL锥形管中）。
2. 10倍TEP缓冲液（10 mM Tris-HCl（pH 7.5），1 mM EDTA，0.5 mM PMSF）。提供1 mL的微量离心管。
3. 提取用的1 M NaCl（0.5 mL在微量离心管中）。
4. kDNA（总20 μg）底物，浓度如管上指定。
5. 解链kDNA标记（25 μl），在凝胶加载缓冲液中。
6. 线性化kDNA标记（25 μl），在凝胶加载缓冲液中。
7. 10倍凝胶加载缓冲液（300 μl）。
8. 10倍蛋白酶K（500 μl）。
9. 10% SDS（300 μl）。
10. 10倍拓扑异构酶II不完全测定缓冲液A（250 μl）。
11. 10倍ATP缓冲液B（250 μl）。
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TopoGEN大肠杆菌拓扑异构酶IV：从基因组映射到酶活性的分子机制
大肠杆菌拓扑异构酶IV（top4）是一种II型拓扑异异构酶，由大肠杆菌中的parC和parE两个基因编码。这种酶对大肠杆菌的脱链和染色体分离至关重要；因此，拓扑IV倾向于更喜欢分子间链传递（链式和脱链反应）而不是弛豫反应。EC拓扑异构酶IV也是喹诺酮类抗菌剂的靶标，喹诺酮类抗菌药通过将酶转化为DNA损伤剂来发挥作用。TopoGEN提供纯化的Top4，用于药物开发和筛选分析的各个方面。该酶在解链动基质DNA（kDNA）中非常活跃，但也会松弛超螺旋质粒DNA。然而，它在放松活动中不太稳健。根据Peng和Marians的方法纯化大肠杆菌拓扑异构酶IV。
艾美捷TopoGEN大肠杆菌拓扑异构酶IV：
编号：TG2000EC
分类：拓扑酶
标签：拓扑异构酶
包含材料：包含两部分的测定缓冲液和稀释缓冲液。
EC拓扑酶IV在干冰上运输，应储存在-70°C。我们还建议在首次解冻后分装酶。请注意，反复的冻融会导致活性损失。
拓扑异构酶IV质量控制测试：
Top4通过已发表的方法（2）过表达并纯化。每个亚基在SDS-PAGE上通过CB染色检测到单一条带。通过在优化的I型活性条件下对超螺旋DNA的松弛进行测定，评估了与拓扑异构酶I的交叉污染。在这些条件下，与pBR322孵育2小时后，未检测到任何松弛产物。
拓扑异构酶IV解链测定，EC拓扑酶IV，top4解链测定
拓扑异构酶IV测定条件
反应包含以下成分（20微升）：40 mM Tris-HCl（pH 7.5），6 mM MgCl2，10 mM DDT，100 mM 钾谷氨酸，40 uM ATP，50 ug BSA/ml，0.2 ug kDNA。反应在37°C下进行30分钟后，用SDS（1%）终止，随后用蛋白酶K消化（50 ug/ml，56°C下15分钟）。反应产物在含有0.5 ug/ml乙酰胺的1%琼脂糖凝胶上电泳（用手持紫外线灯监测以分辨解链产物），用蒸馏水脱色（室温下20分钟）并拍照。
TopoGEN大肠杆菌拓扑异构酶IV评论和引用：
Phillips JW, Goetz MA, Smith SK, Zink DL, Polishook J, Onishi R, Salowe S, Wiltsie J, Allocco J, Sigmund J, Dorso K, Lee S, Skwish S, de la Cruz M, Martin J, Vicente F, Genilloud O, Lu J, Painter RE, Young K, Overbye K, Donald RGK, Singh SB: Discovery of Kibdelomycin, A Potent New Class of Bacterial Type II Topoisomerase Inhibitor by Chemical-Genetic Profiling in Staphylococcus aureus. Cell Chemistry and Biology 2011, 18: 955-965. doi: 10.1016/j.chembiol.2011.06.011.
Peng, H., and Marians, K. (1999). DNA Topoisomerase Protocols Volume I; page 163.
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TopoGEN大肠杆菌DNA旋转酶，新型药物筛选的优秀试剂
高纯度大肠杆菌DNA Gyrase作为全酶提供（含有a、B亚基）。这是一种用于体外超螺旋质粒或新型药物筛选的优秀试剂。
艾美捷TopoGEN大肠杆菌DNA旋转酶：
SKU：TG2000G
类别：DNA回旋酶
标签：DNA旋转酶，大肠杆菌，旋转酶
大肠杆菌DNA旋转酶质量控制测试
核酸酶污染：通过测试线性KDNA和线性质粒DNA的形成来进行检测。在旋转酶测定条件下，以及有无ATP的情况下，对1微克的连环KDNA或超螺旋pUC19 DNA进行37°C下4小时的孵育。
测定条件
超螺旋测定是在随产品提供的协议说明书中指定的条件下，使用松弛DNA进行的。我们还使用kDNA作为底物进行测定。有关这种解链/超螺旋测定的详细信息，请参考我们的技术文献。1单位的旋转酶活性能在37°C下30分钟内使0.2微克的质粒超螺旋化。
包含材料
随酶附带了5倍测定缓冲液和稀释缓冲液。这些可作为5倍旋转酶测定缓冲液（TG4030）和旋转酶稀释缓冲液。
DNA旋转酶在干冰上运输，应储存在-70°C。我们还建议在首次解冻后分装酶（反复的冻融可能会导致活性损失）；酶活性在冰上稳定1-3天。
TopoGEN大肠杆菌DNA旋转酶文献参考：
Phillips JW, Goetz MA, Smith SK, Zink DL, Polishook J, Onishi R, Salowe S, Wiltsie J, Allocco J, Sigmund J, Dorso K, Lee S, Skwish S, de la Cruz M, Martin J, Vicente F, Genilloud O, Lu J, Painter RE, Young K, Overbye K, Donald RGK, Singh SB: Discovery of Kibdelomycin, A Potent New Class of Bacterial Type II Topoisomerase Inhibitor by Chemical-Genetic Profiling in Staphylococcus aureus. Cell Chemistry and Biology 2011, 18: 955-965. doi: 10.1016/j.chembiol.2011.06.011.
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TopoGEN突变型人拓扑异构酶I的质量控制测试分析
TopoGEN现在提供了一种催化无活性的突变型人拓扑异构酶I，其纯化至均一性（SDS-PAGE上为单条带）。突变是活性位点酪氨酸（已变为苯丙氨酸）的单残基变化。该制剂在杆状病毒中过表达，并在100 kDa的SDS-PAGE上亲和纯化为单条带。该酶不能放松DNA（但仍能与DNA结合），并含有一个短的（6个残基）组氨酸标签。
艾美捷TopoGEN突变型人拓扑异构酶I (Y723F)：
SKU：TG2005H-Y723F
类别：拓扑异构酶
标签：人top1，突变人top1、top1、Topo 1、y723f
内容：
10微克突变型人类拓扑异构酶I酶
0.5毫升10倍拓扑异构酶I反应缓冲液
这是纯化至均一的突变型人拓扑异构酶I的催化无活性形式。突变是活性位点酪氨酸（已变为苯丙氨酸）的单残基变化。该制剂在杆状病毒中过表达，在100 kDa的SDS-PAGE上作为单个条带具有亲和力（见下文SDS-PAGE数据）。该酶不能松弛DNA（见下文数据），并含有短（6个残基）组氨酸标签。
图显示了纯化突变体Top1的SDS-PAGE。琼脂糖凝胶数据清楚地表明，与野生型（WT蛋白）相比，突变体是无活性的。
TopoGEN酪氨酸突变型人类拓扑异构酶I质量控制测试：
在最终体积为25微升的拓扑异构酶I反应缓冲液中进行松弛实验（随产品提供的10倍反应缓冲液成分：100 mM Tris-Cl，pH 7.9，1.5 M NaCl，1% BSA，1 mM精胺，50%甘油）。每个反应包含0.25微克超螺旋质粒DNA。反应用5微升（每20微升反应体积）的停止缓冲液终止（5%十二烷基硫酸钠，0.0025%溴酚蓝，25%甘油）。反应产物在1%的原生琼脂糖凝胶上进行分析。在这些条件下，即使使用高达0.5微克的突变蛋白，也检测不到松弛活性。
通过检测线性KDNA和线性质粒DNA的形成来测试核酸酶污染。在10 mM MgCl2存在下，对1微克的连环kDNA或超螺旋pUC19 DNA进行孵育（37°C下4小时）。在这些条件下，没有产生线性DNA或分解产物。
与拓扑异构酶II的交叉污染检查结果为阴性。在拓扑异构酶II反应条件下，KDNA没有发生解链。
突变型拓扑异构酶I的最终分数是柱层析池，并且处于以下缓冲液中：20mM NaH2PO4（pH7.4），300mM NaCl，500mM亚甲基。最终分数通过SDS-PAGE分析，显示含有一个单一的主要100 kDa条带。
通过蓝色冰或干冰运输。将酶储存在-20°C。
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TopoGEN人拓扑异构酶I酶--纯度高，比活性高
高纯度、催化活性的Top1酶在杆状病毒系统中过表达，并纯化至单带均一性。这些制剂比由人体组织制成的天然拓扑异构酶I便宜，纯度高，比活性高。
艾美捷TopoGEN人拓扑异构酶I酶：
SKU：TG2005HRC
类别：拓扑异构酶
标签：人拓扑异构酶1
高纯度、具有催化活性的人拓扑异构酶I酶在杆状病毒系统中过表达并纯化至单一条带均一性。这些制剂比从人体组织中提取的天然拓扑异构酶I便宜，并且提供出色的纯度和高比活性。此外，重组拓扑异构酶I的100 kDa形式稳定，相对于人体细胞中的天然蛋白，更不易受到蛋白酶的降解。
拓扑异构酶I的最终制剂在松弛质粒DNA方面非常活跃。
人拓扑异构酶I酶活性的滴定：
使用杆状病毒过表达系统制备和纯化拓扑异构酶I。通过连续2倍稀释使用超螺旋DNA来确定活性。数据显示，这种制剂大约滴定到8单位/微升。一个人拓扑异构酶I单位可以在37°C下30分钟内松弛超过50%的0.25微克（250纳克）超螺旋质粒DNA。
包含材料
包含10X反应缓冲液和稀释缓冲液。这些可以单独购买，作为TGS 10X拓扑异构酶I反应缓冲液（TG4095）。
质量控制测试：
1. 经认证，人拓扑异构酶I无核酸酶污染。
2. 与拓扑异构酶II的交叉污染检查结果为阴性。在拓扑异构酶II反应条件下，没有KDNA的解连环。
3. 拓扑异构酶I的最终分数是柱池，并且含有以下缓冲液：20mM NaH2PO4（pH7.4），300mM NaCl，50ug/ml BSA，50%甘油，50mM Imidazole。最终分数通过SDS-PAGE分析，显示含有一个主要的100 kDa单一条带。
4. 活性测定。在最终体积为25微升的top1反应缓冲液中进行松弛测定（10X反应缓冲液——也称为TGS——随本产品提供：100 mM Tris-Cl（pH 7.9），10 mM EDTA，1.5 M NaCl，1% BSA，1 mM Spermine，50%甘油）。每个反应包含0.25微克超螺旋质粒DNA。反应用5微升（每20微升反应体积）的停止缓冲液（5%十二烷基硫酸钠，0.0025%溴酚蓝，25%甘油）终止。反应产物在1%的原生琼脂糖凝胶上分析（电泳过程中凝胶或缓冲液中不含乙酰胺）。
人拓扑异构酶I酶在干冰上运输，应储存在-20°C。在最佳储存条件下，其寿命约为6个月。反复的冻融循环会加速活性损失。
TopoGEN人拓扑异构酶I酶文献：
Yoshizaki A, Yanaba K, Ogawa A, Asano Y, Kadono T, Sato S: Immunization With DNA Topoisomerase I and Freund’s Complete Adjuvant Induces Skin and Lung Fibrosis and Autoimmunity via Interleukin-6 Signaling. Arthritis and Rheumatism 2011, 63: 3575-3585. doi: 10.1002/art.30539.
Zhang L, Sullivan P, Suyama J, et. al: Epidermal growth factor-induced heparanase nucleolar localization augments DNA topoisomerase I activity in brain metastatic breast cancer. Molecular Cancer Research 2010, 8: 278-290. doi: 10.1158/1541-7786.MCR-09-0375
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TopoGEN人拓扑异构酶IIα酶，高度纯化，无核酸酶污染
TopoGEN 人拓扑异构酶IIα酶--专有的纯化人拓扑异构酶IIα（Top2a）方法。纯化的酶完全没有污染和核酸酶。它分两步改变一种独特拓扑异构体的连接数，SDS-PAGE上检测到的主要多肽为170 kDa。
艾美捷TopoGEN人拓扑异构酶IIα酶：
SKU：TG2000H
类别：拓扑异构酶
标签：人类top2、top2a、拓扑异构酶2α
纯化的人拓扑异构酶II Alpha（Top2a）过表达并纯化至均一性，SDS-PAGE上显示为单一条带。拓扑异构酶II高度纯化，无核酸酶污染。
人类拓扑异构酶II质量控制测试：
核酸酶污染：通过测试线性kDNA和线性质粒DNA的形成来进行检测。在37°C下（在top2a实验条件下，有或无ATP）孵育1微克的连环KDNA或超螺旋pUC19 DNA 4小时。
通过在人类拓扑异构酶II Alpha活性被抑制的条件下检测超螺旋DNA的松弛来评估与拓扑异构酶I的交叉污染。过量的纯化酶与pRYG DNA在无ATP（有和无Mg++）的情况下在37°C下孵育2小时。在这些条件下，不得检测到pRYG超螺旋DNA的松弛。
当SDS-PAGE凝胶过载纯化蛋白时，可以看到一个170 kDa的主要条带。最终分数中没有180 kDa的拓扑异构酶II形式。（蛋白质浓度因批次而异，但通常在每毫升5-50微克的范围内。）Top2a可以提供2-10单位/微升（1单位将在37°C下30分钟内解连环0.2微克的KDNA）。请注意，单位定义基于首选的DNA底物，kDNA（kinetoplast DNA）。我们建议使用kDNA底物与此酶，因为质粒DNA松弛实验的敏感性远不如kDNA。活性是基于kDNA解连环（而不是质粒DNA松弛）认证的。
人类拓扑异构酶II Alpha酶的最终分数从FPLC柱中以以下缓冲液洗脱：10%甘油，50 mM Tris（pH 7.7），1 mM EDTA和EGTA，650 mM NaCl。
人类拓扑异构酶II Alpha实验条件和性能质量控制：
解连环实验使用kinetoplast DNA（KDNA）底物在最终体积为20-30微升的拓扑异构酶II反应缓冲液中进行（50 mM Tris-Cl，pH 8.0，120 mM KCl，10 mM MgCl2。0.5 mM ATP，0.5 mM二硫苏糖醇），含0.2微克KDNA。反应用5微升（每20微升反应体积）的停止缓冲液（5%十二烷基硫酸钠，0.0025%溴酚蓝，25%甘油）终止。反应产物在含有0.5微克/毫升乙酰胺的1%琼脂糖凝胶上分析。在凝胶运行时，可以使用手持紫外线光源轻松监测2.5 kb DNA小环解连环产物的分离。
Top2a在干冰上运输，应储存在-70°C。我们还建议在第一次解冻后分装酶（反复的冻融会导致活性损失）；酶活性稳定1-2天（不超过）。
TopoGEN人拓扑异构酶IIα酶文献：
Muller et al., Biochemistry 27: 8369–8379 (1988) Spitzner and Muller, Nuc. Acid. Res. 16: 5533–5556 (1988)
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