Jackson ImmunoResearch封闭血清相关推荐
关于IF实验产生背景的原因及降低背景的常用方法：
IF降低背景：
高背景是免疫荧光常见的问题，解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液，降低抗体浓度，增加洗涤次数，洗涤至少三次，每次五分钟，推荐洗涤液为 PBS+0.05% Tween。
我们实验室之前大多数都是使用BSA进行封闭，用正常血清代替BSA进行封闭倒是第一次听说，血清真的有如此奇效，迫不及待的赶紧去尝试了一番，荧光背景确实显著降低了。
血清作为封闭剂的原理：
强烈建议在PBS中稀释至5％（v / v）的正常血清作为封闭剂，以减少免疫反应中非特异性，保守序列和/或Fc受体结合的背景。用稀释的正常血清与标记抗体来自同一宿主，可获得最佳结果，作为添加一级抗体之前的单独孵育步骤。
用血清进行封闭效果好吗？
封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭，可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。对于适用多抗的实验，选择二抗种属来源的正常血清是封闭处理的金标准。
封闭血清如何使用？
推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30min（或者室温1h），清除血清，不用洗涤，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。
艾美Jackson ImmunoResearch 封闭血清推荐：
产品名称 货号 规格
Normal Donkey Serum（驴） 017-000-121 10 ml
Normal Alpaca Serum（羊驼） 028-000-121 10 ml
Normal Bovine Serum（牛） 001-000-121 10 ml
Normal Cat Serum（猫） 002-000-120 5 ml
Normal Chicken Serum（鸡） 003-000-120 5 ml
Normal Dog Serum（狗） 004-000-120 5 ml
Normal Goat Serum（山羊） 005-000-121 10 ml
Normal Syrian Hamster Serum（叙利亚仓鼠） 007-000-120 5 ml
Normal Horse Serum（马） 008-000-121 10 ml
Normal Human Serum（人） 009-000-121 10 ml
Normal Mouse Serum（小鼠） 015-000-120 5 ml
Normal Rabbit Serum（兔） 011-000-120 5 ml
Normal Rat Serum（大鼠） 012-000-120 5 ml
Normal Sheep Serum（绵羊） 013-000-121 10 ml
Normal Swine Serum（猪） 014-000-121 10 ml
艾美捷科技是Jackson ImmunoResearch的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml
Jackson ImmunoResearch--Cy 3 AffiniPure驴抗大鼠IgG（H+L）：科研与诊断的优选工具
基于免疫电泳和/或ELISA，抗体与全分子大鼠IgG反应。它还与其他大鼠免疫球蛋白的轻链发生反应。未检测到针对非免疫球蛋白血清蛋白的抗体。抗体已通过ELISA和/或固相吸附进行测试，以确保与牛、鸡、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、小鼠、兔和绵羊血清蛋白的交叉反应最小，但它可能与其他物种的免疫球蛋白发生交叉反应。
通过免疫亲和层析从抗血清中分离出完整的IgG抗体。它们具有通过二硫键连接在一起的Fc部分和两个抗原结合Fab部分，因此它们是二价的。据报道，平均分子量约为160 kDa。整个IgG形式的抗体适用于大多数免疫检测程序，并且是具成本效益的。
艾美捷Jackson ImmunoResearch--Cy 3 AffiniPure 驴抗大鼠IgG（H+L）：
货号： 712-165-153
目标：老鼠
宿主：驴
抗体形式：全IgG
特异性：IgG（H+L）
最小交叉反应性：牛、鸡、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、小鼠、兔、绵羊血清蛋白
标记物：Cyanine Cy™3
产品类别：全IgG亲和纯化抗体
克隆性：多克隆
物理状态：冻干固体
储存和复水：将冻干固体储存在2-8°C。用指定体积的dH2O（详见产品规格表）复水，并在不清澈时离心。在当天使用时准备工作稀释液。产品作为未稀释液体在2-8°C下稳定约6周。
复水后的延长储存：分装后在-70°C或更低温度下冷冻。避免反复冻融。或者，加入等体积的甘油（ACS级或更高），使最终浓度达到50%，并作为液体在-20°C下储存。
有效期：从复水之日起一年。如果测试结果适用于预期用途，有效期可以延长。
纯度：该抗体是通过免疫亲和色谱法从抗血清中纯化，使用与琼脂糖珠耦联的抗原。
缓冲液：0.01M磷酸钠，0.25M NaCl，pH 7.6
稳定剂：15 mg/ml牛血清白蛋白（无IgG，无蛋白酶）
防腐剂：0.05%叠氮化钠
建议的工作浓度或稀释范围：
对于大多数应用，1:100 - 1:800
稀释因子以范围形式呈现，因为最佳稀释度是许多因素的函数，如抗原密度、渗透性等。实际使用的稀释度必须通过实验确定。
Cyanine Cy™3最大吸收波长：550nm，最大发射波长：570nm
Cy3比其他橙红色荧光染料结合物更亮、更光稳定，并且背景更少。Cy3结合物可以在550nm处被最大程度激发，发射峰值在570nm。在荧光显微镜下，Cy3可以用传统的四甲基罗丹明（TRITC）滤光片组进行观察，因为其激发和发射光谱与TRITC几乎相同。我们推荐Cy3作为TRITC的一个更亮的替代品。Cy3可以用氩离子激光器（514nm或528nm线）激发至最大激发的约50%，或者用氦/氖激光器（543nm线）或汞灯（546nm线）激发至最大激发的约75%。Cy3已与荧光素用于双重标记；然而，建议使用窄带通发射滤光片观察荧光素，以最小化FITC滤光片组中的Cy3荧光。Cy3也可以与Alexa Fluor® 647配对，在使用共聚焦显微镜时进行多重标记。不过，对于多重标记来说，更好的选择是罗丹明红-X，因为它的荧光介于绿色荧光染料（如Alexa Fluor® 488）和远红荧光染料（如Alexa Fluor® 647）之间。
艾美捷科技是Jackson ImmunoResearch的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml
Jackson ImmunoResearch：有关抗体的结构问题分析
1. 什么是抗体亚类？
免疫球蛋白类别（哺乳动物中的 IgA、IgD、IgE、IgG、IgM）由其重链的结构定义。在每一类的亚类之间发现重链的细微差异。 Jackson ImmunoResearch ImmunoResearch 提供对小鼠亚类 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 和 IgG3 具有特异性的多克隆抗体。Jackson ImmunoResearch也有针对骆驼亚类 IgG 2+3 的特异性抗体。Jackson ImmunoResearch目前没有针对其他物种的亚类特异性抗体。、
2. Fab、Fc 和 F（ab'） 有什么区别2碎片？
这些产物是蛋白水解消化IgG的结果。用木瓜蛋白酶消化产生 Fab 和 Fc 片段，用胃蛋白酶消化产生 F（ab'）2碎片。
3. 什么是抗体同种型？
同种型是抗体重链和轻链的不同形式，可指类或亚类。轻链同种型为κ和λ，重链同种型为α（IgA）、δ（IgD）、ε（IgE）、γ（IgG）、μ（IgM）。重链可以进一步分化为亚类，例如γ1（IgG1）。
4. 什么是同型对照？
同种型是抗体重链和轻链的不同形式，可指类或亚类。轻链同种型为κ和λ，重链同种型为α（IgA）、δ（IgD）、ε（IgE）、γ（IgG）、μ（IgM）。重链可以进一步区分为亚类，例如γ1（IgG1）。
同型对照是一种阴性对照，用于验证一抗或二抗的特异性结合。同型对照与实验抗体相同类别或亚类，但对抗原靶标不具有特异性。同型对照可以从实验抗体的物种宿主的正常血清中纯化IgG;或者在单克隆抗体的情况下，可以是同一亚类的单克隆抗体，针对不相关的抗原。未标记抗体的同型对照是未标记的，标记抗体的对照用与实验抗体相同的报告分子（荧光团、酶或生物素）标记。
艾美捷Jackson ImmunoResearch产品主要包括：各种纯化的二抗、标记的二抗（AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记）、试剂等。
艾美捷科技是Jackson ImmunoResearch ImmunoResearch的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/Jackson ImmunoResearch-china-distributor.shtml
Synaptic Systems--BCRP1/ABCG2抗体：探索小鼠多药耐药性蛋白
BCRP1/ABCG2是一种重度糖基化的跨膜蛋白，具有六个跨膜区域，表明其可能具有半转运蛋白的功能（1）。
神经球已被证明具有高水平的BCRP1/ABCG2，神经球中约63%的细胞为BCRP1/ABCG2阳性，与巢蛋白阳性细胞的比例相似，而且在大多数情况下，BCRP1/ABCG2和巢蛋白的染色共定位于相同细胞中（2）。BCRP1/ABCG2最初是在多药耐药的乳腺癌细胞系中被发现的。过去的研究扩展了对其在生理学、病理学和药物抗性中作用的理解（3）。从生理学上讲，BCRP1/ABCG2表达在包括血脑屏障在内的屏障器官和组织中，BCRP1/ABCG2定位于内皮细胞的腔面质膜，并促进从大脑到血液的方向性外排跨越血脑屏障（4, 5）。
1 ) Krishnamurthy P, Annual review of pharmacology and toxicology (2006) 46: 381-410.
2 ) Scharenberg CW, Blood (2002) 992: 507-12.
3 ) Kukal S, Cellular and molecular life sciences : CMLS (2021) 7821-22: 6887-6939.
4 ) Cooray HC, Neuroreport (2002) 1316: 2059-63.
5 ) Eisenblätter T, Biochemical and biophysical research communications (2002) 2934: 1273-8.
艾美捷Synaptic Systems--BCRP1/ABCG2抗体：
目录号：518 005，50微克特异性抗体，冻干。亲和层析纯化，使用免疫原。添加了白蛋白和叠氮化物以稳定。复溶时加入50微升H2O，以获得1毫克/毫升的PBS溶液。然后分装并储存在-20°C至-80°C直到使用。
抗体在仍然是冻干状态时应储存在+4°C。不要冷冻！
Synaptic Systems--BCRP1/ABCG2抗体应用：
WB（西方印迹）：1:1000至1:2000（AP染色）图库
ICC（免疫细胞化学）：1:1000图库
IHC（免疫组化）：尚未测试
IHC-P（免疫组化-过氧化物酶）：1:500至1:1000图库
免疫原：对应于小鼠BCRP1/ABCG2（UniProt编号：Q7TMS5）羧基区域附近的重组蛋白残基。
反应性：与以下物种反应：小鼠（Q7TMS5）。
信号较弱：大鼠（Q80W57）。
其他物种尚未测试。
文献参考：
Role of ABCG2/BCRP in biology and medicine.
Krishnamurthy P, Schuetz JD
Annual review of pharmacology and toxicology (2006) 46: 381-410. .
Multidrug efflux transporter ABCG2: expression and regulation.
Kukal S, Guin D, Rawat C, Bora S, Mishra MK, Sharma P, Paul PR, Kanojia N, Grewal GK, Kukreti S, Saso L, et al.
Cellular and molecular life sciences : CMLS (2021) 7821-22: 6887-6939. .
The ABCG2 transporter is an efficient Hoechst 33342 efflux pump and is preferentially expressed by immature human
hematopoietic progenitors.
Scharenberg CW, Harkey MA, Torok-Storb B
Blood (2002) 992: 507-12. .
Localisation of breast cancer resistance protein in microvessel endothelium of human brain.
Cooray HC, Blackmore CG, Maskell L, Barrand MA
Neuroreport (2002) 1316: 2059-63. .
A new multidrug resistance protein at the blood-brain barrier.
Eisenblätter T, Galla HJ
Biochemical and biophysical research communications (2002) 2934: 1273-8. .
艾美捷科技是Synaptic Systems的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/Synaptic-Systems.shtml
Synaptic Systems--单羧酸转运蛋白4抗体，多功能实验解决方案
质子偶联的单羧酸盐通过细胞膜的转运在大多数细胞的代谢和pH调节中起着关键作用。到目前为止，已经鉴定出14种不同的单羧酸转运蛋白（MCTs）。其中只有四种（MCT 1-4）已被证明能够积极地将单羧酸盐丙酮酸和乳酸转运过细胞膜。
MCT 1，也称为Slc16 a1，以及MCT 2在哺乳动物大脑中的星形胶质细胞亚群和血管中显示出不同的表达。
MCT4在糖酵解细胞中高度表达，如骨骼肌纤维、星形胶质细胞、白细胞、软骨细胞以及一些哺乳动物细胞系。
1 ) Morrison BM, Experimental neurology (2015) 263: 325-38.
2 ) Smith JP, Brain research (2012) 1480: 1-11.
3 ) Wilson MC, The Journal of biological chemistry (2009) 28430: 20011-21.
4 ) Manoharan C, Molecular membrane biology () 236: 486-98.
5 ) Hanu R, American journal of physiology. Cell physiology (2000) 2785: C921-30.
艾美捷Synaptic Systems--单羧酸转运蛋白4抗体：
目录号：356 405，50微克特异性抗体，冻干。使用免疫原亲和纯化。添加了白蛋白和叠氮化物以稳定。复溶时加入50微升H2O，以获得1毫克/毫升的PBS溶液。然后分装并储存在-20°C至-80°C直到使用。
抗体在仍然是冻干状态时应储存在+4°C。不要冷冻！
Synaptic Systems--单羧酸转运蛋白4抗体应用：
WB（西方印迹）：1:1000至1:2000图库
IP（免疫沉淀）：尚未测试
ICC（免疫细胞化学）：尚未测试
IHC（免疫组化）：尚未测试
IHC-P（免疫组化-过氧化物酶）：1:200至1:1000图库
免疫原：对应于大鼠单羧酸盐转运蛋白4（UniProt编号：O35910）的447至459氨基酸的合成肽。
反应性：与以下物种反应：大鼠（O35910）、人类（O15427）、小鼠（P57787）。
其他物种尚未测试。
特异性：单羧酸盐转运蛋白4。
文献参考：
Deficiency in monocarboxylate transporter 1 (MCT1) in mice delays regeneration of peripheral nerves following sciatic nerve
crush.
Morrison BM, Tsingalia A, Vidensky S, Lee Y, Jin L, Farah MH, Lengacher S, Magistretti PJ, Pellerin L, Rothstein JD
Experimental neurology (2015) 263: 325-38. .
Regulation of Mct1 by cAMP-dependent internalization in rat brain endothelial cells.
Smith JP, Uhernik AL, Li L, Liu Z, Drewes LR
Brain research (2012) 1480: 1-11. .
Studies on the DIDS-binding site of monocarboxylate transporter 1 suggest a homology model of the open conformation and a
plausible translocation cycle.
Wilson MC, Meredith D, Bunnun C, Sessions RB, Halestrap AP
The Journal of biological chemistry (2009) 28430: 20011-21. .
艾美捷科技是Synaptic Systems的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/Synaptic-Systems.shtml
Synaptic Systems--Abeta-pE11抗体的特异性识别与应用
阿尔茨海默病患者的淀粉样沉积物，也称为斑块，由几种蛋白质成分组成，如淀粉样β肽（Abeta, Aβ）1-40/42以及额外的C端和N端截短和修饰的片段。非常丰富的是异天冬氨酸（isoAsp）-Abeta和焦谷氨酸（pGlu）-Abeta肽。后者是通过谷氨酰胺环化酶（QC）催化的第3位或第11位N端谷氨酸的环化形成的，导致非常淀粉样和神经毒性的Abeta变体；Abeta pE3和Abeta-pE11。
与不完全与阿尔茨海默病相关的细胞外斑块相比，细胞内Abeta积累和血管Abeta沉积越来越多地被认为是导致神经元逐渐丧失的关键因素之一。
1 ) Sullivan CP, Neuroscience letters (2011) 5052: 109-12.
2 ) Perez-Garmendia R, Journal of neuroimmunology (2010) 2291-2: 248-55.
3 ) Schilling S, Nature medicine (2008) 1410: 1106-11.
4 ) Hook V, Biological chemistry (2008) 3898: 993-1006.
5 ) Böhme L, Biological chemistry (2008) 3898: 1055-66.
艾美捷Synaptic Systems--Abeta-pE11抗体：
目录号：218 603，50微克特异性抗体，冻干。使用免疫原亲和纯化。添加了白蛋白和叠氮化物以稳定。复溶时加入50微升H2O，以获得1毫克/毫升的PBS溶液。然后分装并储存在-20°C至-80°C直到使用。
抗体在仍然是冻干状态时应储存在+4°C。不要冷冻！
Synaptic Systems--单羧酸转运蛋白4抗体应用：
WB（西方印迹）：1:1000（见备注）图库
IP（免疫沉淀）：尚未测试
ICC（免疫细胞化学）：尚未测试
IHC（免疫组化）：1:200（见备注）图库
IHC-P（免疫组化-过氧化物酶）：1:100（见备注）图库
ELISA（酶联免疫吸附试验）：是（见备注）图库
免疫原：对应于人类Abeta-pE11（UniProt编号：P05067）的第11至16氨基酸的合成肽。
反应性：与以下物种反应：人类（P05067）、大鼠（P08592）、小鼠（P12023）。
其他物种尚未测试。
特异性：特异于Abeta-pE11。
备注
WB：检测纯化的Abeta-pE11。复杂的样本如脑提取物尚未测试。转印后将膜煮沸3分钟。
IHC：需要用甲酸进行抗原修复。
IHC-P：需要用甲酸进行抗原修复。
ELISA：适合作为检测抗体。
文献参考：
The Arctic AβPP mutation leads to Alzheimer's disease pathology with highly variable topographic deposition of differentially truncated Aβ.
Kalimo H, Lalowski M, Bogdanovic N, Philipson O, Bird TD, Nochlin D, Schellenberg GD, Brundin R, Olofsson T, Soliymani R, Baumann M, et al.
Acta neuropathologica communications (2013) 1: 60. 218 603 IHC; tested species: human
艾美捷科技是Synaptic Systems的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/Synaptic-Systems.shtml
Synaptic Systems：WB碱性磷酸酶检测方案
在标准的西方印迹（WB）方法中，蛋白质样品通过变性SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）根据它们的分子量进行分离，转移到膜上，并通过抗体的免疫检测进行分析。
碱性磷酸酶（AP）染色是一种累积检测系统。在显影过程中可以轻松观察到颜色沉淀，并且当达到所需的信号强度时可以停止染色反应。与增强化学发光（ECL）检测相比，AP染色的灵敏度较低，但不需要特殊的成像设备来观察检测结果。
重要提示：一些蛋白质需要特殊的要求才能良好分离（例如未煮沸的样品或特殊的凝胶系统）。请参阅各自数据表中关于西方印迹的备注部分。
艾美捷Synaptic Systems--WB--碱性磷酸酶检测材料和试剂：
1、Ponceau S染色溶液：5%乙酸，0.1% Ponceau S
2、5%脱脂牛奶在含有Tween 20的Tris缓冲盐水中（5%脱脂牛奶-TBST）：20 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl，5%（w/v）脱脂奶粉，0.02%叠氮化钠，0.1% Tween 20
3、碱性磷酸酶的底物缓冲液：100 mM Tris-HCl，pH 9.5，100 mM NaCl，5 mM MgCl2
4、BCIP染色溶液：20 mg/ml在100%二甲基甲酰胺中
5、NBT染色溶液：50 mg/ml在70%二甲基甲酰胺中
6、完整的染色溶液：每10 ml底物缓冲液中含有80 µl BCIP溶液和60 µl NBT溶液。使用前短时间准备此溶液。
7、一抗
8、碱性磷酸酶（AP）偶联的二抗检测试剂
程序：
使用SDS-PAGE分离待检测的蛋白质样品和分子量标准，并通过电泳转印到硝酸纤维素膜上。按照您的SDS-PAGE和转印设备的制造商说明操作。
1、使用Ponceau S染色溶液在室温下染色数分钟，以检查转移效率。
2、用水冲洗膜以去除Ponceau S染色溶液，并在室温下在实验室摇床中用5%脱脂牛奶-TBST孵育30分钟。
3、在室温下在实验室摇床中用新鲜的5%脱脂牛奶-TBST含有适当稀释的一抗孵育至少2小时，或在4°C下过夜。
4、用5%脱脂牛奶-TBST冲洗3-4次，每次10分钟。
5、用新鲜的5%脱脂牛奶-TBST含有推荐的AP偶联二抗（例如抗小鼠IgG，抗兔IgG）在适当的稀释下至少孵育1小时。
6、用5%脱脂牛奶-TBST冲洗3次，每次10分钟。
7、用底物缓冲液冲洗并平衡5分钟。
8、更换新鲜的完整的染色溶液并显影15-30分钟。如果信号非常强或弱，可以适当缩短或延长时间。
9、用H2O冲洗3次以停止染色反应。
注：Synaptic Systems标准协议在SYSY实验室中产生了良好的结果，并且可以用作参考。然而，为了获得高的特异性信号和低的非特异性背景信号，必须单独确定合适的抗体浓度、孵育温度和孵育时间。
艾美捷科技是Synaptic Systems的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/Synaptic-Systems.shtml
Synaptic Systems：ICC染色-甲醛固定方案
这个协议适用于甲醛（FA）固定的细胞的免疫细胞化学分析。科学家们使用自制的FA固定液，通过在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中溶解对甲醛（PFA），或者他们使用含有不同量的甲醇以稳定化的现成FA固定液。在我们的标准ICC协议中，我们使用含有少量甲醇的现成FA溶液。最佳的固定时间可能因细胞类型、细胞室或抗体而异。过短或过长的固定时间可能导致细胞结构完整性差或抗原掩蔽。在我们的标准协议中，我们采用15分钟4% FA固定以获得良好的结果。然而，有些抗体需要更短/更温和的FA固定，甚至需要甲醇或丙酮固定，因为表位容易被FA交联掩蔽（请参阅备注部分以获取不同的固定协议）。
重要提示：一些蛋白质需要特殊的要求才能良好检测。请参阅各自数据表中关于ICC的备注部分。
艾美捷Synaptic Systems--ICC染色-甲醛固定的材料和试剂：
1、PBS：磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4
2、固定缓冲液：4% FA（或4% PFA）在PBS中，pH 7.4，4%蔗糖
3、封闭缓冲液：10%正常血清，0.1% Triton X-100在PBS中（建议使用二抗宿主物种的正常血清进行封闭）
4、孵育缓冲液：5%正常血清，0.1% Triton X-100在PBS中（可以省略Triton；建议使用二抗宿主物种的正常血清进行封闭）
5、封片介质
6、可选：DAPI核染色
程序：
1、用PBS简要冲洗细胞。
2、用固定缓冲液固定细胞15-20分钟。
3、用PBS冲洗三次，每次10分钟。
4、用封闭缓冲液孵育30分钟。
5、在孵育缓冲液中含有一抗（适当稀释，请参阅数据表）孵育2小时。
6、用PBS冲洗三次，每次10分钟。
7、在孵育缓冲液中含有二抗孵育1小时（最佳稀释必须通过实验确定）。可选：在二抗溶液中加入DAPI。使用二抗时避免强光以最小化荧光染料的光漂白。重要提示：当使用荧光素偶联的一抗时，可以省略这一步。在多重染色中，确保使用对您实验中使用的其他一抗宿主物种进行过交叉吸附的二抗。理想情况下，所有二抗应来自同一宿主物种。如果不是，请确保它们也已经对其他二抗的宿主物种的IgG进行了交叉吸附。这避免了二抗之间的交叉反应。
8、用PBS冲洗三次，每次10分钟。
9、封片并用显微镜观察。
注：Synaptic Systems标准协议在SYSY实验室中产生了良好的结果，并且可以用作参考。然而，为了获得高的特异性信号和低的非特异性背景信号，必须单独确定合适的抗体浓度、孵育温度和孵育时间。
艾美捷科技是Synaptic Systems的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/Synaptic-Systems.shtml