Cayman前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒相关参数、文献及结果图
艾美捷Cayman Chemical前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒详情：
货号 514010
产品应用 ELISA
检测原理 本试剂盒采用竞争ELISA法。用PGE2抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的PGE2与包被的PGE2竞争生物素标记的抗PGE2单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，PGE2浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中PGE2的浓度。
反应类型 Competitive-ELISA
规格 96 T / 48 T / 96 T × 5
反应时间 2 h 30 min
反应性 Universal
检测方法 比色法;ELISA;竞争法
检测范围 31.25-2000 pg/mL
灵敏度 18.75 pg/mL
样本体积 50 μL
样本类型 血清、血浆、细胞上清、细胞提取液体、组织匀浆等其他生物体液
特异性 可检测样本中的PGE2，且与其它类似物无明显交叉反应
精密度 板内，板间变异系数均<10%
回收率 80%-120%
储存条件 2-8℃/-20℃
有效期 6个月
前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒结果图：
前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒文献参考：
Cancer cell-intrinsic XBP1 drives immunosuppressive reprogramming of intratumoral myeloid cells by promoting cholesterol production
IF: 31.373
Journal：Cell Metabolism
DOI：10.1016/j.cmet.2022.10.010
PMID：36351432
Aloe polymeric acemannan inhibits the cytokine storm in mouse pneumonia models by modulating macrophage metabolism
IF: 10.723
Journal：CARBOHYDRATE POLYMERS
DOI：10.1016/j.carbpol.2022.120032
PMID：36184177
ATP release drives heightened immune responses associated with hypertension
IF: 10.551
Journal：Science Immunology
DOI：10.1126/sciimmunol.aau6426
Melanoma-specific bcl-2 promotes a protumoral M2-like phenotype by tumor-associated macrophages
IF: 10.252
Journal：Journal for ImmunoTherapy of Cancer
DOI：10.1136/jitc-2019-000489
PMID：32269145
FAQ：
Q1:ELISA试验是否需要技术重复？阳性或阴性对照如何设置？
建议客户做技术重复，一方面确认操作手法，一方面验证和提高实验结果的准确性。 ELISA实验中的阳性对照可以认为就是标准品。阴性对照是与待捡物具有同源性和同质性的空白基质或者已知浓度很低的基质溶液，一般较难获取，如果有可以设置为阴性对照。常规是设定空白对照，即样本稀释液。
Q2:试剂盒为什么建议做预实验？如何进行预实验？
预实验的目的是： 1．确定该试剂盒是否适合您的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费； 2．帮助您熟悉试剂盒的操作流程，尤其是初次使用ELISA试剂盒/更换实验品牌的客户； 3．确定样本稀释与否及稀释倍数是否适合本试剂盒的测定并确认最适样本稀释信息； 4．帮助了解实验过程中可能出现的实验现象或者是问题，好及时作出调整； 具体方法：在正式检测前，选择差异较大的2-3个样本，进行不同浓度的样本稀释，然后按照说明书上的实验操作步骤进行预实验，根据预实验的结果，再结合试剂盒的检测范围来确定样本的最佳稀释倍数。
Q3:ELISA实验是否需要设置复孔？
为了保证实验结果的准确性，建议标准品和样品都做复孔检测。当然，ELISA实验并非要求一定做复孔/3复孔，客户可根据自己的需求设置实验的复孔与否。
Q4:为什么有些指标有两个货号的产品去测不同的样本类型呢？
各种样本类型的基质是不一样的，为了降低基质本身的影响并提高常规样本测值的准确性，通常会设定不同体系的ELISA试剂盒，并以不同的货号展示。另外，有些指标在不同样本间浓度差异很大，所以通过不同的产品来满足客户对于操作便捷性的需求。
Q5:稀释方案
稀释100倍：一步稀释。取5μl样本到495μl标准品&样本稀释液内，做100倍稀释； 稀释1000倍：两步稀释。取5μl样本到95μl标准品&样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μl 20倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍； 稀释100000倍：三步稀释。取5μl样本到195μl标准品&样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μl 40倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μl 2000倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍； 每步稀释时取液量不少于3μl，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
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Jackson ImmunoResearch二抗团宠--HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG（H+L）
辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG（H+L）二抗（115-035-003）--Jackson ImmunoResearch其中一个IVD原料中的二抗“宠儿”~
二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如ELISA、化学发光，免疫组织化学，免疫细胞化学，流式细胞术等。二抗是体外诊断试剂开发和生产过程中的总要原料之一，合理、灵活地选择和使用二抗有助于节约产品研发周期、提高产品灵敏度。
艾美捷Jackson ImmunoResearch HRP标记亲和纯化山羊抗兔IgG（H+L）二抗（111-035-003）信息一览表：
英文名称 Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)
中文名称 辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG（H+L）二抗
靶标 小鼠
宿主 山羊
抗体形式 全IgG
特异性 IgG（H + L）
偶联标记物 辣根过氧化物酶（HRP）
产品类别 完整IgG亲和纯化的抗体
克隆性 多克隆
产品状态 冻干粉（具体以所购批次的说明书为准）
保存和溶解 原装冻干粉储存在2-8°C。用产品说明书指定体积的dH2O复水，如果不清晰，则离心。在使用当天准备工作稀释液。未稀释液体产品在2-8°C下可稳定保存6周。（具体以所购批次的说明书为准）
溶解后保存方法 方法一：分装并冷冻于-70°C或更低的温度，避免反复冻融。 方法二：添加等体积的甘油（ACS级或更高），使最终浓度减半，并以液体形式存储于-20°C。 有效期为自溶解日起一年。如果测试结果对预期用途是可接受的，有效期可以延长。
纯化方法 使用与琼脂糖珠偶联的抗原通过免疫亲和色谱法从抗血清中纯化抗体。
缓冲液成分 0.01M磷酸钠，0.25M NaCl，pH 7.6（具体以所购批次的说明书为准）
稳定剂 15 mg/ml牛血清白蛋白（不含IgG，不含蛋白酶）（具体以所购批次的说明书为准）
防腐剂 无（注意：使用叠氮化钠作为防腐剂将抑制辣根过氧化物酶的酶活性）
建议的工作浓度或稀释范围 1:500 - 1:5000用于免疫组化/免疫细胞化学 1:5000 - 1:100000用于显色法的ELISA和WB（显色底物） 1:10000 - 1:200000用于使用ECL底物的WB
贴心Tips：
1.注意内源性过氧化物酶。一些组织包含可与过氧化物酶底物反应的内源性过氧化物酶样酶，导致背景染色。可用过氧化氢预处理样品来耗尽内源酶的活性，从而可以清楚地检测到特定信号。
2.不要在含有HRP的溶液中加入叠氮化钠。它将使酶失活。
3.如果添加甘油以延长溶解后产品的保质期，请确认甘油为ACS级或更高级。因为较低等级的甘油可能会严重抑制过氧化物酶的活性。
艾美捷科技是Jackson ImmunoResearch的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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Jackson ImmunoResearch侧流免疫层析（试纸条）亲和纯化IgG方案
侧流免疫层析（lateral flow immunochromatography assay，LFIA；也简称为侧向层析）是一种基于抗原、抗体免疫反应的经典床旁检测技术（point of care testing，POCT）。侧流免疫层析试纸条，是一种在不使用实验室设备的情况下确认目标分析物是否存在的简易便携装置，作为是一种低成本、直接的方法，被广泛应用于检测人类和动物的感染或生物标志物，以及水、食物和动物饲料中的污染物和有害物质。
侧流免疫层析常见形式
侧流免疫层析的3种常见形式：直接法（图1）、夹心法（图2）和竞争法（图3）。每个测试都是以线性条带形式运行的，由分离和检测感兴趣的分析物所需的材料制成，并提供一个对照反应以确认测试的正确进行。下面的例子概述了侧流免疫层析的基本原理，并简要地强调了条带的组成部分和它们的功能。
关键试剂
抗体 - 亲和力和特异性
选择正确的抗体是开发成功的侧向流动免疫测定法的关键因素。
“如果没有认真测试筛选合适的抗体，那么再多的优化都无法克服这种固有的缺陷”（Brown，2008 年）
亲和力
亲和力特别重要，因为抗原的相对丰度可能很低。由于抗原、抗体偶联物和包被的抗体在测试条的分析区域中相互作用仅几秒钟，因此需要快速的 kon速率和慢的 koff速率。
特异性
抗体必须能特异性地识别目标抗原，而不能检测类似或同源的蛋白质和分子。由于在LFIA测试中使用了高浓度的抗体（通常比ELISA板孔中的抗体浓度高25-100倍），出色的特异性也是至关重要的。胶体金抗体偶联物通常以每次30-250ng的量被使用。如果假设样品在10-50ul内使标记的抗体再水化，那么抗体结合物的浓度将在0.6到20ug/ml之间。在较高的浓度下，抗体可能是其Kd的100倍，这可能会促使结合力弱、特异性低的抗体产生非特异性的相互作用，从而导致假阳性。
数量
首先要考虑的因素之一是启动和维持商业产品所需的数量。如果每条带 1ug 的捕获抗体并希望制作 100 万条，则所需的抗体量至少为 1g。因此，确保供应商能够以一致的质量生产大批量产品至关重要。如果要在内部制造抗体，则必须注意选择合适的抗原、免疫方法、筛选策略和放大工艺。
克隆性
单克隆抗体
单克隆抗体 (MAb) 的开发和生产是获得具有所需属性和保证质量稳定的抗体的有效方法。然而，在体外条件下的放大可能会很昂贵，并且在纯化运行之间可能会出现批次间的差异。筛选单克隆抗体以识别那些在膜结合、标记和与最终测定中使用的其他抗体一起表现良好的单克隆抗体也很重要。抗体在与膜结合时作为捕获剂工作良好，但在与报告分子结合时表现不佳的情况并不少见。最后，筛选还必须识别在实验条件下识别检测形式中表位的抗体，例如缓冲液成分或抗原的构象结构。
多克隆抗体
多克隆抗体 (PAb) 的生产很容易扩大规模，无论是使用兔子、山羊、鸡还是驴作为宿主动物。PAb 的另一个优点是它们也可用于实现更高的检测灵敏度。作为IgG的混合物，每种IgG同时和组合识别抗原上的不同表位，它们允许沉积更多的报告分子，从而增加信号。PAb 可能存在批次间差异，但由于它们是由宿主动物的免疫系统产生的，可能会随着时间而改变。
验证
无论来源或制造方法如何，都需要使用相应的工作流程来检验，以确保测试的一致性和可重复性。
对照线/质控线—抗体（Control Reagents）
虽然开发或选择合适的捕获和检测抗体对检测的性能至关重要，但在LFIA中使用的控制试剂的选择也很重要。与报告分子偶联的IgG或二抗通常被用来设置必要的对照线/质控线，以确保测试的正确可信。例如，阳性对照线可以用抗鸡的二级抗体，该抗体与偶联的鸡IgY结合。鸡IgY经常被使用，因为与哺乳动物IgG相比，鸡IgG的同源性和序列特征较低，因此产生的非特异性相互作用较少。对照线抗体也应该与LFIA中使用的其他抗体有最小的交叉反应，因为如果测试中使用的IgG或样品中存在的IgG干扰了对照试剂的结合，那么对照线的强度就会有很大的变化。
用于血清学测试的捕获抗体和检测抗体
血清学LFIA，使用抗体来捕获或检测由患者免疫反应产生的IgG。在血清学LFIAs中，检测线是涂有抗原的，而病人的样本中含有特定同型的抗原IgG，通过与病人血液中的IgG结合，而产生信号，该抗体与检测线上的抗原相结合（见图1）。检测抗体的特异性很关键，它不应该与检测中使用的其他物种的抗体或其他同种型的抗体结合。例如，在独立检测IgG和IgM同种型的检测中，抗IgG抗体不能与IgM发生交叉反应，而抗IgM抗体不能检测IgG。
报告分子与偶联物
常用于侧流免疫层析的报告分子包括胶体金、乳胶珠和荧光染料。每种选择都有明显的优势，选择取决于检测目标和检测读出方法。其他标签包括顺磁颗粒、酶、量子点、纤维素纳米珠、纳米金、二氧化硅纳米颗粒、生物发光和发光材料，以及上转换荧光剂（Goryacheva等，2013，Quesada-González & Merko?i，2015，和（Guo等，2021）
胶体金（Colloidal Gold）
胶体金是一种广泛用于LFIA的偶联物，因为它能产生强烈的颜色，易于偶联，并且它的质量稳定。典型的尺寸在40-80nm之间，其中40nm是最常见的。
金颗粒与抗体的结合通常是通过静电和疏水的相互作用被动进行的。这两个实体在低离子强度的缓冲液中混合，然后用多元醇或蛋白质如白蛋白或酪蛋白进行封闭。胶体金也有活化的表面，如羧基，允许在必要时进行共价连接。
乳胶微粒
乳胶颗粒用途广泛，自其最初开发以来一直被用于侧向流检测。颗粒可以装载彩色和/或荧光染料、顺磁颗粒和其他化学品。不同颜色的染料可以进行多种同时读出的检测。用于LFIA的标准尺寸范围为100-300um。缀合方法在吸附或共价连接之间变化，取决于表面化学。乳胶珠的敏感度可能低于胶体金，因为它们的大尺寸使它们不能密集地包装在测试或控制线上。
荧光染料
荧光染料作为标签得到了青睐；作为小分子（<1nm），它们比较大的纳米颗粒更容易从偶联垫中释放出来。染料有助于通过一个LFIA设备对多种分析物进行定量和检测（Wild，2016），尽管它们需要使用特殊的阅读设备来显示结果并充分利用染料的特性。适用于LFIAs的荧光团应该是经济的，具有长斯托克斯位移，良好的量子产率，并且是光稳定的。染料有多种形式，便于与蛋白质和小分子上的伯胺和巯基共价偶联。荧光素Fluorescein 和Cyanine染料是流行的选择。
一些染料可能不适合用于LFIA，因为在高浓度下会出现光漂白或淬灭。结合活性可能会因为发生在抗体副体或目标表位的关键点上的共价偶联而受到影响，或者因为疏水性染料引起的聚集。
以上，是艾美捷总结的一些关于侧流免疫层析（试纸条）亲和纯化IgG抗体的相关资料。
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Jackson ImmunoResearch 适用于STED的荧光团偶联抗体方案
科学家们已经研发了多种超分辨率技术，远远超出了衍射极限，能够观察到分子尺度的细节。SRM技术可以将细胞结构解析为亚细胞水平，从而获取有关细胞组分的3D结构的信息，并可以观察到单分子共定位。一起来了解一下其中一种SRM技术【受激发射耗竭（STED）显微镜】的原理：
STED对于有经验的荧光显微镜使用者来说相对简单，该方法和普通共聚焦显微镜（Confocal）的原理相同。普通Confocal使用单光源，而STED使用双光源。其中一个光源发射能激发荧光团——荧光标签（研究者们以此来定位和观察蛋白）的光，另一个光源发出不同波长的光，用于抑制荧光。这束光是环形的，并且与第一束光有所重叠，因此只有环形中间区域的分子会继续发出荧光。
获得STED超分辨率图片并没有那么复杂，用户需要仔细调整参数，才能得到漂亮的结果，否则所得图片和普通confocal没有差别。
STED的原理：
显微镜透镜对光的衍射会导致来自单个点的光出现在较大的区域，这称为点扩散函数（PSF）（见图1），由于PSF的存在，使得常规显微镜无法达到超分辨。
图1：在普通光学显微镜中，成像是通过将来自点光源的光线会聚到像平面上的单个点来实现的。超出光衍射的限制，防止了射线的精确会聚，从而导致物体的图像模糊。显微镜的分辨率取决于点扩散函数（PSF）的大小，或对象在某个点的三维强度分布。在STED中，应用环形炸弹耗尽型激光器，其零点与激发激光焦点的最大值重叠。STED激光器引起荧光的“饱和耗尽”，从而“抑制了来自零点附近区域的荧光，导致有效PSF的尺寸减小”。
而受激发射耗竭（STED）显微镜通过限制样品的荧光区域（PSF）产生超分辨率图像。STED显微镜使用两个重叠的激光，第一个按照常规显微镜激发荧光团（图2A）。第二个激光器称为耗尽激光器（STED激光器），它激发“甜甜圈”形状的激光，其中心的零强度点非常小（?30 nm）（未激发）。除了在甜甜圈的中心处之外，第二激光起到了“关闭”第一激光所产生的外圈荧光，从而将样本激发的荧光分子范围缩小到中心圆点处，这有效地降低了PSF，以产生非常小的单分子荧光聚焦区域，从而获得高分辨率图像（图2D）。
图2：1.单个小于250 nm的蛋白质无法通过标准共聚焦成像解析，从而导致图像模糊；2.STED耗尽激光器产生了淬灭外围荧光的“甜甜圈”；3.饱和耗尽在功能上降低了激励PSF；4.随之可以解析单个蛋白质
适用于STED的荧光团偶联抗体：
为了获得超分辨率，染料必须具有STED激光波长的高发射截面，并有效地实现高饱和度。这种强烈的照明确保了所有被STED激光“关闭”的分子都受受激发射的支配。合适的染料应具有低的光漂白性，具有高的量子产率和对比度，并在目标附近具有足够的标记密度。
艾美捷Jackson ImmunoResearch提供荧光染料标记的二抗，下列染料标记的二抗已被验证在STED中成功使用：
染料 货号
AlexaFluor®488——115-545-003
FITC——715-095-150
AlexaFluor®594/647 ——715-585-151
每种SRM技术都有各自的探针选择要求，Jackson ImmunoResearch提供多种已知在SRM应用中表现良好的荧光标记二抗。应该注意的是，SRM领域变化迅速，因此，建议从专业技术文献中寻求信息，以帮助选择合适的荧光团。
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符合STED超分辨率显微镜特定要求的Synaptic Systems（SySy）抗体
揭示突触的结构和功能一直是研究的重点。尽管如此，传统显微镜技术中的衍射障碍限制了分辨率，从而限制了对突触结构和功能的洞察。超分辨率显微镜能够以前所未有的精确度可视化突触结构。这种能力改变了我们检查突触间隙内蛋白质的空间组织、活动区域和突触后密度的能力，使我们能够非常详细地进行观察。它促进了在分子水平上对突触组分的异质性和动态性的研究。
艾美捷Synaptic Systems（SySy）部分符合STED超分辨率显微镜特定要求的抗体：
Cat. No. Product Description Application Quantity
141 111AbOR Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. ICC 100 µg
141 111AbRED Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED K.O. ICC 100 µg
160 111AbOR Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE ICC 100 µg
160 111AbRED Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED ICC 100 µg
162 311AbOR Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE ICC 100 µg
162 311AbRED Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED ICC 100 µg
106 011AbOR Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. ICC 100 µg
106 011AbRED Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED K.O. ICC 100 µg
左图：使用STED显微技术，前突触的Bassoon蛋白用abberior STAR RED标记，后突触的Homer1蛋白用abberior STAR ORANGE标记，显示出清晰分离的突触结构。
右图：Bassoon和Homer1在突触定位的示意图。
STED显微技术小课堂：
在纳米级光学显微镜技术，特别是STED（受激发射损耗）显微技术出现之前，研究人员受到传统光学显微镜衍射极限的限制。这一限制将分辨率限制在大约200-300纳米的横向和500-700纳米的轴向上。STED显微技术的概念由Stefan Hell和Jan Wichmann在1994年提出，并在2000年实验实现（Hell和Wichmann，1994年，Klar等人，2000年）。STED显微技术基于传统的共聚焦激光扫描配置，但除了激发激光外，还包括一个第二红色的、甜甜圈形状的STED激光，其中心强度为零。这样，除了甜甜圈中心的分子外，所有分子都被耗尽。这种配置确保了由中心光束激发的荧光团被STED光束迅速去激发，而任何荧光都来自STED甜甜圈中心的荧光团。荧光信号被锐化，达到了30-70纳米的横向分辨率。衍射障碍被打破。
成功进行STED成像的先决条件
良好的成像结果取决于两个条件：良好的荧光染料和特定的抗体。STED的理想荧光探针必须具备几个关键属性：对STED光束有响应以实现高效去激发，优化的吸收和发射光谱与STED系统中可用的激光线对齐，以及在重复激发和去激发周期中抵抗光漂白。为了实现最佳的STED成像，abberior，STED染料的先驱公司，提供特别优化的荧光染料。abberior STAR ORANGE和STAR RED以其卓越的光稳定性、定制的光谱特性、高效的耗尽能力、高量子产率、与生物样本的兼容性和最小的背景噪声而闻名，是双色STED @775纳米的完美组合。
在STED显微技术中实现高空间分辨率，用于染色活体或固定样本的抗体选择至关重要。SYSY抗体显示出高特异性和亲和力，使它们成为显微镜分析中的精确而强大的工具。使用经过良好表征的单克隆抗体，与单一表位结合具有高特异性，减少了染色模式的变异性和与其他蛋白质或分子发生交叉反应的潜力。
直接耦合的优势
与使用标记的二抗的间接标记相比，直接耦合显示出一系列主要优势。除了消除了对二抗的需求外，直接耦合减少了空间位阻，这在间接标记中可能会降低一抗对目标的亲和力和特异性。此外，它通过非特异性二抗结合非目标蛋白质（交叉反应）减少了背景噪声，缩短了荧光团和抗原之间的距离，并防止了多个二抗结合到单个一抗上对单个分子的空间排列造成掩盖（Früh等人，2021年）。
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Synaptic Systems：CD86在免疫突触中的表达方案
免疫突触（IS）可以定义为免疫细胞在与另一个细胞界面处分子的有序重组（Orange, 2008）。IS存在于抗原呈递细胞（APCs）或靶细胞与淋巴细胞如T细胞、B细胞或自然杀伤细胞之间。这种相互作用对于防御广泛的病原体和异常宿主细胞至关重要。这种相互作用的失调使宿主极易受到病原体的侵害或肿瘤逃逸，另一方面则可能导致自身免疫性疾病（Dustin, 2014）。IS和神经突触共享一些特性，如突触间隙、粘附分子、稳定性和极性，然而免疫细胞之间的相互作用是短暂的，持续时间从几分钟到几小时不等（Friedl et al., 2004）。
细胞类型特异性的免疫突触
根据所涉及的细胞类型，免疫突触可以分为三种功能亚型（Mastio et al., 2020）：溶解性免疫突触（细胞毒性免疫细胞与恶性细胞之间的界面）、抑制性突触（细胞毒性淋巴细胞与健康细胞之间的界面）和调节性突触（细胞毒性细胞与抗原呈递细胞之间的界面，例如树突状细胞）。因此，IS的形成具有许多不同的功能，如配体识别、信号放大和整合、共刺激、细胞毒性、蛋白质分泌和转移、细胞命运决定、激活抑制和信号终止（Orange, 2008年综述），这取决于参与IS形成的细胞类型和受体。
在感染弓形虫的小鼠肝脏中APCs的CD86表达增强
CD86（簇分化86，也称为B7.2）属于B7家族的免疫调节细胞表面蛋白配体，通常在静息B细胞、树突状细胞和巨噬细胞上表达水平较低。激活会导致CD86表达增强（Collins et al., 2005）。CD86和遗传上密切相关的CD80蛋白（也称为B7.1）由抗原呈递细胞表达，通过与T细胞上表达的CD28和细胞毒性T淋巴细胞抗原4（CTLA-4，CD152）相互作用，提供T细胞激活和耐受所需的共刺激信号。CD28的结合导致T细胞激活（Sansom et al. 2000），而CTLA-4的结合则减弱T细胞反应，并作为T细胞激活的负调节器。CD28超家族成员PD-1在与其配体PD-L1结合后也负向调节T细胞激活（Brunner-Weinzierl et al., 2018）。CD80和CD86在免疫调节中扮演非等价的角色：CD86是调节性T细胞（Tregs）增殖和生存的主要配体（Halliday et al., 2020）。与CD80相比，CD86在增强T细胞杀伤能力方面表现出非常高的效率（Thiel et al., 2010）。
弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种细胞内原生动物寄生虫，它不仅感染大脑，还感染其他器官，特别是肝脏。肝脏感染的特点是单核炎症细胞的多灶性聚集（Fernández-Escobar et al., 2021）。在小鼠中，弓形虫感染已被证明可以上调CD86的表达，但不影响CD80在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞中的表达（Fischer et al., 1999）。
使用免疫细胞标记物IBA-1、CD86、CD11b和Chil3对未感染对照小鼠和感染弓形虫的小鼠肝脏切片进行免疫组化染色，结果显示在感染弓形虫的小鼠肝脏中IBA1阳性巨噬细胞高度浸润，以及CD86+、CD11b+和Chil3+细胞的多灶性聚集。在未感染对照小鼠中，IBA-1主要染色Kupffer细胞，且很少检测到CD86阳性APCs。未感染肝脏中CD11b和Chil3阳性主要限制在少数CD11b+骨髓源性单核细胞或Chil3+骨髓源性中性粒细胞。
使用小鼠巨噬细胞标记物F4/80和CD11b对肝脏切片进行免疫荧光双重染色，结果显示在未感染和感染弓形虫的小鼠肝脏中均存在F4/80high CD11b-细胞。然而，F4/80low CD11b+细胞仅在感染弓形虫小鼠肝脏的单核细胞聚集中检测到。F4/80+ CD11b-染色识别Kupffer细胞，而F4/80low CD11b+染色特征为在炎症条件下招募的单核源性巨噬细胞（参见：小鼠驻留巨噬细胞）。
免疫荧光双重染色显示，在感染弓形虫的小鼠肝脏单核细胞聚集中，CD86表达主要在F4/80low或F4/80-细胞中增强，这些细胞被特征化为激活的抗原呈递细胞。
通过使用T细胞标记物CD3e（T细胞系标记物）、CD4（T辅助细胞）或CD8a（细胞毒性T细胞）对肝脏切片进行免疫组化染色，可以观察到CD4+ T辅助细胞和，较少程度上，CD8+细胞毒性T细胞大量浸润感染弓形虫的小鼠肝脏。
T细胞免疫已被证明对感染弓形虫的宿主存活至关重要。CD4+ T细胞对早期干扰素-γ的产生很重要。CD8+ T细胞被认为是对抗这种寄生虫的主要效应细胞（Casciotti, 2002）。对感染弓形虫的小鼠肝脏切片进行CD4和CD86的免疫荧光双重染色显示，CD4+ T辅助细胞在单核细胞聚集中与CD86阳性APCs密切接触，形成免疫突触。
T细胞与APCs接触点的超分子组织首次在1998年被可视化（Monks et al., 1998）。免疫突触的关键分子不仅在界面处被覆盖，而且被组织分布在界面的不同区域。这些区域被称为超分子活化复合物（SMACs）（Huppa et al., 2003年综述）。超分子活化复合物的中心区域（cSMAC）在T细胞位点富集T细胞受体（TCRs）和共刺激受体（CD28、CTLA-4），在APC位点富集肽-MHC（pMHC）和B7配体（CD86、CD80）。cSMAC被认为是信号终止和受体循环的位点（Verboogen et al., 2016）。细胞粘附分子如ICAM-1或粘附分子白细胞功能相关分子-1（LFA-1）位于c-SMAC周围的环状结构中，被称为外周SMAC（p-SMAC）。这些细胞粘附分子为免疫突触提供机械支架。大分子如CD43和CD45位于更远端的区域，称为dSMAC。在细胞毒性T细胞和NK细胞中发现的分泌突触中，溶菌颗粒的释放发生在cSMAC的另一个结构域：分泌结构域（Watanabe et al., 2018）。
艾美捷Synaptic Systems：CD86相关产品：
Cat. No. Product Description Application Quantity
HS-384 117 CD11b, rat, monoclonal, purified IgG mouse specific WB IHC IHC-P IHC-Fr 200 µl
HS-413 108 CD3e, rabbit, monoclonal, recombinant IgG mouse specific IHC IHC-P 100 µl
HS-360 117 CD4, rat, monoclonal, purified IgG mouse specific WB IHC IHC-P IHC-Fr 200 µl
HS-466 003 CD86, rabbit, polyclonal, affinity purified mouse specific WB IHC IHC-P 50 µg
HS-361 003 CD8a, rabbit, polyclonal, affinity purified mouse specific WB IHC IHC-P IHC-Fr 200 µl
HS-442 017 Chil3 / YM1, rat, monoclonal, purified IgG mouse specific WB ICC IHC IHC-P 100 µg
HS-397 008 F4/80, rabbit, monoclonal, recombinant IgG WB IHC IHC-P 100 µl
HS-397 017 F4/80, rat, monoclonal, purified IgG WB IHC IHC-P IHC-Fr 200 µl
HS-234 017 IBA1, rat, monoclonal, purified IgG WB ICC IHC IHC-P 200 µl
Synaptic Systems：CD86部分文献：
Orange, 2008. Formation and function of the lytic NK-cell immunological synapse. PMID: 19172692
Collins et al., 2005. The B7 family of immune-regulatory ligands. PMID: 15960813
Dustin 2014. The immunological synapse. PMID: 25367977
Friedl et al., 2004. Diversity in immune-cell interactions: states and funtions of the immunological synapse.
PMID: 15450978
Mastio et al. 2020. Higher Incidence of B Cell Malignancies in Primary Immunodeficiencies: A Combination of Intrinsic Genomic Instability and Exocytosis Defects at the Immunological Synapse. PMID: 33240268
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Synaptic Systems-GAD1抗体在神经递质调节和自身免疫疾病诊断中的应用
谷氨酸脱羧酶GAD1（也称为GAD67）和GAD2 / GAD65合成γ-氨基丁酸（GABA），这是中枢神经系统中的主要抑制性神经递质。亲水性GAD1可与膜上的GAD 2异源二聚化，部分GAD1通过这种机制靶向抑制性神经末梢。虽然这两种蛋白质在其N-末端表现出显着差异，但它们在分子的其余部分具有高度同源性。GAD是广泛使用的GABA能系统的标记物。在1型糖尿病中，GAD1已被鉴定为主要的自身抗原。GAD 1和2参与GABA的合成，GABA是主要的抑制性神经递质。
艾美捷Synaptic Systems-GAD1抗体：
英文：GAD1 / GAD67 antibody
货号：198 211
克隆：126G12
亚型：IgG2b（κ轻链）
免疫原：对应于小鼠GAD 1氨基末端附近残基的重组蛋白。 （UniProt Id：P48318）
Epitop：表位：来自小鼠GAD 1的AA 94至101（UniProt Id：P48318）
反应性：与小鼠（P48318）、大鼠（P18088）发生反应。 其他物种尚未测试。
特异性：GAD 1 /GAD 67特异性。
应用：WB: 1 : 1000 (AP staining) 、IP: 尚未测试、ICC: 1 : 500 up to 1 : 1000 、IHC: 1 : 500、IHC-P: 1 : 1000
ICC: 1 : 500 up to 1 : 1000
Synaptic Systems-GAD1抗体文献：
Differential regulations of neural activity and survival in primary cortical neurons by PFOA or PFHpA.,Ko MY, Park H, Chon SH, Kim YB, Cha SW, Lee BS, Hyun SA, Ka M,Chemosphere (2024) 352: 141379. 198 211 WB; tested species: mouse
ASCL1- and DLX2-induced GABAergic neurons from hiPSC-derived NPCs.,Barretto N, Zhang H, Powell SK, Fernando MB, Zhang S, Flaherty EK, Ho SM, Slesinger PA, Duan J, Brennand KJ,Journal of neuroscience methods (2020) 334: 108548. 198 211 ICC; tested species: human
Dendritic Inhibition by Shh Signaling-Dependent Stellate Cell Pool Is Critical for Motor Learning.,Li W, Chen L, Fleming JT, Brignola E, Zavalin K, Lagrange A, Rex T, Heiney SA, Wojaczynski GJ, Medina JF, Chiang C, et al.
The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience (2022) 4226: 5130-5143. 198 211 IHC; tested species: mouse
Atlastin-1 modulates seizure activity and neuronal excitability., Lu X, Yang M, Yang Y, Wang XF
CNS neuroscience & therapeutics (2019) : . 198 211 IHC; tested species: human,mouse
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Synaptic Systems--mGluR5抗体在免疫组化检测中的应用
谷氨酸是脊椎动物神经系统中的主要兴奋性神经递质，调节许多细胞信号通路。除了NMDA、AMPA和红藻氨酸型的离子型谷氨酸受体外，迄今为止还描述了八种代谢型受体（mGluR1-8）（1）。该受体家族可分为三组（2）：I组受体（mGluR1、mGluR5）被二羟基苯甘氨酸（DHPG）激活（3），II组受体（mHluR2、mGluR3）被二羧基环丙基甘氨酸（DCG-IV）激活，III组受体（mBluR4、mGluR6、mGluR7、mGluR8）被氨基膦酰基丁酸酯（L-AP4）激活（4）。
mGluRs是参与兴奋性神经传递的代谢型谷氨酸受体 兔单克隆重组IgG
艾美捷Synaptic Systems--mGluR5抗体：
目录号：191 508
50微克纯化的重组IgG，冻干。为稳定添加了白蛋白和叠氮化物。重组时加入50微升H2O以获得1毫克/毫升的PBS溶液。然后分装并储存在-20°C至-80°C直到使用。
抗体在仍然是冻干状态时应储存在+4°C。不要冷冻！
应用：
WB（Western Blot）：不推荐
IP（免疫沉淀）：尚未测试
ICC（免疫细胞化学）：尚未测试
IHC（免疫组化）：1:500比例
IHC-P（免疫组化-过氧化物酶）：不推荐
IHC-G（免疫组化-荧光）：1:500比例（见备注）画廊
克隆 Rb380-035
亚型 IgG1（κ轻链）
免疫原 全长天然人类mGluR5（UniProt编号：P41594）
备注：该抗体是基于单克隆人类抗体380-035的嵌合抗体。重链和轻链的恒定区已被替换为兔子特异性序列。因此，该抗体可以与标准的抗兔二抗试剂一起使用。该抗体已在哺乳动物细胞中表达。
IHC-G：推荐使用3%乙二醛，1%乙酸，20%乙醇，在ddH2O中，pH 4.2-4.4，根据Richter等人2017年的研究。
Synaptic Systems--mGluR5抗体文献参考：
1 ) Shigemoto R, The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience (1997) 1719: 7503-22.
2 ) Nakanishi S, Annual review of biophysics and biomolecular structure (1994) 23: 319-48.
3 ) Schoepp DD, Journal of neurochemistry (1994) 632: 769-72.
4 ) Hayashi Y, Nature (1993) 3666456: 687-90.
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