Hypoxyprobe FITC Mab的应用：缺氧的荧光检测
FITC Mab，即荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记的单克隆抗体，是一种在生物医学研究领域中广泛应用的工具。这种抗体通过与FITC结合，能够特异性地识别和绑定目标分子，为研究提供了一种高灵敏度和高特异性的检测手段。在缺氧研究中，FITC Mab尤其显示出其特别的价值。
Hypoxyprobe FITC Mab大鼠IgG1抗匹莫尼达唑单克隆抗体与荧光素异硫氰酸酯（FITC）绿色荧光染料结合。
艾美捷FITC Mab：
货号：HPB-FITC Mab
特异性：匹莫尼达唑在pO2 ≤ 10mm Hg的条件下与含硫醇的组织蛋白形成加合物。HP FITC MAb-1抗体能够结合组织和组织培养中缺氧细胞内的匹莫尼达唑加合物。
格式：每瓶FITC-Mab含有200微升的稳定稀释剂中溶解的抗体，浓度约为0.5毫克/毫升。
荧光素（FITC）与MAb-1的比例：5.0:1.0
荧光素激发波长：480纳米
荧光素发射波长：518纳米
应用：缺氧的荧光检测。
稳定性：在4摄氏度下超过24个月。
目标物种：所有物种
产品形式：通过亲和色谱纯化的大鼠IgG1
缓冲液：含有稳定剂的专有配方。
FITC Mab在缺氧研究中的应用非常广泛，包括但不限于以下几个方面：
肿瘤微环境分析：在肿瘤学研究中，FITC Mab可以用来识别和映射肿瘤组织中的缺氧区域，这些区域通常与肿瘤的侵袭性、耐药性和预后不良相关。
心血管疾病研究：在心肌梗死或缺血性心脏病的研究中，FITC Mab有助于检测心肌组织中的缺氧区域，为理解疾病进程和评估治疗效果提供重要信息。
神经科学：在研究脑损伤、中风或其他神经退行性疾病时，FITC Mab可以揭示脑组织中的缺氧区域，帮助研究者探索缺氧对神经功能的影响。
细胞培养和组织工程：在体外细胞培养条件下，FITC Mab可以用来评估细胞对缺氧环境的响应，以及不同细胞类型在缺氧条件下的行为。
https://www.amyjet.com/products/HPB-FITC%20Mab.shtml
Hypoxyprobe Mouse Mab1：高效识别缺氧细胞
Mouse Mab1是一种专门设计的单克隆抗体，用于检测缺氧环境中的特定生物标志物。这种抗体在生物医学研究中扮演着重要角色，尤其是在肿瘤学、心血管疾病和神经科学研究等领域。
艾美捷Mouse Mab1：
货号：HPB-Mouse Mab1
描述：适合于免疫荧光，免疫组化和流式检测，针对的探针抗体可选择不带标记/带标记
特点：Pimonidazole HCl；缺氧标志物，（Hypoxia maker）；Chemicon Inc，派诺硝唑，低氧探针，缺氧探针，乏氧探针
保存建议：2-8℃下保存/试剂盒内成分按说明书指示
Mouse Mab1的工作原理：
基于其能够特异性识别和结合缺氧细胞中的匹莫尼达唑（pimonidazole）加合物。在缺氧条件下，匹莫尼达唑被还原并形成稳定的共价加合物与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基基团。这些加合物随后可以被Mouse Mab1抗体识别，通过免疫化学方法进行检测。
Mouse Mab1的应用：
包括但不限于以下几个方面：
1.肿瘤微环境分析：在肿瘤学研究中，Mouse Mab1能够识别肿瘤组织中的缺氧区域，这些区域通常与肿瘤的侵袭性、耐药性和预后不良相关。
2.心血管疾病研究：在心肌梗死或缺血性心脏病的研究中，Mouse Mab1有助于检测心肌组织中的缺氧区域，为理解疾病进程和评估治疗效果提供重要信息。
3.神经科学：在研究脑损伤、中风或其他神经退行性疾病时，Mouse Mab1可以揭示脑组织中的缺氧区域，帮助研究者探索缺氧对神经功能的影响。
4.细胞培养和组织工程：在体外细胞培养条件下，Mouse Mab1可以用来评估细胞对缺氧环境的响应，以及不同细胞类型在缺氧条件下的行为。
Mouse Mab1的优势：
在于其高特异性和灵敏度，这使得它在免疫荧光、免疫过氧化物酶、Western blotting（蛋白质印迹）或流式细胞术等实验技术中表现优异。此外，Mouse Mab1的制备过程采用了细胞融合技术，通过选择性筛选获得具有高亲和力的单克隆细胞系，确保了抗体的一致性和可重复性，适合于大规模的实验应用。
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Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)用于检测低氧浓度条件下的生物反应
Hypoxyprobe™-F6试剂盒组件的详细描述：
Hypoxyprobe™-F6 (CCI-103F)是一种六氟取代的2-硝基咪唑，具有六个磁等价的氟原子；分子量为337.2；水溶性为5.3毫摩尔，相当于1.8毫克/毫升。CCI-103F通常以10%二甲基亚砜/花生油混合物腹腔给药（Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。在避光条件下储存时，CCI-103F非常稳定。
CCI-103F在缺氧细胞中被还原激活。激活的中间体与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫醇）基团形成稳定的共价加合物。初级抗CCI-103F抗血清与这些加合物结合，允许通过免疫化学方法进行检测。
抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6）与还原激活的CCI-103F的蛋白质加合物结合，并作为稀释的兔抗血清供应，含有0.09%的叠氮钠和1%的牛血清白蛋白作为稳定剂。感兴趣的组织可以通过对福尔马林固定的石蜡包埋切片或冷冻固定切片进行免疫组织化学研究，通过组织解离后的流式细胞术，或通过Western blotting进行研究。抗CCI-103F抗血清与CCI103F的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但组织处理在准备免疫组织化学测定时会冲洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫组织化学检测仅依赖于缺氧组织中CCI103F的蛋白质加合物。
在福尔马林固定的石蜡包埋组织切片上进行免疫过氧化物酶分析，涉及将组织切片与大约1:500稀释的抗CCI-103F抗血清100微升孵育。然后应用色原性山羊抗兔二抗以显示缺氧标记物加合物的分布。下面提供了一个详细的免疫过氧化物酶协议作为一般指南，但强调Hypoxyprobe™技术是稳健的，鼓励研究者自行修改。请参阅Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005及其中引用的关于冷冻切片的研究。
艾美捷Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)：
货号：HPB-CCI-103F-250mg
应用：使用Hypoxyprobe™-F6试剂盒通过免疫化学检测手段，包括免疫过氧化物酶、免疫荧光或流式细胞术，来测量组织和细胞中的缺氧。（参见Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006；Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。
数量：a. Hypoxyprobe™-F6试剂盒分别包含100、200或1000毫克的CCI-103F（Hypoxyprobe™-F6）。在小动物研究中通常使用的剂量是每公斤体重60毫克。
b. 每个试剂盒包含稀释的抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6），其中含有0.09%的叠氮钠和1%的牛血清白蛋白作为稳定剂。100毫克和200毫克的试剂盒各含有一个200微升的抗血清单位；1000毫克的试剂盒含有两个200微升的抗血清单位。抗血清的最佳工作稀释度需由研究者确定，但1/200至1/500的稀释度在使用过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗血清时能给出强烈的免疫过氧化物酶染色。
不提供：抗兔二抗试剂或其他免疫组织化学试剂（缓冲液、抗原修复剂等）。
储存：a. 将Hypoxyprobe™-F6存放在室温下的暗处（也可以存放在2-8摄氏度）。
b. 将兔抗血清（PAbF6）存放在2-8摄氏度。
Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)检测说明：
啮齿动物中标记物研究始于将CCI-103F溶解在10%二甲基亚砜/90%花生油中，通过静脉或腹腔注射给药（参见Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005），剂量为每公斤体重60毫克。六十至一百二十分钟后，收获感兴趣的组织。CCI-103F的剂量为每公斤体重60毫克，在摩尔基础上比Hypoxyprobe提供的另一种缺氧标记物匹莫尼达唑盐酸盐的剂量要低，但CCI-103F的血浆半衰期更长（t1/2 = 90分钟，而匹莫尼达唑在小鼠中为25分钟）。
注射后，Hypoxyprobe™标记物分布到所有组织，但只在那些氧浓度低于14微摩尔的细胞中与含硫蛋白质、肽和氨基酸形成加合物——相当于在37摄氏度下的部分压力pO2 = 10毫米汞柱。正常的组织，如肝脏、肾脏和皮肤，包含在pO2为10毫米汞柱或以下的细胞，这些组织将结合Hypoxyprobe™标记物。收获时组织中未结合的Hypoxyprobe™标记物将在解剖组织缺氧时被激活并结合。然而，与组织在典型实验期间暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe™标记物浓度非常小，因此在组织收获时由于残留的Hypoxyprobe™标记物引起的任何非特异性结合都是不可检测的。
图。比较CCI-103F结合（F6，右图）与匹莫尼达唑结合（Pimo，左图）在福尔马林固定的石蜡包埋犬肿瘤活检组织切片中的结合情况。免疫过氧化物酶数据显示，F6结合与匹莫尼达唑的结合非常相似。用于F6和匹莫尼达唑加合物的兔抗血清不发生交叉反应。这允许独立测量两个标记物的结合（参见Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006）。
福尔马林固定的石蜡包埋组织中CCI-103F结合的免疫过氧化物酶分析的建议方案。
Kleiter等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 64: 592-602, 2006。
Hypoxyprobe™技术是稳健的，鼓励研究者自行进行修改。
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Pimonidazole HCl在实验室中的缺氧标记物制备与使用
Pimonidazole HCl，作为一种重要的缺氧标记物，已被广泛用于生物医学研究，尤其是在肿瘤学领域。它是一种2-硝基咪唑类化合物，能够通过特定的化学反应，帮助科学家们在细胞和组织水平上评估缺氧状态。
艾美捷Pimonidazole HCl（HPB-HP-1000mg）缺氧研究的关键角色：
Pimonidazole HCl在缺氧细胞中被还原激活，并与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基基团形成稳定的加合物。这一特性使得Pimonidazole HCl成为检测缺氧环境的理想工具。通过免疫组化检测Pimonidazole HCl的加合物，研究者可以在光学显微镜下定性评估缺氧和细胞增殖，并使用图像分析软件方法进行定量评估。
应用范围广泛：
Pimonidazole HCl的应用不仅限于基础科研，它还在临床试验中发挥作用。例如，在乳腺癌肿瘤模型中，Pimonidazole HCl的质谱成像技术被用来研究缺氧标记物。此外，Pimonidazole HCl的结合与肿瘤血管形成被用来预测头颈癌的治疗结果。这些研究表明，Pimonidazole HCl不仅在实验室研究中有用，也可能在临床实践中提供重要的诊断和预后信息。
使用指南：
通常涉及以下几个步骤：
溶解：将Pimonidazole HCl溶解在适当的溶剂中，如生理盐水或PBS，以制备所需浓度的工作溶液。
给药：通过静脉注射或腹腔注射的方式将Pimonidazole HCl引入实验动物体内。对于小鼠，推荐的剂量通常是每公斤体重60毫克，这个剂量被认为是经济有效的。
组织收获：在给药后的一定时间（通常为15-120分钟）后，收获感兴趣的组织。这个时间窗口允许Pimonidazole HCl在缺氧细胞中被还原并形成加合物。
组织处理：收获的组织可以进行固定、包埋和切片，以便于后续的免疫组织化学染色。
免疫检测：使用特异性抗体检测Pimonidazole HCl的加合物。这可以通过免疫荧光、免疫组化或Western blotting等方法实现。
结果分析：通过显微镜观察或图像分析软件，对缺氧细胞的分布和数量进行定性和定量分析。
注意事项：
Pimonidazole HCl的稳定性较好，固态探针在4°C或常温下性质稳定，可以保存数年。高浓度的探针水溶液在避光4°C条件下也可以保存数年。
在使用Pimonidazole HCl时，需要注意其在体内的分布和代谢。Pimonidazole HCl的血浆半衰期在小鼠中约为15-25分钟，这意味着在组织收获时，大部分探针已经被清除，从而减少了非特异性染色。
对于不同的实验动物，Pimonidazole HCl的剂量可能需要调整。例如，对于人类样本，推荐的剂量为0.5克/平方米，而对于狗则为0.28克/平方米。
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Hypoxyprobe-CY 7 Kit的使用及应用指南
固体盐酸吡莫硝唑（低氧探针™-1）CY 7染料偶联大鼠IgG1单克隆抗吡嘧达唑抗体方案：
艾美捷Hypoxyprobe-CY 7 Kit：
货号：HPB-HP14-100Kit
应用：用于免疫化学检测细胞和组织的缺氧，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶或流式细胞术。Hypoxyprobe™-1 CY 7试剂盒在甲醛固定的石蜡包埋的大鼠肿瘤组织中提供了强烈的免疫染色和非常低的背景。
数量：a. Hypoxyprobe™-1 CY 7试剂盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe™-1（匹莫尼达唑盐酸盐）。通常，动物研究中使用的剂量为每公斤体重60毫克。
b. 一个瓶（100毫克和200毫克试剂盒）或两个瓶（1000毫克试剂盒），含有200微升的稀释的CY 7染料偶联的IgG1大鼠单克隆抗匹莫尼达唑抗体（克隆11.23.22.R）。每个瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的CY 7染料-MAb1溶液，该溶液在含有1%牛血清白蛋白和0.09%叠氮钠的PBS中。CY 7染料-MAb1的最佳稀释度应由研究者确定，但发现1:50-100稀释度在大鼠肿瘤组织中能给出强烈的免疫荧光染色。特别为免疫荧光设计，CY 7染料-MAb1可以在荧光显微镜下或在流式细胞术和Western印迹应用中被可视化。通常免疫荧光的抗体稀释度比免疫过氧化物酶检测系统中使用的要低。
不提供：用于免疫组织化学分析的标准试剂。
储存：a. 将Hypoxyprobe™-1固体存放在室温下避光处。（也可以存放在2-8摄氏度的暗处）。
b. 将CY 7染料-MAb存放在2-8摄氏度的暗处。不要冷冻。
Pimonidazole HCl的制备方法：
Pimonidazole HCl（盐酸匹莫硝唑）是一种水溶性化合物，通常以粉末形式存在。在实验室中，Pimonidazole HCl可以通过以下步骤制备工作溶液：
1. 溶解：将Pimonidazole HCl溶解在生理盐水或PBS中，推荐的浓度为116 mg/mL（即400毫摩尔）。可以使用超声波助溶来提高溶解度。
2. 储存：溶解后的Pimonidazole HCl应在避光条件下储存，最佳温度为2-8°C，避免冷冻以防止降解。
使用指南与注意事项：
1. 给药方式：Pimonidazole HCl通常通过静脉注射、腹腔注射或口服摄入的方式给药。推荐剂量为每公斤体重60 mg。例如，对于一只25克的小鼠，剂量为1.5 mg。
2. 组织收获：在给药后15至90分钟内收获感兴趣的组织。此时，Pimonidazole HCl会在缺氧细胞中形成稳定的加合物。
3. 免疫检测：使用特异性抗体检测Pimonidazole HCl的加合物，可以通过免疫荧光、免疫组化或Western blotting等方法进行。
注意事项
Pimonidazole HCl在体内的血浆半衰期约为25分钟，使用时需考虑这一点以确保有效性。
在使用过程中，需遵循适当的安全措施，避免与皮肤和眼睛接触。
Hypoxyprobe™-1 CY 7 Kit的储存：
Hypoxyprobe™-1固体：在室温下避光保存，或在2-8°C的条件下避光保存。
CY 7染料-MAb：在2-8°C的条件下避光保存，切勿冷冻。
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Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit，高特异性，优良的荧光性能
Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit是一种专门用于检测细胞和组织中缺氧状态的先进生物医学研究工具。该试剂盒通过结合ATTO 596荧光染料和特异性抗体，使研究人员能够在多种实验条件下高效地标记和观察缺氧细胞。
艾美捷Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit：
货号：HPB-HP13-1000Kit
描述：适合于免疫荧光，免疫组化和流式检测，针对的探针抗体可选择不带标记/带标记
特点：Pimonidazole HCl；缺氧标志物，（Hypoxia maker）；Chemicon Inc，派诺硝唑，低氧探针，缺氧探针，乏氧探针
保存建议：2-8℃下保存/试剂盒内成分按说明书指示
Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit主要特点包括：
1. 高特异性：试剂盒中的Pimonidazole能够在缺氧细胞中被还原酶激活，并与细胞内的巯基化合物形成稳定的加合物，实现对缺氧细胞的特异性标记。
2. 优良的荧光性能：ATTO 596染料具有高荧光强度和良好的光稳定性，提供清晰的成像效果，适用于免疫荧光和流式细胞术等多种检测方法。
3. 低背景干扰：在福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本中，该试剂盒提供强烈的免疫染色效果，背景极低，有助于提高检测的准确性。
Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit应用领域：
肿瘤研究：通过检测肿瘤微环境中的缺氧状态，研究人员能够分析缺氧对肿瘤细胞增殖、耐药性及转移能力的影响。
心血管疾病：评估心肌缺血等心血管疾病中的缺氧水平，为临床干预提供重要依据。
神经科学：在神经退行性疾病研究中，检测神经细胞的缺氧状态，探索缺氧对神经元功能的影响。
使用指南：
使用Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit时，研究者需将Pimonidazole以适当剂量给予实验动物或细胞，然后通过免疫染色等方法检测Pimonidazole与细胞内巯基化合物形成的加合物。试剂盒中的抗体能够特异性地识别这些加合物，从而实现对缺氧状态的准确评估。
储存条件：
Hypoxyprobe™-1固体：在室温下避光保存，或在2-8°C的条件下避光保存。
CY 7染料-MAb：在2-8°C的条件下避光保存，切勿冷冻。
Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit为研究缺氧环境对生物体的影响提供了一种强有力的工具。其高特异性、高灵敏度和多应用性的特点，使其成为生物医学研究中不可或缺的试剂之一。随着对缺氧生物学的深入研究，Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit将继续在多个领域发挥重要作用。
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Hypoxyprobe-Pacific Blue Kit详细检测方案
Hypoxyprobe-Pacific Blue Kit 的详细描述：
Hypoxyprobe-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称为匹莫尼达唑盐酸盐，分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116毫克/毫升）；在324纳米处的紫外吸收（在0.9%生理盐水中的消光系数为7020）。其游离碱基，匹莫尼达唑，分子量为254.3，pKa值为8.7，辛醇水分配系数为8.5。有关Hypoxyprobe-1的作用机制、常见问题解答（FAQ）和应用，请访问www.hypoxyprobe.com。固体Hypoxyprobe-1在室温下避光存放两年，并且在4摄氏度的0.9%生理盐水（100克/升）中存放4.5年，未检测到降解（UV和HPLC分析）。 匹莫尼达唑在缺氧细胞中被还原激活，并与蛋白质、肽和氨基酸中的硫醇（巯基）基团形成稳定的加合物。太平洋蓝染料-MAb1与这些加合物结合，允许通过免疫化学方法检测它们。
太平洋蓝染料-MAb1是一种染料偶联的大鼠IgG1单克隆抗体（MAb克隆4.3.11.3），在含有1%牛血清白蛋白和0.09%叠氮钠的PBS中，以0.5毫克/毫升的浓度供应作为稳定剂。感兴趣的组织可以通过冷冻固定切片或甲醛固定的石蜡包埋切片的免疫组织化学研究，或者在组织解离后的流式细胞术进行研究。 注意：太平洋蓝染料-MAb1与匹莫尼达唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但在免疫组织化学处理过程中，肽和氨基酸加合物被冲洗掉，因此免疫组织化学缺氧检测依赖于缺氧组织中匹莫尼达唑的蛋白质加合物。
艾美捷Hypoxyprobe-Pacific Blue Kit：
货号：HPB-HP15-100Kit
应用：用于检测细胞和组织缺氧的免疫化学方法，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶或流式细胞术。这种Hypoxyprobe-1太平洋蓝试剂盒在甲醛固定的石蜡包埋的大鼠肿瘤组织中提供了强烈的免疫染色和非常低的背景。
数量：a. Hypoxyprobe-1太平洋蓝试剂盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe-1（匹莫尼达唑盐酸盐）。通常，动物研究中使用的剂量为每公斤体重60毫克。
b. 一个瓶（100毫克和200毫克试剂盒）或两个瓶（1000毫克试剂盒），含有200微升的稀释的太平洋蓝染料偶联的IgG1大鼠单克隆抗匹莫尼达唑抗体（克隆11.23.22.R）。每个瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的太平洋蓝染料-MAb1溶液，该溶液在含有1%牛血清白蛋白和0.09%叠氮钠的PBS中。太平洋蓝染料-MAb1的最佳稀释度应由研究者确定，但发现1:50-100稀释度在大鼠肿瘤组织中能给出强烈的免疫荧光染色。特别为免疫荧光设计，太平洋蓝染料-MAb1可以在荧光显微镜下或在流式细胞术和Western印迹应用中被可视化。通常免疫荧光的抗体稀释度比免疫过氧化物酶检测系统中使用的要低。
不提供：用于免疫组织化学分析的标准试剂。
储存：a. 将Hypoxyprobe-1固体存放在室温下避光处。（也可以存放在2-8摄氏度的暗处）。
b. 将太平洋蓝染料-MAb存放在2-8摄氏度的暗处。不要冷冻。
Hypoxyprobe-ATTO 596 Kit检测说明：
对正常或肿瘤组织缺氧的研究始于静脉输注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe-1（匹莫尼达唑盐酸盐）溶液，剂量为每公斤体重60毫克。对于一只25克的大鼠，这相当于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中使用高达400毫克/公斤的剂量，未观察到毒性或组织缺氧的变化，但60毫克/公斤可以在最低成本下获得良好的免疫染色。 Hypoxyprobe-1在生理盐水中的溶解度为116毫克/毫升，因此可以使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe-1。注射或摄取后，Hypoxyprobe-1分布到所有组织，包括大脑，但它只与那些氧浓度低于14微摩尔的细胞中的含硫蛋白质形成加合物——相当于在37摄氏度下的部分压力pO2 = 10毫米汞柱。除了肿瘤，正常的组织如肝脏、肾脏和皮肤也包含在pO2 = 10毫米汞柱或以下的细胞。这些正常组织结合Hypoxyprobe-1。小鼠中Hypoxyprobe-1的血浆半衰期大约为25分钟。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的大鼠组织可以在施用Hypoxyprobe-1后60分钟或更长时间收获。在收获时组织中的Hypoxyprobe-1将在组织缺氧时被结合，但与组织在60分钟或更长时间实验中暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe-1的量非常小，因此由于残留的Hypoxyprobe-1引起的任何非特异性结合是不可检测的。 除了动物研究，Hypoxyprobe试剂盒也可用于组织培养中的细胞。通常，细胞悬浮液在缺氧条件下与100到200微摩尔的Hypoxyprobe-1一起孵化1到2小时。细胞通过细胞旋转收获，固定并用太平洋蓝MAb-1免疫染色。
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Hypoxyprobe-CY 9 Kit流式细胞术检测方案及注意事项说明
Hypoxyprobe-CY 9 Kit是一种专为检测细胞和组织中缺氧状态而设计的免疫化学试剂盒。该试剂盒利用Pimonidazole HCl作为缺氧标记物，通过与缺氧细胞中的巯基化合物形成加合物，再利用CY 9标记的单克隆抗体进行检测，从而实现对缺氧细胞的特异性和高灵敏度标记。
艾美捷Hypoxyprobe-CY 9 Kit（HPB-HP14-1000Kit）主要特性：
1. 高特异性：Hypoxyprobe-CY 9 Kit能够实现对缺氧细胞的特异性标记，确保研究结果的准确性。
2. 高灵敏度：试剂盒中的抗体能够高灵敏度地检测到缺氧细胞中的加合物，即使在低氧水平下也能准确捕捉变化。
3. 多应用性：该试剂盒适用于多种检测方法，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶染色、西方印迹和流式细胞术，为不同实验设计提供了灵活性。
4. 操作简便：试剂盒提供了一套完整的检测方案，简化了实验操作流程。
应用领域：
Hypoxyprobe-CY 9 Kit在多个研究领域具有广泛的应用：
肿瘤学研究：通过检测肿瘤微环境中的缺氧状态，帮助研究者理解肿瘤生长和转移的机制。
神经科学研究：在脑损伤和神经退行性疾病中，检测脑组织的缺氧情况，为疾病机理提供重要信息。
心血管疾病研究：评估心肌缺血等心血管疾病中的缺氧水平，为治疗策略提供依据。
细胞培养研究：在体外细胞培养条件下，研究缺氧对细胞功能和代谢的影响。
使用Hypoxyprobe-CY 9 Kit进行流式细胞术检测的步骤：
准备细胞样本：首先，将目的细胞培养至适当密度，然后根据实验设计，对细胞进行缺氧处理。
给予Pimonidazole HCl：将Pimonidazole HCl以适当的剂量（通常为每公斤体重60毫克）给予实验动物或直接作用于细胞培养。
收获细胞：在给药后的一定时间（通常为15-90分钟）后，收获感兴趣的细胞。
细胞固定和通透化：根据需要，可能要对细胞进行固定和通透化处理，以便于抗体进入细胞内部。
染色：使用CY 9标记的抗Pimonidazole单克隆抗体对细胞进行染色。根据试剂盒说明，可能需要对抗体进行稀释（通常稀释比例为1:50-100）。
流式细胞术检测：将染色后的细胞通过流式细胞仪进行检测。设置适当的电压和滤光片，以检测CY 9的荧光信号。
数据分析：使用流式细胞仪软件对收集到的数据进行分析，确定缺氧细胞的比例和强度。
注意事项：
确保在整个实验过程中避光处理，以防止荧光淬灭。
根据实验的具体需求，可能需要调整抗体的稀释比例，以达到最佳的检测效果。
Hypoxyprobe-CY 9 Kit中的抗体已经与CY 9荧光染料结合，因此不需要额外的二抗。
试剂盒中的Pimonidazole HCl需要在2-8°C下保存，而CY 9标记的抗体则需要在4°C下避光保存，切勿冷冻。
https://www.amyjet.com/products/HPB-HP14-1000Kit.shtml