Chondrex来自鸡蛋清的低内毒素卵清蛋白,确保产品的安全性和可靠性
低内毒素卵清蛋白是一种从鸡蛋清中提取的优质蛋白,因其低内毒素含量而备受关注。传统的卵清蛋白在生产和提取过程中,可能会受到细菌污染,导致内毒素水平较高,而低内毒素卵清蛋白通过特定的提纯工艺,显著降低了内毒素的存在,确保了产品的安全性和可靠性。
这种蛋白质富含氨基酸,尤其是必需氨基酸,具有良好的营养价值和生物利用率。低内毒素卵清蛋白常用于食品、保健品及营养补充剂的生产,为消费者提供高品质的蛋白来源。同时,它在运动营养、免疫调节等领域也展现出广阔的应用前景。
此外,低内毒素卵清蛋白具有良好的功能特性,包括乳化、泡沫和凝胶形成能力。这使其在食品工业中被广泛应用于蛋白质补充、食品加工和功能性食品的开发中。随着人们对健康和安全食品需求的提升,低内毒素卵清蛋白的市场前景愈加广阔。
艾美捷Chondrex来自鸡蛋清的低内毒素卵清蛋白,10mg:
货号:3022
应用:作为过敏原用于实验动物中的过敏疾病研究或体外实验。这种低内毒素的卵白蛋白适用于气道高反应性(AHR)的研究。它还可以作为载体蛋白与肽和其他小分子结合,用作免疫原。
数量:10 mg
溶解度:20 mg/ml
形式:冻干粉末
内毒素水平:<1 EU/mg
分子量:45 kDa
纯度:通过凝胶电泳检测纯度>98%
存储:在4°C阴暗处保存,或在缓冲液中重构后存储于-20°C。
稳定性:有效期为1年。
Chondrex-来自鸡蛋清的低内毒素卵清蛋白文献参考:
J. Bortolatto, E. Borducchi, D. Rodriguez, A. Keller, E. Faquim-Mauro, et al., Toll-like receptor
4 agonists adsorbed to aluminium hydroxide adjuvant attenuate ovalbumin-specific allergic
airway disease: role of MyD88 adaptor molecule and interleukin-12/interferon-gamma axis. Clin
Exp Allergy 38, 1668-79 (2008).
H. Hoymann, M. Muller, and A. Krug. Improving models of allergic asthma by using
endotoxinfree ovalbumin in mice and rats: Effects on early allergic response, airway
hyperresponsiveness and inflammation. Am J Respir Crit Care Med, 183(A2870) (2011)
J. Watanabe, Y. Miyazaki, G. Zimmerman, K. Albertine, T. McIntyre, Endotoxin contamination
of ovalbumin suppresses murine immunologic responses and development of airway hyperreactivity. J Biol Chem 278, 42361-8 (2003).
Chondrex 致力于开发和生产高纯度胶原蛋白、抗胶原蛋白单克隆抗体和多种ELISA试剂盒等产品,为研究人员提供研究类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)发病机制和筛选潜在治疗方法所需的工具。艾美捷科技是Chondrex的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Chondrex-new.shtml
Chondrex小鼠抗花生粗提取物IgE抗体2G11G7的WB分析
小鼠抗Ara h3 IgE单克隆抗体,克隆株2G11G7,未偶联。
图1.非还原条件下花生提取物和2G11G7酮的Westem Blot分析
M: 分子标记,1:花生提取物(CBB染色),3:2G1G7(Westem印迹)
艾美捷Chondrex小鼠抗花生粗提取物IgE抗体2G11G7:
货号:3070
应用:适用于体内研究和体外研究(ELISA和Western Blot)。
数量:3毫克。
形式:冻干粉末。
来源:小鼠。
反应性:对花生过敏原Ara h3有反应。
免疫原:粗花生提取物。
纯度:通过离子交换色谱法纯化。
亚型:小鼠IgE。
使用说明:
体内研究:请参考Chondrex, Inc.的“小鼠抗粗花生提取物IgE单克隆抗体诱导和研究过敏疾病”协议,以诱导小鼠的过敏反应。
体外研究:将抗体稀释于含有2%异种血清的缓冲液中,如正常山羊血清,以防止在ELISA中发生非特异性反应。
储存条件:-20°C。
稳定性:1年。
注意事项:
图1. SDS-PAGE和Western Blot数据。
Chondrex-小鼠抗花生粗提取物IgE抗体2G11G7文献参考:
T. Waritani, S. Lomax, D. Cutler, J. Chang, Development and evaluation of mouse anti-Ara h 1
and Ara h 3 IgE monoclonal antibodies for advancing peanut allergy research. MethodsX 11,
102470 (2023).
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Chondrex阳离子牛血清白蛋白(cBSA)操作流程及注意事项
膜性肾病(MN)是一种由肾小球上皮下颗粒状免疫复合物沉积引起的疾病肾脏基底膜(GBM)。MN在人类中的发病机制尚不清楚;然而,据信它与其他疾病,如系统性红斑狼疮、肝炎和癌症。作为人类MN疾病模型,免疫复合物每天静脉注射2mg阳离子牛血清白蛋白(cBSA)可诱导大鼠肾小球肾炎(ICGN)持续4周(1)。带正电的cBSA已被证明能有效诱导ICGN,因为它能够穿透并结合在肾脏的GBM中发现的固定带负电荷的位点(2-4)。此外,通过注射cBSA建立的ICGN动物模型已经在狗、猫、兔子和小鼠中成功建立。
Chondrex 提供了用于在近交系Balb/c和远交系ICR小鼠中诱导ICGN的cBSA(Cat#9058)。小鼠尿白蛋白检测ELISA试剂盒(Cat#3012)是评估ICGN严重程度的最有效方法,因为ICGN的典型症状是蛋白尿。或者BPB蛋白检测试剂盒(目录号6026)用于评估蛋白尿,肌酐检测试剂盒蛋白尿或蛋白尿量。
艾美捷Chondrex阳离子牛血清白蛋白(cBSA):
货号:9058
描述:化学修饰的阳离子牛血清白蛋白。
应用:用作免疫复合物诱导的肾小球肾炎(ICGN)在Balb/c和ICR小鼠中的免疫抗原。
数量:20 mg(0.05M磷酸盐缓冲盐水中2 mg/ml,10 ml)。
形式:溶液。
Chondrex阳离子牛血清白蛋白(cBSA)操作流程:
诱导小鼠ICGN的步骤:
动物选择:选择Balb/c和ICR小鼠(雄性或雌性,7-8周或更大)。对ICGN的敏感性可能因小鼠品系、动物供应商或实验室设施而异。
乳剂制备:使用2 mg/ml的阳离子BSA与等体积的完全弗洛因佐剂(Cat # 7008 - M. Tuberculosis,1 mg/ml)制成乳剂。
免疫接种:在小鼠尾部皮下注射0.1 ml乳剂(阳离子BSA:0.1 mg)。
肾炎诱导:在免疫接种后两周,静脉注射0.2 ml(400 µg)阳离子BSA(2 mg/ml)溶液。每隔一天重复静脉注射,总共进行五次。
注意事项:
阳离子BSA的静脉注射可能导致过敏反应,这对小鼠可能致命。为避免此问题,使用缓慢静脉注射(1 ml/min)或降低阳离子BSA的剂量和浓度。将阳离子BSA用PBS稀释至适当浓度。第一次注射使用50-100 µg(0.5-1 ml的0.1 mg/ml阳离子BSA),第二次至第五次注射使用400 µg(1 ml的0.4 mg/ml阳离子BSA)。
肾炎评估:
通过测定在16小时尿液收集期间排泄的白蛋白量(白蛋白尿)来评估肾炎的严重程度。推荐使用Chondrex Inc.的鼠白蛋白检测ELISA试剂盒(Cat # 3012)。
存储:在-20°C黑暗处保存。
稳定性:可保存1年。
样本数据 – ICGN在ICR小鼠中的研究
1、研究使用了7-8周龄的ICR小鼠(雄性,Harlan,USA)。
2、在第0天,小鼠通过尾部皮下注射了100 µg的cBSA,乳化剂为CFA(商品编号7008,结核分枝杆菌,浓度为1 mg/ml)。
3、在第14、16、18、20和22天,小鼠静脉注射了400 µg(0.2 ml,浓度为2 mg/ml)的cBSA。
4、使用代谢笼在16小时的尿液收集期间评估尿蛋白。
在小鼠中,在16小时的尿液收集期内,白蛋白含量超过1毫克的白蛋白被认为是蛋白尿。小鼠#1537死亡在第14天第一次静脉注射cBSA后。小鼠#1536在第一次尿液采集后第24天死亡。小鼠#1535病情严重蛋白尿,在第32天达到峰值。
文献参考:
1. T. Yamamoto, I. Kihara, T. Morita, T. Oite, Bovine serum albumin (BSA) nephritis in rats. I. The Experimental Model. Acta Pathol Jpn 28, 859-66 (1978).
2. T. Yamamoto, S. Miyazaki, K. Kawasaki, E. Yaoita, I. Kihara, Rat Bovine Serum Albumin (BSA) Nephritis. VI. The Influence of Chemically Altered Antigen. Clin Exp Immunol 65, 51-6 (1986).
3. W. Border, E. Kamil, H. Ward, A. Cohen, Antigenic changes as a determinant of immune complex localization in the rat glomerulus. Lab Invest 45, 442-9 (1981)
4. T. Oite, S. Batsford, M. Mihatsch, H. Takamiya, A. Vogt, Quantitative Studies of in Situ Immune Complex Glomerulonephritis in the Rat Induced by Planted, Cationized Antigen. J Exp Med 155, 460-74 (1982).
Chondrex 致力于开发和生产高纯度胶原蛋白、抗胶原蛋白单克隆抗体和多种ELISA试剂盒等产品,为研究人员提供研究类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)发病机制和筛选潜在治疗方法所需的工具。艾美捷科技是Chondrex的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
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Chondrex小鼠白蛋白检测试剂盒解决方案
蛋白尿是人类和实验动物中肾炎的常见症状,也是评估疾病严重性的一个重要标志,无论肾炎的类型如何。此外,蛋白尿是通过测定在16小时内排泄的总蛋白质(如球蛋白和白蛋白)量来确定的,这比单纯测定尿液中蛋白质浓度更为准确,因为不同动物之间的尿液体积变化较大。浑浊度法是一种常用的尿蛋白检测方法,因为它准确、简单且经济。
然而,小鼠肾脏会漏出血清成分,如胆红素,导致尿蛋白水平被高估,因此蛋白尿并不适合用作评估肾炎严重性的标志。另一方面,白蛋白是一种相对分子量较小的血清蛋白,通常是肾功能开始受损时尿液中首先出现的蛋白,更适合用于评估小鼠模型中肾炎的严重性。
Chondrex推出的小鼠尿白蛋白检测ELISA试剂盒旨在采用夹心免疫检测法,在4小时内专门测定40个尿样中的小鼠白蛋白。在小鼠肾炎模型中,如免疫复合物诱导的肾小球肾炎(ICGN),如果16小时尿液收集中的总白蛋白含量超过1毫克,则认为小鼠具有肾炎。值得注意的是,尿液中的白蛋白水平可以根据肾炎的严重程度,在16小时尿液收集中达到50-200毫克。
艾美捷Chondrex小鼠白蛋白检测试剂盒:
货号:3012
格式:96孔ELISA板,带可拆卸条
检测类型:夹心ELISA
检测时间:4小时
标准范围:100 - 1.6 ng/ml
样本数量:每板最多40个(重复)样本
样本类型:尿液和血清
推荐样本稀释倍数:至少1:500
显色剂:OPD(在490 nm读取)
储存条件:-20°C保存12个月
验证数据:实验内变异系数(1.6-1.9%)、实验间变异系数(1.7-2.6%)、加标试验(89-98%)
Chondrex小鼠白蛋白检测试剂盒清单:
小鼠白蛋白标准(30121)
数量:1瓶
规格:100 ng,冻干
存储:-20°C
捕获抗体(30122)
(山羊抗小鼠白蛋白多克隆抗体)
数量:1瓶
规格:50 µl,1 mg/ml
存储:-20°C
检测抗体(30123)
(生物素化山羊抗小鼠白蛋白多克隆抗体)
数量:1瓶
规格:冻干
存储:-20°C
溶液A 涂层缓冲液(9052)
数量:1瓶
规格:10 ml
存储:-20°C
溶液C 样品/标准/二级抗体稀释缓冲液(30106)
数量:1瓶
规格:50 ml
存储:-20°C
溶液D 铂维生素过氧化物酶稀释缓冲液(9055)
数量:1瓶
规格:20 ml
存储:-20°C
铂维生素过氧化物酶(9029)
数量:2瓶
规格:50 µl/瓶
存储:-20°C
OPD(90021)
数量:2瓶
规格:冻干
存储:-20°C
染色剂稀释缓冲液(90022)
数量:1瓶
规格:20 ml
存储:-20°C
停止溶液 2N硫酸(9016)
数量:1瓶
规格:10 ml
存储:-20°C
洗涤缓冲液,20X(9005)
数量:1瓶
规格:50 ml
存储:-20°C
96孔ELISA板
数量:1个
规格:8孔条 x 12
存储:-20°C
计算结果:
对空白、标准品和测试样品的重复OD值取平均。
从第1步中平均的OD值中减去“空白”(B)值。
将标准品的OD值绘制与小鼠白蛋白浓度(ng/ml)的关系图。使用对数/对数图将数据线性化。图1展示了一个代表性实验,其中标准范围为1.6 - 100 ng/ml。
通过回归分析可以计算测试样品中小鼠白蛋白的ng/ml值。
图1 - 小鼠白蛋白检测ELISA试剂盒的典型标准曲线
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Alpha Diagnostic International人β-防御素2 ELISA试剂盒结果计算方案
防御素是阳离子抗菌肽,由多种细胞类型(如白细胞、上皮细胞和树突细胞)产生,在哺乳动物的先天免疫反应中发挥重要作用。人类已描述两类防御素:α-防御素和β-防御素,其分子量范围为3.5至4.5 kDa,由三对分子内二硫键稳定,不同的成熟肽中二硫键的排列顺序也各不相同。目前,已有六种α-防御素(也称为人类中性粒细胞肽,HNP1-6)和六种β-防御素(HBD1-6)被研究。这些防御素均显示出对细菌、真菌和包膜病毒的广谱体外抗菌活性,这种活性在体内保护宿主免受病原体侵害方面非常重要。
研究者还探讨了防御素诱导释放与炎症和适应性免疫相关的细胞因子和趋化因子的能力,从而在先天免疫与适应性免疫之间提供了一种调节作用。相关研究已经测量了血清、唾液、乳汁、羊水以及肺部和宫颈阴道冲洗液中的防御素,以及血液、肺、皮肤、肠道、肌肉、软骨和肾脏等组织细胞培养基中的防御素。
Alpha Diagnostics开发了一种免疫测定法,用于检测和定量人类样本中的β-防御素2,以用于先天免疫研究。该试剂盒适用于多种样本类型,并经过适当的线性和回收验证。
Alpha Diagnostic International人β防御素2(hBD-2)ELISA试剂盒是一种夹心ELISA试剂盒用于定量BD-2人细胞培养物和适当合格的来自血清、唾液或其他组织液的样本。仅供研究使用(RUO);不用于治疗或诊断使用。
艾美捷Alpha Diagnostic International 人β-防御素-2(BD-2)ELISA试剂盒,定量,96次检测(ADI-100-250-BD2)检测原理:
人β-防御素2 ELISA试剂盒是基于样本中人类β-防御素2与两种抗体的结合。一个抗体固定在微孔板上,另一个抗体则与生物素偶联,随后与链霉亲和素过氧化物酶(HRP)偶联物结合。在洗涤步骤后,添加显色底物,通过HRP对TMB底物的酶促反应生成颜色,这种颜色的深浅与样本中BD-2的含量成正比。然后添加终止溶液以停止反应,并使用ELISA微孔板读数仪在450nm处测量吸光度。样本中BD-2的浓度是通过指定浓度的纯化重组人BD-2标准曲线计算得出的。
结果计算:
结果可以使用任何免疫检测软件包进行计算。推荐使用四参数曲线拟合。如果没有可用的软件,可以按以下步骤确定BD-2的浓度:
1、计算重复样品的平均光密度(OD)。
2、在图纸上将标准品的平均OD(y轴)与BD-2的浓度(pg/ml,x轴)绘制成图。通过这些点绘制最佳拟合曲线以构建标准曲线。逐点构建是最常见和可靠的方法。
3、可以通过从标准曲线插值法确定未知样品和对照的BD-2浓度。
4、将获得的样品值乘以稀释因子。
5、产生的信号高于200 pg/ml标准的样品应进一步稀释并重新检测。
典型结果:
Alpha Diagnostic International(ADI)致力于开发、制造和供应新型诊断和质量控制试剂及检测试剂盒,用于人类和动物的基础生物学和疾病研究。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特约合作代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/ADI.shtml
Alpha Diagnostic International-Quillaja saponaria,疫苗佐剂,(欧盟GMP级)>95%
佐剂的作用:
佐剂通过刺激免疫系统使其对疫苗产生更强烈的反应,从而增强对特定疾病的免疫力。佐剂通过模拟特定的进化上保守分子(称为PAMPs)来实现这一目标,这些分子包括脂质体、脂多糖(LPS)、抗原的分子笼、细菌细胞壁成分(如鞭毛蛋白)以及内吞的核酸,如双链RNA(dsRNA)、单链DNA(ssDNA)和未甲基化的CpG二核苷酸含量的DNA(ODNs)。天然蛋白质如卵清蛋白或OVA肽以及钥孔海螺血青蛋白(KLH)也被研究,不仅作为载体蛋白,还作为佐剂。由于免疫系统已进化为识别这些特定的抗原成分,佐剂与疫苗的结合可以显著增强对抗原的先天免疫反应,通过模拟自然感染来增强树突细胞(DCs)、淋巴细胞和巨噬细胞的活性。此外,由于佐剂的毒性被削弱,它们对宿主生物几乎没有独立威胁。
在用于人类疫苗时,基于氢氧化铝(Alum)的佐剂(氢氧化铝或Alhydrogel;铝磷酸盐或Adjuphos)是唯一获得FDA批准的佐剂。采用Alum制备的疫苗成分被称为“吸附疫苗”。每种盐作为佐剂的有效性取决于特定疫苗的特性以及制造商的制备方法。
并非所有疫苗都含有铝盐,因为可能不需要佐剂、预期不会增加所需的免疫反应,或可能导致免疫反应的不平衡。例如,灭活脊髓灰质炎病毒(IPV/IPOL)疫苗、麻疹、腮腺炎和风疹疫苗(MMR/MMRII/MMRV)、水痘疫苗(Varivax/Proquad/MMRV)、脑膜炎球菌结合疫苗(MCV4/Menomune/Menactra)以及流感疫苗(Fluzone/Flulaval/Flumist/Fluvirin等)都不含铝盐。
QS-21是一种纯化的植物提取物,能够增强免疫系统对疫苗抗原的反应能力。它来源于原产于智利的皂角树(Quillaja saponaria)。该提取物含有水溶性的三萜糖苷化合物,属于植物化合物中的皂苷类。QS-21 Stimulon可以激活免疫系统的关键组成部分,包括细胞免疫(T细胞介导)和体液免疫(抗体介导)。这两种免疫系统的成分通常是身体自我修复或保护所必需的。Stimlon在近15年的研发过程中参与了超过120项临床试验,涉及约50,000名患者。QS-21 Stimulon目前是Agenus、GSK和J&J的20个临床开发项目中的关键佐剂成分。
艾美捷Alpha Diagnostic International Quillaja saponaria,疫苗佐剂,(欧盟GMP级)>95%:
货号:ADI-AV-4010-1
形式与储存:以粉末或PBS(pH 7.4,5 mg/ml)形式供应,具体浓度见瓶上的批次规格。溶液应存放在-20°C。粉末可溶解在水中,必要时可进行无菌过滤。
储存与稳定性:粉末在室温下运输,溶液则使用冷包运输。存放于-20°C,长期存储可达6个月,避免反复冻融循环。
推荐剂量:
小鼠:10-20 µg
豚鼠/大鼠:25-50 µg
兔子/猴子:50-100 µg
注意:佐剂的剂量也受抗原性质的影响,因此可以测试不同的剂量。
相关产品:
AV-4000-PK-1 Saponins vaccine adjuvant Combo Pak-1 (contains 1mg of QS21,100 mg of Vet-SAP and 1 g of Saponin).
AV-4010-1 QS-21 (Quillaja saponaria), Vaccine adjuvant, (EU GMP grade) >95%
AV-4010-10 QS-21 (Quillaja saponaria), Vaccine adjuvant, (EU GMP grade) >95%
AV-4020-100 Vet-SAP Vaccine adjuvant, (EU GMP grade)>95%;
AV-4020-1000 Vet-SAP Vaccine adjuvant, (EU GMP grade)>95%;
AV-4030-10 Saponin (Quillaja bark) pure, (sapogenin 25-35%);
AV-4040-1 (Quil-A) Vaccine adjuvant, (EU GMP grade) >95%;
AV-4040-5 (Quil-A) Vaccine adjuvant, (EU GMP grade) >95%;
Alpha Diagnostic International Quillaja saponaria,疫苗佐剂,(欧盟GMP级)>95%文献参考:
Vogel and Powell, (1995) Pharmaceutical biotechnology. 6; 141-228. Ragupathi G (2011) Expert Rev Vaccines. 10(4):463-70.
Alpha Diagnostic International(ADI)致力于开发、制造和供应新型诊断和质量控制试剂及检测试剂盒,用于人类和动物的基础生物学和疾病研究。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特约合作代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
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Alpha Diagnostic International-小鼠抗水痘-带状疱疹病毒(VZV/水痘)IgG ELISA试剂盒,96次检测方案
Alpha Diagnostic International的水痘带状疱疹IgG抗体ELISA检测试剂盒旨在检测小鼠血清和血浆中抗水痘带状疱疹的IgG类抗体。此套件适用于仅用于体外研究。
艾美捷Alpha Diagnostic International 小鼠抗水痘-带状疱疹病毒(VZV/水痘)IgG ELISA试剂盒,96次检测:
货号:ADI-520-230-MVG
正常小鼠样本:
未接种样本在1:100稀释时的检测值低于切割值。
精密度:
组内精密度:<4.55%
组间精密度:<6.81%
特异性和物种反应性:
该试剂盒检测小鼠抗水痘带状疱疹病毒(VZV)的IgG亚型,与小鼠的IgA或IgM无显著反应。该试剂盒不适用于其他物种。ADI有单独的人类抗VZV Ig ELISA试剂盒。
测试的局限性:
本检测仅供研究使用,不得用于诊断程序。所有血清、血浆或缓冲液均已根据公认的方法检测HBsAg、HIV和HCV,并结果为阴性。然而,仍需采取防护措施,如佩戴乳胶手套。血清和试剂溅出物需用消毒溶液(如5%次氯酸钠)擦拭并妥善处置。
在进行测试之前,所有试剂必须在室温(20至25°C)下放置。 pipetting之前,所有试剂应通过轻微倾斜或摆动彻底混合,避免剧烈摇动产生泡沫。
在加样时应保持恒定间隔,以确保微孔板的所有孔具有相同的条件。为避免交叉污染,应使用不同的可丢弃吸头。不得使用来自不同试剂盒批次的试剂,且不得相互混合。所有试剂必须在有效期内使用。
检测有效性标准:
为了使实验运行被视为有效,必须严格遵循这些使用说明,并且必须满足以下标准:
底物空白:吸光度值 < 0.100
阴性对照:吸光度值 < 0.200 且 < 截止值
截止对照:吸光度值 0.150 – 1.300
阳性对照:吸光度值 > 截止值
标本采集与处理:
主要可以使用血清或血浆(柠檬酸盐、肝素)进行测定。血清通过静脉穿刺无菌抽取,经过凝固和离心后与血液分离。血清或血浆样品可在冰箱(2-8°C)中保存最多48小时,若需更长时间存储,应保持在-20°C。样品不应反复冻融。乳糜、溶血或细菌污染的样品可能导致假阳性或假阴性结果。
在测试中,样品(非标准品)必须用现成的样品稀释液按1:100的比例稀释(例如,5 µL血清 + 500 µL样品稀释液,充分混合)。不要稀释标准品。
接种鼠样品:
虽然我们建议以1:100的比例测试鼠样品,但也可以考虑使用1:20或更高的稀释度,以区分正常与接种过的动物。
稀释和储存说明:
将洗涤缓冲液(20X)以1:19的比例用蒸馏水稀释(例如:10 mL洗涤缓冲液 + 190 mL蒸馏水)。稀释后的缓冲液应在4℃下储存,保存时间为1个月。(如果在冷藏过程中出现结晶,浓缩液应在37℃下加热15分钟。所有试剂在使用前必须保持在室温下。)
储存与稳定性:
微孔板和所有其他试剂在2-8℃下稳定,直至标签上标注的有效期。整个试剂盒在适当储存条件下的稳定性通常为从发货日期起12个月。未使用的标准物质应在2-8℃下储存,或者分成小份冻存,稳定性可达3个月。
Alpha Diagnostic International小鼠抗水痘-带状疱疹病毒(VZV/水痘)IgG ELISA试剂盒,96次检测原理:
ADI的水痘带状疱疹IgG抗体检测试剂盒基于酶免疫检测(EIA)原理。水痘带状疱疹抗原固定在微孔板的表面。将稀释后的未知样品吸取到微孔板的孔中,血清中的IgG抗体与固定的水痘带状疱疹抗原结合。在室温下孵育一个小时后,用稀释的洗涤溶液冲洗板,以去除未结合的物质。然后添加现成的抗小鼠IgG过氧化物酶偶联物,并孵育30分钟。经过进一步的洗涤步骤后,吸取底物(TMB)溶液并孵育15分钟,使孔中生成蓝色染料。通过添加终止溶液终止颜色反应,使颜色从蓝色变为黄色。最终生成的染料在450 nm波长下进行分光光度法测量。IgG抗体的浓度与颜色强度成正比。
Alpha Diagnostic International(ADI)致力于开发、制造和供应新型诊断和质量控制试剂及检测试剂盒,用于人类和动物的基础生物学和疾病研究。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特约合作代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/ADI.shtml
Alpha Diagnostic International小鼠抗PEG IgM,96次检测,定量特异性活性检测方案
Alpha Diagnostic International小鼠抗聚乙二醇IgM ELISA试剂盒是一种适用于检测和定量血清中PEG特异性抗体活性,或等离子体。仅供研究使用(RUO),不用于诊断,治愈或预防疾病。
艾美捷Alpha Diagnostic International 小鼠抗PEG IgM,96次检测,定量(PEG-040)检测原理:
Anti-PEG ELISA试剂盒基于样品中抗体与固定在微孔板上的PEG抗原的结合。结合的抗体通过抗物种抗体-HRP偶联物进行检测。经过洗涤步骤后,加入显色底物(TMB),颜色的显现与样品中存在的抗PEG抗体的数量成正比。随后加入终止溶液以终止反应,并使用ELISA读数仪在450nm处测量吸光度。样品中抗体的存在相对于抗PEG标准品进行判断。
Alpha Diagnostic International 小鼠抗PEG IgM,96次检测,定量检测程序:
所有步骤均在室温下进行。 在每次添加试剂后,轻轻拍打板子以混合孔内液体,然后再开始孵育。
1.第一次孵育 [100 µl – 60分钟;洗涤4次]
向预定的孔中各添加100 µl的标定液、样品和对照品。
轻轻拍打板子以混合试剂,孵育60分钟。
洗涤孔4次,并用新纸巾轻轻拍干。可以选择使用自动洗板机。洗涤不当可能导致信号虚高和重复性差。
2.第二次孵育 [100 µl – 30分钟;洗涤5次]
向每个孔中添加100 µl稀释后的抗小鼠IgM HRP。
孵育30分钟。
按步骤2的方式洗涤孔5次。
3.底物孵育 [100 µl – 15分钟]
向每个孔中添加100 µl TMB底物。孔内液体将开始变为蓝色。
在黑暗中孵育15分钟,例如,将其放在抽屉或衣橱中。
注意:如果您的微孔板读数仪无法读取光密度(OD)高于2.0,请缩短孵育时间,或在405-410 nm波长下读取OD(结果有效)。
4. 停止步骤 [停止:100 µl]
向每个孔中添加100 µl停止溶液。
轻轻拍打以混合。酶反应将停止;孔内液体将变为黄色。
5. 吸光度读取
使用任何市售的微孔板读数仪,能够在450 nm波长下读取。使用适合获取OD读数的程序,如果可用,还可以进行数据计算。
在加入停止溶液后的30分钟内,使用单一波长在450 nm下读取整板的吸光度。如果可用,可以设置程序在630 nm下减去OD以归一化孔背景。
结果解释:
示例:小鼠血清/血浆 IgM
对一组未免疫的实验小鼠进行抗PEG IgM(1:100稀释)的检测。阈值指数使用1 U/ml的校准液进行计算。
结果:
抗PEG IgM:在1:100稀释下,所有血清结果均为阴性(低于1.0阈值)。
注意事项:
阳性结果可能是由于之前接触PEG,或可能是先天免疫库的一部分。
当阳性指数超过5.0时,使用稀释曲线计算滴度是一种更准确的定量方法。
可通过改变样本稀释度来调整检测的敏感性:a)增加稀释度(例如,1:200),将边缘阳性结果降低为阴性;b)减少稀释度(例如,1:50),将边缘样本转为阳性。对于后者,阴性值可能会增加,因此应考虑使用已知阴性样本开发阳性指数(见下文),或使用内部对照。
方法:阳性指数
实验样本值可以相对于对照样本或非免疫样本的值进行表达,通过计算阳性指数。以下是一种典型的方法:
计算对照/非免疫样本的净光密度(OD)均值加上2个标准差(SD)= 阳性指数。
将每个样本的净OD值除以阳性指数。值大于1.0表示阳性抗体活性;小于1.0则为抗体阴性。
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