蛋白质相互作用：MolBoolean Mouse/Rabbit蛋白质检测方案
MolBoolean Mouse/Rabbit（货号：ATL-MolB00001 ） 是一种用于组织和细胞中原位蛋白质邻近分析的试剂盒。MolBoolean 分析利用专有的寡核苷酸设置，能够同时检测两种目标蛋白质（蛋白 A、蛋白 B 和相互作用蛋白 AB）的游离和相互作用（~40 nm 邻近）组分。
MolBoolean 小鼠/兔应使用用户选择的一抗（在小鼠和兔中产生）进行。MolBoolean 依靠抗小鼠和抗兔次级接近探针和滚环放大 （RCA） 作为放大信号的手段。
在 MolBoolean 分析中执行的一系列分子步骤将信息整合到扩增产物中，表明抗体靶标与相互作用蛋白的结合。该信息通过检测报告基因的结合转换为荧光信号，从而可以在常规荧光显微镜上进行可视化。提供图像分析软件来分割和区分荧光信号，从而能够相对定量样品中两个分析蛋白质靶标的游离组分与相互作用组分。
MolBoolean 试剂盒包含15个独立的试管。试剂盒体积为4.8 ml，可在细胞中进行约120次检测(40 μl/assay)，在组织中进行约60次检测(80 μl/assay)。
艾美捷MolBoolean Mouse/Rabbit（#ATL-MolB00001）成分：
TUBE NUMBER TUBE ID
1 Blocker(4x)
2 Diluent(1x)*
3 Probe A(80x)
4 Probe B(80x)
5 Circle(40x)
6 Additive(40x)
7 Buffer A(10x)
8 Nickase enzyme(80x)
9 Buffer B(8x)
10 Tag oligos(40x)
11 Ligase enzyme(80x)
12 Polymerase enzyme(40x)
13 Buffer C(5x)
14 Detection oligos(40x)
15 Buffer D(10x)
*使用前，将Tween-20加入Diluent (1x) (tube 2) 至终浓度为0.1% (v/v) 制备“完全稀释剂”
在10ml TBS中加入0.2 ml Tween-20，制备2% (v/v)的Tween-20中间溶液。用玻璃烧杯和磁力搅拌器搅拌10分钟。
用Diluent (1x) (e.g. 25 ul of 2 % Tween-20 intermediate to 475 ul Diluent)稀释得到最终的完全稀释液。将完全稀释液保存在4°C，并在1周内使用。
为什么选择MolBoolean ?
通过同时检测自由和相互作用的蛋白质，完成蛋白质相互作用的空间定量分析。
通过相互作用数据归一化到总目标蛋白水平的精确定量。
无需工程蛋白表达的生物学相关数据。
通过滚动圈放大，荧光信号增加1000倍，允许检测和定量低丰度蛋白质。
适应不同的研究需求。
通用试剂盒，可用于客户选择的一抗。
在细胞和组织中验证。
MolBoolean Mouse/Rabbit检测步骤：
MolBoolean 检测包括七个步骤来检测蛋白质是相互作用还是单独存在
1.Proximity Probe Binding：探针与一抗结合。
2.探针臂杂交：探针臂与 DNA 环寡核苷酸杂交。
3.DNA 切口：在 DNA 中引入缺口以进行进一步处理。
4.标签寡核苷酸掺入：将标记的寡核苷酸掺入 DNA 中。
5.DNA 连接：DNA 末端的连接。
6.Rolling Circle Amplification：扩增环状 DNA 以增强信号。
7.检测：结果的可视化和分析。
试剂盒运输及储存：
MolBoolean 小鼠/兔试剂盒可在固定细胞和FFPE组织样本中进行MolBoolean分析。试剂盒体积，4.8 ml总工作体积，足以在细胞中进行大约120次检测(40ul/assay)，在组织中进行60次检测(80ul/assay)。40?l的测定体积应足以覆盖1 cm2的样品面积。相应地调整以匹配您的实验设置。
MolBoolean试剂盒包含15个独立的试剂盒管，这个工具箱是用干冰运输的。收到后，将所有试剂保存在-20°C。Diluent (1x) 也可以在4°C下保存长达6个月。
关于MolBoolean:
克服原位聚乳酸限制
与原位聚乳酸等传统方法相比，MolBoolean 具有多种优势，可解决数据解释中的关键空白，并提供更多信息
数据规范化
与MolBoolean，蛋白质相互作用的数量可以归一化为目标蛋白质的总数。这是至关重要的，因为靶蛋白水平可以受到各种因素的影响，如细胞治疗或疾病状态。通过提供标准化的测量，MolBoolean 允许更准确的样本之间的比较。
相互作用和非相互作用的检测
分数:与传统方法不同，MolBoolean?可以检测细胞和组织中两种蛋白靶标的非相互作用内源性组分及相互作用。更全面的检测能力增加了可以从实验中提取的空间信息，使研究人员能够确定蛋白质相互作用的位置。
一致的分子过程
滚动循环产品(rcp)源于自由或相互作用的蛋白质是通过相同的分子过程步骤产生的。这确保了均匀的信号效率，减少了数据分析过程中的不确定性。
总体而言，MolBoolean 为检测蛋白质相互作用提供了更可靠、更全面的解决方案，解决了数据解释中的关键空白，并为研究人员提供了更准确的细胞和组织中分子相互作用的见解。
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Ultra超敏-小鼠白蛋白试剂盒的操作要点与数据分析
ALB检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量小鼠的ALB生物样本。如果ELISA要在预期用途之外使用，用户可能需要优化所述使用。
艾美捷小鼠白蛋白ELISA试剂盒（E-90AL）检测原理：
双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理在图1中表示。在这种测定中，样品中存在的白蛋白（ALB）与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗ALB抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗ALB抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的ALB形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中ALB的浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中ALB浓度的量度。测试样品中ALB的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。
未提供的所需材料：
精密移液器（2微升至100微升），用于制备和分发稀释液
试管
喷雾瓶或微孔板洗涤器/抽吸器
蒸馏水或去离子水
微孔板读取器
用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿
样本收集用的离心机
血浆收集用的抗凝剂
计时器
小鼠白蛋白ELISA试剂盒样本收集和处理：
所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。处理和处置时遵循通用预防措施。
如果血液样本出现凝固、严重溶血、脂血，或样本完整性受到质疑，请做记录并谨慎解释结果。
以下列出的样本收集和储存条件仅供参考。尚未评估样本稳定性。
血清样本 - 应通过静脉穿刺收集血液。血凝块形成后通过离心分离血清。取出血清并立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
尿液样本 - 使用无菌或干净的尿液收集器收集中段尿液。离心以去除细胞碎片。立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。
样本稀释：
测定要求在测试前对每个测试样本进行稀释。每次进行测定时，所有样本都应以双份进行测定。推荐的稀释只是建议。稀释应基于未知样本的预期浓度，使稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本水平，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样本进行系列稀释。
血清样本 - 推荐的起始稀释为1/500,000。要准备1/500,000的样本稀释，将2微升的样本转移到1998微升的1倍稀释液中。这给出1/1,000的稀释。接下来，将1/1,000的样本通过转移2微升到998微升的1倍稀释液中进行稀释。这产生1/500,000的稀释。每个阶段都要彻底混合。
血浆样本 - 推荐的起始稀释为1/500,000。要准备1/500,000的样本稀释，将2微升的样本转移到1998微升的1倍稀释液中。这给出1/1,000的稀释。接下来，将1/1,000的样本通过转移2微升到998微升的1倍稀释液中进行稀释。这产生1/500,000的稀释。每个阶段都要彻底混合。
尿液样本 - 推荐的起始稀释为1/500。要准备1/500的样本稀释，将2微升的样本转移到998微升的1倍稀释液中。这给出1/500的稀释。彻底混合。
小鼠白蛋白ELISA试剂盒试剂准备：
使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。
稀释液浓缩液 - 提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）稀释1/5。
洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）稀释1/20。浓缩液在储存温度较低时可能会形成晶体。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。
酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条中添加10微升酶-抗体结合物到990微升1倍稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释，并避光保存。均匀但轻柔地混合。避免起泡。
预涂覆ELISA微孔板 - 按提供状态使用。打开箔袋，从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有的条和孔，放回袋中并重新密封，连同干燥剂。
小鼠ALB校准液 - 根据批次特定的分析证书进行准备。
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Svar Life Science补体系统筛选试剂盒性能特征和样本收集方案
Wieslab®补体系统筛查试剂盒是一种酶免疫测定法，用于定性测定人血清中功能性的经典、MBL和替代补体途径，结果不得用于临床诊断或患者管理。
补体系统在慢性、自身免疫和感染性疾病中发挥着重要作用。补体激活有三条途径（图1），即经典途径、替代途径和最近发现的MBL途径。
艾美捷Svar Life Science补体P因子功能检测试剂盒（#COMPL300）测定原理：
Wieslab®补体测定结合了补体激活的溶血测定原理和使用针对补体激活产生的新抗原的标记抗体。产生的新抗原量与补体途径的功能活性成正比。微孔板条的孔涂有经典途径、MBL途径或替代途径的特定激活剂。待测血清稀释在含有特定阻断剂的稀释液中，以确保仅激活相应的途径。在将稀释的待测血清孵育于孔中时，补体通过特定涂层被激活。
然后对孔进行洗涤，并使用针对MAC形成期间表达的新抗原的特定碱性磷酸酶标记抗体检测C5b-9。在进一步洗涤后，通过与碱性磷酸酶底物溶液孵育获得特定抗体的检测。补体激活的程度与颜色强度相关，以吸光度（光密度OD）表示。
警告和注意事项：
仅限研究使用。不得用于诊断程序。
试剂盒中用于制备对照的人类血清成分已使用FDA批准的方法检测了人类免疫缺陷病毒1&2（HIV 1&2）、丙型肝炎（HCV）以及乙型肝炎表面抗原的存在，并呈阴性。由于没有检测方法可以完全保证HIV、HCV、乙型肝炎病毒或其他传染性病原体的缺失，因此应将样本和基于人类的试剂作为能够传播传染性病原体进行处理。
疾病控制和预防中心和国立卫生研究院建议在生物安全等级2下处理潜在的传染性病原体。
所有溶液均含有ProClin 300作为防腐剂。切勿用嘴移液或让试剂或患者样本接触皮肤。含有ProClin的试剂可能会引起刺激。避免与皮肤和眼睛接触。如果发生接触，请用大量水冲洗。
该试剂盒中包含的所有危险成分的材料安全数据表可根据Svar Life Science的请求提供。
Svar Life Science补体系统筛选试剂盒样本收集：
应使用无菌静脉穿刺技术收集血液样本，并使用标准程序获取血清。建议最少收集5毫升全血。让血液在血清管中于室温（20-25°C）下凝固60-65分钟。离心血样并将无细胞血清转移到干净的试管中。必须正确处理血清以防止体外补体激活。血清应冷冻在-70°C或更低温度的密封管中以延长储存时间或使用干冰运输。样本不应冻融超过一次。避免使用出现黄疸、脂血和溶血的血清。不可使用热灭活血清。不可使用血浆。NCCLS为储存血液标本提供了建议（《血液标本的处理和加工程序标准操作程序》，H18A，1990年）。
Svar Life Science补体系统筛选试剂盒试剂盒组分和试剂储存：
一个带有可分离孔的框架（4x8x3），密封在带有干燥剂的箔包装中。4条蓝色经典途径（CP）条，涂有人类IgM。4条绿色甘露聚糖结合凝集素（MBL）途径（MP）条，涂有甘露聚糖。4条无色替代途径（AP）条，涂有脂多糖。
10毫升经典途径稀释液（Dil CP），标为蓝色。
10毫升甘露聚糖结合凝集素途径稀释液（Dil MP），标为绿色。
10毫升替代途径稀释液（Dil AP），标为红色。
13毫升含有碱性磷酸酶标记的C5b-9抗体的结合物（蓝色）。
13毫升即用底物溶液。
30毫升30倍浓缩的洗涤液。
0.2毫升阴性对照（NC），含有人类血清（需按待测血清样本进行稀释）。
0.2毫升阳性对照（PC），含有冻干人类血清，见下文“阳性对照的重悬”。 试剂盒中的所有试剂除洗涤液和对照外均已备好。试剂应储存在2-8°C，除阳性对照外。阳性对照应储存在-20°C。
Svar Life Science补体系统筛选试剂盒性能特征：
在三种测定中测试了120份来自献血者的血清，计算了正常参考范围。值以阳性对照的百分比表示。见图1和表1。在CP测定中，没有一个献血者低于40%。在MP测定中，23个样本低于10%，它们有MBL值（在单独的测定中确定）低于500纳克/毫升，在AP测定中，没有一个献血者低于10%。请注意，在正常人群中，真正的MP缺乏，即活性<10%，可能以20-30%的频率出现。
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Svar Life Science高效补体P因子功能检测试剂盒操作指南
该产品的目的是确定测试样品中因子P的功能。这个根据校准品（人血清）设置定性确定功能100%功能。
该产品仅供经过培训的实验室人员使用。不得使用结果用于临床诊断或患者管理。仅供研究使用。
艾美捷Svar Life Science补体P因子功能检测试剂盒（#COMPL FPF RUO）内容：
一个带有微孔板（12x8）的框架，涂有抗因子P单克隆抗体，密封在带有干燥袋的箔包装中。
1.5毫升阴性对照（NC），绿色，绿色盖子。准备使用。
3.0毫升校准液，200纳克/毫升。准备使用。
32毫升稀释液（Dil），红色。准备使用。
30毫升洗涤液，30倍浓缩。
冻干激活剂。
15毫升激活剂稀释液。准备使用。
3.0毫升抑制剂。准备使用。
含有针对C3b的HRP标记抗体的7.5毫升结合物，蓝色，棕色瓶。准备使用。
15毫升底物TMB，棕色瓶。准备使用。
15毫升终止液（0.5M H2SO4）。准备使用。
需要但未提供的物料或设备
带有450纳米和620纳米滤光片的微孔板读取器
轨道摇床（200转/分钟）
带有一次性吸头的精密移液器
96孔板或条的密封膜
96孔板或条的洗涤器
吸水纸
试剂和样本稀释用的容器
冰块或相等的板冷却设备
计时器
补体P因子功能检测试剂盒测定原理：
补体因子P功能测定是一种酶联免疫吸附测定（ELISA），它结合了功能性补体活性测定的原理和使用针对沉积的补体蛋白的标记抗体。沉积的补体蛋白量与样本中因子P的功能活性成正比。
一般化验信息：
稳定性和储存：
所有试剂应储存在2-8°C，激活剂除外。在2-8°C储存时，稀释后的洗涤液在试剂盒有效期内稳定。
冻干激活剂应储存在-20°C或更低温度。重悬后的激活剂可以在-70°C下冷冻并解冻一次。
样本收集和准备：
应使用无菌静脉穿刺技术收集全血样本，并使用标准程序获取血清或EDTA血浆。建议每个样本至少抽取5毫升全血。离心血样并将无细胞血清或血浆转移到干净的试管中。
离心后的血清或EDTA血浆可保存在4°C。较长时间储存时，血清和血浆样本应冷冻在-20°C或更低温度。建议在分析前不要将测试样本冻融超过两次。
每个实验室应确定测试样本储存条件的可接受性，因为这可能会因前处理因素而异。
在进行补体P功能测定分析之前，先确定每个测试样本中因子P的浓度（见第10节“测定程序”第5步）。对于这种因子P浓度的测定，可以使用Svar Life Sciences AB的因子P定量测定。
补体P因子功能检测试剂盒文献参考：
(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.
(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.
(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.
https://www.amyjet.com/products/COMPL%20FPF%20RUO.shtml
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Svar Life Science补体P因子定量检测试剂盒结果评估方案
该产品的目的是定量测试样本中人类因子P的含量。该产品仅供经过培训的实验室人员使用。不得使用结果用于临床诊断或患者管理。仅供研究使用。
艾美捷Svar Life Science补体P因子定量检测试剂盒（#COMPL FPQ RUO）内容：
一个带有微孔板（12x8）的框架，涂有抗因子P单克隆抗体，密封在带有干燥袋的箔包装中。
3.0毫升装有校准液（200纳克/毫升）的小瓶。准备使用。校准液必须根据9.1.2节的说明进一步稀释。
1.5毫升低浓度对照（LC），绿色，绿色盖子。准备使用。
1.5毫升高浓度对照（HC），红色，红色盖子。准备使用。
2个32毫升稀释液（Dil），红色。准备使用。
30毫升洗涤液，30倍浓缩。
15毫升含有针对因子P的HRP标记抗体的结合物，蓝色，棕色瓶。准备使用。
15毫升底物TMB，棕色瓶。准备使用。
15毫升终止液（0.5M H2SO4）。准备使用。
需要但未提供的物料或设备
带有450纳米和620纳米滤光片的微孔板读取器
轨道摇床（除非微孔板读取器包含此功能）
带有一次性吸头的精密移液器
96孔板或条的洗涤器
吸水纸
试剂和样本稀释用的容器
计时器
补体P因子定量检测试剂盒测定原理：
P因子定量测定是一种用于定量人P因子的夹心ELISA例如，血清或血浆样本。该测定基于固定化96孔板中的抗体，捕获孵育的测试样本中存在的因子P在盘子里。用标记有以下物质的二抗检测结合因子PHRP。HRP随后催化底物的切割，诱导颜色与测试样品中因子P浓度相关的变化。
稳定性和储存：
试剂应储存在2-8°C。在2-8°C下储存时，稀释的洗涤液为在试剂盒有效期之前保持稳定。
Svar Life Science补体P因子定量检测试剂盒结果评估：
对于每个数据点，从450纳米波长减去620纳米参考波长，并计算所有重复样本的平均吸光度值。
通过绘制六个校准品的吸光度与浓度（0纳克/毫升、12.5纳克/毫升、25纳克/毫升、50纳克/毫升、100纳克/毫升和200纳克/毫升）的校准曲线。
在这个应用说明（图2）的示例中使用了4参数曲线拟合，但用户可以选择不同的曲线拟合方式。根据校准曲线读取未知样本的浓度。
注意：为了计算样本中因子P的浓度，必须根据上述协议进行稀释补偿，即200倍。如果选择了不同的样本稀释度，应相应进行补偿。
图:校准器曲线示例
请注意：上图显示了一个标准曲线的示例，不应用于实际样品解释。
补体P因子定量检测试剂盒文献参考：
1.Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular
Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.
2.Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.
3.Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.
https://www.amyjet.com/products/COMPL%20FPQ%20RUO.shtml
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Svar Life Science补体C4d检测试剂盒检测原理&结果计算
C4d越来越被认为是潜在的生物标志物，尤其是在抗体可能导致组织损伤的情况下，例如系统性自身免疫疾病。C4d有潜力检测出面临抗体介导疾病后果风险的患者。此外，开发新的阻断补体激活的治疗药物，使得C4d成为识别和监测可能从这些药物中受益的患者的标志物（9）。基于线性新表位检测的补体测定已被报道相较于构象表位具有优势，因为它降低了假阳性的风险并提高了特异性（10）。该补体测定基于检测在激活后C4切割位点暴露的短线性C4d新表位。
补体C4d测定是一种酶联免疫吸附测定（ELISA），用于人血浆中C4d的半定量测定。
该产品供专业人士使用。结果不得用于临床诊断或患者管理。仅限研究使用。
艾美捷Svar Life Science补体C4d检测试剂盒（#COMPLC4dRUO）内容：
一个带有微孔板（12x8）的框架，涂有抗C4d-Neo单克隆抗体，密封在带有干燥袋的箔包装中。
1.5毫升低浓度对照（LC）。准备使用。
1.5毫升高浓度对照（HC）。准备使用。
2x30毫升稀释液（Dil），红色。准备使用。
15毫升含有针对C4d的HRP标记抗体的结合物。准备使用。
15毫升底物TMB。准备使用。
15毫升终止液（0.5M H2SO4）。准备使用。
30毫升洗涤液，30倍浓缩。
6x1.5毫升装有含有人重组C4d的校准液，0纳克/毫升、5纳克/毫升、25纳克/毫升、100纳克/毫升、200纳克/毫升和400纳克/毫升。准备使用。 请注意： 试剂盒中的所有试剂除洗涤液外均已备好。试剂应储存在2-8°C。不得将不同批次的成分混合。在2-8°C储存时，稀释后的洗涤液在试剂盒有效期内稳定。
补体C4d检测试剂盒测定的原理：
该装置是一种比色夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）。样本在测定稀释液中稀释，将100微升稀释样本转移到微孔板孔中，并在室温下孵育60分钟。在这第一次孵育期间，样本中的C4d被预涂在微孔板表面的抗C4d-Neo单克隆抗体捕获。洗涤去除未结合的物质后，向孔中添加第二种辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体，该抗体与C4d的两种等位基因变体（A和B）结合。孵育30分钟后再次洗涤孔，然后添加底物并孵育。30分钟后停止颜色发展，并在分光光度计中测量颜色。颜色与结合到孔中的C4d量成正比。通过与校准样本的颜色发展比较，确定C4d的量。
样本收集
应使用无菌静脉穿刺技术收集血液样本，并使用标准程序获取EDTA血浆。建议最少收集5毫升全血。离心血样并将无细胞血浆转移到干净的试管中。血浆必须正确处理以防止体外补体激活。
离心后的EDTA血浆可在4°C下保存最多8小时，并应在这段时间内完成分析。对于更长时间的储存，血浆应冷冻在-70°C或更低温度。样本不应冻融超过两次。
需要但未提供的物料或设备：
带有450nm和620nm滤光片的微孔板读取器
带有一次性吸头的精密移液器。
条带洗涤器、吸水纸、试管和计时器
补体C4d检测试剂盒结果计算：
从450纳米波长减去620纳米参考波长，并计算所有样本的平均吸光度值。通过绘制校准品的吸光度与浓度的校准曲线。六个校准品的值；0纳克/毫升、5纳克/毫升、25纳克/毫升、100纳克/毫升、200纳克/毫升和400纳克/毫升。本使用说明书（图1）中的示例使用了4参数曲线拟合。用户可以选择不同的曲线拟合方式。根据校准曲线读取未知样本的浓度。
注意：计算血浆样本中C4d的浓度时，必须根据上述协议进行稀释补偿，即50倍。如果选择了不同的样本稀释度，应相应进行补偿。
图1. 校准曲线示例
请注意：上图显示了半定量标准曲线的示例，不应用于实际受试者样本的解释。
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Svar Life Science末端补体复合物（TCC）检测试剂盒计算方法&文献参考
补体系统在各种病理条件下的组织水平上对炎症过程的发展和放大起着关键作用。在溶血性尿毒症综合症（HUS）（Noris 2012）、系统性红斑狼疮（SLE）（Porcel 1995，Mollnes 1999）和类风湿关节炎（RA）（Struglics 2016）等情况下，可以检测到TCC水平的升高。补体系统也可以通过人工表面激活，例如在血液透析或心肺旁路过程中，导致TCC水平的增加（Deppish 1990，Ovrum 1996）。TCC也非常适合用于研究医疗设备中生物材料引起的补体激活（Stang 2014）。
与其他补体激活产物一样，TCC可以通过使用特异性新表位的单克隆抗体进行测定。新表位在天然补体成分中是隐藏的，补体激活后会暴露出来（Mollnes 1985，Mollnes 1993）。
补体TCC是一种酶免疫测定法，用于人类EDTA血浆中可溶性终末补体复合物（sTCC，也称为TCC或sC5b-9）的半定量测定。该产品供专业人士使用。结果不得用于临床诊断或患者管理。仅限研究使用。
艾美捷Svar Life Science末端补体复合物（TCC）检测试剂盒（#COMPLTCCRUO）内容：
一个带有微孔板（12x8）的框架，涂有抗TCC单克隆抗体，密封在带有干燥剂的箔包装中。
1.5毫升低浓度对照（LC）。准备使用。
1.5毫升高浓度对照（HC）。准备使用。
2瓶x30毫升稀释液（Dil）。准备使用。
15毫升含有针对TCC的HRP标记抗体的结合物。准备使用。
15毫升底物TMB。准备使用。
15毫升终止液（0.5M H2SO4）。准备使用。
30毫升洗涤液，30倍浓缩。
6瓶x1.5毫升含有人纯化TCC的校准液，0纳克/毫升、10纳克/毫升、50纳克/毫升、100纳克/毫升、200纳克/毫升和400纳克/毫升。准备使用。
末端补体复合物（TCC）检测试剂盒检测原理：
该测定是一种比色夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）。样本在测定稀释液中稀释，将100微升稀释样本转移到微孔板孔中，并在室温下孵育60分钟。在这第一次孵育期间，样本中的TCC被预涂在微孔板表面的抗TCC单克隆抗体捕获。洗涤去除未结合的物质后，添加第二种辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体以检测结合到孔中的TCC。孵育30分钟后再次洗涤孔，然后添加底物并孵育。30分钟后停止颜色发展，并在分光光度计中测量颜色。颜色与结合到孔中的TCC量成正比。通过与校准样本的颜色发展比较，确定TCC的量。
末端补体复合物（TCC）检测试剂盒结果计算：
从450纳米波长减去参考波长，并计算所有样本的平均OD值。通过绘制校准品的OD与浓度的校准曲线。六个校准品的值分别为0纳克/毫升、10纳克/毫升、50纳克/毫升、100纳克/毫升、200纳克/毫升和400纳克/毫升。根据校准曲线读取未知样本的浓度。
注意：本使用说明书中的所有性能数据都是使用4参数曲线拟合计算的。用户可以选择不同的曲线拟合方式。建议每个实验室使用选定的曲线拟合建立参考范围。
注意：计算样本中TCC的浓度时，必须根据上述协议进行稀释补偿，即10倍。如果样本结果超出校准曲线，则建议进行更高稀释，并在计算样本中的浓度时考虑这一点。
图1。校准器曲线示例
请注意：上图显示了半定量标准曲线的示例，不应用于实际样品解释。
末端补体复合物（TCC）检测试剂盒文献参考：
Bergseth et al. Molecular Immunology 56 (2013) 232–239. An international serum standard for
application in assays to detect human complement activation products
Deppisch et al, Kidney Int. 1990 Feb;37(2):696-706. Fluid phase generation of terminal
complement complex as a novel index of bioincompatibility
Harboe et al, Adv Drug Deliv Rev. 2011 Sep 16;63(12):976-87. Advances in assay of
complement function and activation.
Mollnes et al. Scand. J, Immunol. 22, 197-202. 1985. Quantification of the Terminal
Complement Complex in Human Plasma by an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Based
on Monoclonal Antibodies against a Neoantigen of the Complex
https://www.amyjet.com/products/COMPLTCCRUO.shtml
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Svar Life Science环瓜氨酸肽(CCP) IgG抗体检测试剂盒解决方案
环瓜氨酸肽(CCP) IgG抗体检测试剂盒是一种酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定性环瓜氨酸肽（CCP）IgG抗体的半定量测定人血清。该检测方法用于检测单个血清样本中的抗体。结果该检测不得用于临床诊断或患者管理。分析应该是由训练有素的实验室专业人员执行。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷Svar Life Science环瓜氨酸肽(CCP) IgG抗体检测试剂盒（#RA-96Plus）内容：
1个密封的（96孔）涂有CCP肽的微孔板。准备使用。
5瓶含有校准液（人阳性血清池）（1.2毫升）。准备使用（蓝色）。
1瓶含有参考对照人血清（1.2毫升）。准备使用（蓝色）。
1瓶含有阳性对照人血清（1.2毫升）。准备使用（蓝色）。
1瓶含有阴性对照人血清（1.2毫升）。准备使用（蓝色）。
1瓶含有结合物溶液（与抗人IgG抗体结合的过氧化物酶）（15毫升）。准备使用（红色）。
1瓶含有底物溶液TMB（15毫升）。准备使用。
2瓶含有稀释液（35毫升）。准备使用（蓝色）。
1瓶含有终止液（15毫升）。准备使用。
2瓶含有洗涤液（35毫升）20倍浓缩。
环瓜氨酸肽(CCP) IgG抗体检测试剂盒检测原理：
抗CCP抗体试剂盒基于酶联免疫吸附测定（ELISA）方法。该测试使用涂有瓜氨酸化合成肽（抗原）的微孔板。将稀释后的血清样本施加到孔中并进行孵育。如果存在特异性抗体，它们将与孔中的抗原结合。洗涤去除未结合的物质，然后通过添加辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgG，检测与孔中结合的抗体，随后进行第二次洗涤步骤，并与底物孵育。反应抗体的存在将导致颜色的发展，这与结合抗体的数量成正比，并通过光度法测定。
注意事项：
终止液含有0.5M硫酸。不要让试剂接触到皮肤。
避免所有生物材料与皮肤和粘膜接触。
不要用嘴吸液。
对照和校准液含有人血清。尽管已对其进行了HIV 1+2、HCV、HbsAg和HIV-1 Ag的检测并确认为阴性，但必须将此材料视为潜在传染性的。-疾病控制和预防中心和国立卫生研究院建议在生物安全二级水平处理潜在的传染性病原体。
TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）吸入有毒，与皮肤接触和吞咽有害。处理底物时要小心。
不要使用过期的组分，不要将不同批次的组分混合使用。
每个孔最终用作光学比色皿。因此，不要触摸孔的下表面，防止损坏和污垢。
严格按照本协议操作将获得最佳结果。整个过程中要小心移液和洗涤，以保持精确度和准确性。
校准品、对照品和稀释液含有0.09%的叠氮钠。
有报道称叠氮钠可能与管道中的铅和铜反应形成爆炸性化合物。处置时用水冲洗排水管，以尽量减少金属叠氮化合物的积聚。 Svar Life Science应要求提供产品安全数据表。
环瓜氨酸肽(CCP) IgG抗体检测试剂盒结果解释：
半定量协议
从含有校准品、对照品和样本的孔的个别吸光度中减去孔A1和A2的平均吸光度值。五个校准品（重复的平均值）的吸光度值可以在线性y轴上手动绘制，与对数x轴上的单位相对应。校准曲线在25-2962 U/mL的范围内接近线性。抗体滴度以单位表示，使用校准血清通过读取校准曲线上样本的净平均吸光度对应的单位值来确定。或者，可以使用使用4参数曲线拟合的软件程序进行计算。
五个校准品（A - E）已被赋予3200 U/mL（A）、800 U/mL（B）、200 U/mL（C）、50 U/mL（D）和25 U/mL（E）的值。这些值由Svar Life Science任意选择，因为没有普遍认可的（国际）标准来表示抗CCP抗体的滴度。高于校准品A（3200 U/mL）的样本可以在更高的样本稀释度下重新测试。目前没有证据表明所获得的单位可以用作疾病严重程度的衡量标准。不同受试者的抗体可能有不同的亲和力，这意味着测量的是自身抗体的免疫反应活性而不是浓度。
校准曲线不能用于低于校准品E（25 U/mL）的吸光度值。值应报告为<25 U/mL。
定性协议：
从含有对照品和样本的孔的个别吸光度中减去孔A1和A2的平均吸光度值。
计算对照品和每个样本的吸光度（光密度）比率。
对照品或样本OD
https://www.amyjet.com/products/RA-96Plus.shtml