在生物制品、药品及医疗器械的生产过程中，热原与细菌内毒素的检测是确保产品安全放行的重要一环。美国食品药品监督管理局（FDA）通过一系列指导文件，如美国药典（USP）第<85>章“细菌内毒素检测”、USP第<161>章“输血和输液组件及类似医疗器械”，以及美国医疗器械促进协会（AAMI）ST72:2002/R2010《细菌内毒素——检测方法、常规监测和批量检测替代品》，为行业提供了详尽的检测建议和验收标准。
本文旨在基于这些指导文件，并补充了药典未涵盖的监管观点，以明确FDA对产品热原和细菌内毒素检测提交与维护的看法。今日首发第一期，诚邀您一探究竟！
Q1：对于中控测试和成品放行，如何建立取样计划?
针对制剂的CGMP法规和医疗器械质量体系法规，要求研发控制措施时必须具备充分的科学性和制定恰当的取样计划。
尽管USP通则<85>未直接涉及取样计划的详细信息，但AAMI ST72指南中提供了相关指导。制药公司应该增加一个取样计划作为应用文件的一部分。在制定取样计划时，公司需全面考虑原辅材料、中间物料及成品中潜在的污染风险，并特别关注制造设计因素，如工艺一致性、中控保持时间对细菌内毒素水平的影响、细菌内毒素去除步骤的有效性，以及成品内毒素标准的设定。
此取样计划应被视为动态管理的一部分，初期应追求最大覆盖范围以确保充分控制。随着制造工艺的成熟和内控能力的增强，公司可适时调整取样计划以优化资源利用。在调整取样计划时，制药公司必须及时更新其法规文件，确保与现行法规要求保持一致。
对于药品和生物制品，取样计划的任何中间变更通常需作为年度报告的一部分进行提交。而对于医疗器械，则可能需采取30天通知的方式，以便监管机构及时了解变更情况并进行评估。
Q2：什么时候进行复验是合适的?
在测试过程中，若遇到冲突性结果，制药公司应首先参考USP通则<85>中关于凝胶法测试的解释部分，以获取关于复验的明确指导。根据通则<85>的特别说明，当测试在低于最大有效稀释倍数（MVD）时失败，应采取一个不超过MVD的更大稀释倍数来进行复验。
在进行复验时，实验室必须详细记录所有测试过程，包括失败的测试记录，以便后续分析和追溯。如果测试在MVD水平进行且出现超标结果（OOS），不能归因于测试错误，该批次应被视为不合格并予以拒收。
为确保测试过程的一致性和合规性，所有测试规程，包括上述提到的复验规程，都应以书面的标准操作规程（SOP）形式提前建立，并经过公司质量控制部门负责人的严格审查和批准。
Q3：样品的储存和处理是否重要?
重要。储存和处理步骤影响细菌内毒素检测的能力。企业应利用证明可检测细菌内毒素含量稳定性的实验室数据，制定用于细菌内毒素分析的样品储存和处理（包括产品混合）程序。规程应考虑到研究中使用的细菌内毒素来源，同时牢记纯化的细菌内毒素与本地细菌内毒素的反应可能不同。
Q4：在分析之前，用于内毒素分析的成品样品是否可以混合组成复合样品?
是的。除了一些例外情况（见下文），成品单位可以混合组成复合样品以进行细菌内毒素分析。复合样品可以是水溶性药品中一个生产批次中的整个单位或成品容器的部分等分样品（等容积）。对于小容量注射剂（≤100ml），只要按比例调整最大有效稀释倍数（MVD），样品混合通常是可接受的，因为将含有有害水平细菌内毒素的样品和含有较低的、较小危害水平内毒素的样品一起稀释具有降低数值的潜在可能性。
这种“调整后的MVD”是通过将单个样本计算的MVD除以要混合的样本总数而获得的。FDA建议在每个复合样品中不要混合多余3个样品，以保持开始、中间和最后产品容器的样品代表性。如果由于稀释不够，导致MVD降低，无法克服与产品有关的检测干扰，则应单独检测样品。
医疗器械成品也可以混合成一个复合样品进行细菌内毒素分析。对医疗器械的检测应采用ISO 10993-1和ISO 10993-12中所述的淋洗法/洗脱法进行测试，也适用于抑制和增强的目的。取样可根据特殊情况进行调整。在适当的稀释/富集后，可以获得一个生产批次成品的复合样品，这个混合的富集物应该保存在对稳定性有利的条件下，直到进行平行样测试。
FDA建议混合样品应该由对每个产品容器采用无菌工艺均等去除（最少30秒剧烈混合）后构成的复合样品。在这种情况下，假如混合样品发生OOS情况，原始单个容器才可以进行复验。
有些类型的产品不能混合。两个例子分别是，具有最初较低的MVD的药品（参见上文“调整后的MVD"的讨论）和混悬液产品，因为样品均分时，均性会面临显著差异。FDA也不建议对来自制造工艺的不同中控阶段中控样品进行混合，因为这些物料的均匀性很难确认。
随着对热原与细菌内毒素检测从取样到处理的全面剖析，相信您已对这一关键质量控制环节有了更为清晰的认识，今日首发的第一期仅是系列文章的序幕，更多精彩内容即将陆续呈现，诚邀您持续关注！
文章来源：https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/guidance-industry-pyrogen-and-endotoxins-testing-questions-and-answers
策划丨科德角国际·市场部
编辑丨Carrie·Tse
校对丨Zoe·Yin,Feng·He