ALPCO-大鼠超敏胰岛素ELISA检测原理和样本处理方案
ALPCO大鼠超敏胰岛素ELISA用于定量测定大鼠血清和血浆中的胰岛素。
该试剂盒设计用于5µL或25µL的样本量。适用于该测定的五个标准品和两个对照品将根据所使用的样本量来确定。
艾美捷大鼠超敏胰岛素ELISA（ALP-80-INSRTU-E01）检测原理：
ALPCO大鼠超敏胰岛素ELISA是一种夹心型免疫测定法。96孔微孔板涂有胰岛素特异性单克隆抗体。将标准品、对照品和样品加入到带有共轭物的微孔板孔中。然后将微孔板在微孔板振荡器上以700-900rpm的速度培养。第一次孵育完成后，用洗涤缓冲液洗涤孔并吸干。加入TMB底物，在微孔板振荡器上以700-900rpm的速度第二次孵育微孔板。一旦第二次孵育完成，加入停止溶液，用分光光度计在450nm处测量光密度（OD）。产生的颜色强度与样品中胰岛素的量成正比。
所需材料
1用于分配5、25、75和100微升的精密移液管（带一次性吸头）
2用于分配75和100微升的重复或多通道移液管
3用于试剂配制的容量瓶和移液管
4用于试剂配制的蒸馏水或去离子水
5微孔板洗涤器或洗涤瓶
6能够以700-900转每分钟速度振荡的微孔板振荡器
7带有450纳米滤光片的微孔板读数器
8用于样本制备的涡旋混合器
注意事项
1. 本试剂盒中包含的人血制品已检测是否含有HIV（人类免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）。这些病毒的检测方法不能保证病毒的绝对不存在；因此，所有试剂应被视为潜在传染性物质。处理和处置应符合所有适当的国家和地方法规，以处理潜在的生物危害物质。
2. 所有来自动物源的材料均为BSE（疯牛病）阴性。然而，所有材料应被视为潜在传染性物质。
3. 避免直接接触皮肤。
4. 本产品不得内服。
5. 使用本产品时，避免进食、饮水或吸烟。
6. 不要使用口吸移液管吸取任何试剂。
7. 试剂盒中的试剂是特定批次的，不得替换。
8. 不要使用超过有效期的试剂。
9. 不建议更改测试程序，可能会影响测试结果。
储存条件
试剂盒应储存在2-8°C的环境中。试剂盒在盒标签上的有效期前是稳定的。
样本处理
血清和血浆样本适用于本检测。不需要稀释或处理样本。然而，如果样本的胰岛素浓度高于最高标准，应将样本稀释在零标准中，并重复分析。为了减少潜在的时间相关的样本漂移，建议在使用前彻底涡旋每个样本，并在每次移液操作中不停顿。样本可以在分析前在2-8°C下储存24小时。对于更长时间，建议在<-20°C下储存。避免反复冻融循环。
典型标准曲线：
以下结果仅用于演示目的，不能代替测定获得的数据。每次分析运行和平板测试都必须绘制标准曲线
大鼠超敏胰岛素ELISA文献参考：
Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.
https://www.amyjet.com/products/ALP-80-INSRTU-E01.shtml
ALPCO-超灵敏胰岛素ELISA，高精度定量测定人血清和血浆中的胰岛素
ALPCO超敏胰岛素ELISA用于定量测定人血清和血浆中的胰岛素。
艾美捷超灵敏胰岛素ELISA（ALP-80-INSHUU-E01.1）检测原理：
ALPCO超敏胰岛素ELISA是一种夹心型免疫分析法。96孔微孔板被涂覆有特异性针对胰岛素的单克隆抗体。标准品、样本和对照品与检测抗体一起加入微孔板孔中。然后，微孔板在室温下放置在微孔板振荡器上，以700-900转每分钟的速度振荡。第一次孵育完成后，孔被洗涤缓冲液清洗并吸干。加入TMB底物，然后微孔板再次在室温下以700-900转每分钟的速度振荡。第二次孵育完成后，加入停止液，并通过分光光度计在450纳米处测量光密度（OD）。生成的颜色强度与样本中胰岛素的含量成正比。
注意事项
1. 本试剂盒中包含的人血制品已检测是否含有HIV（人类免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）。这些病毒的检测方法不能保证病毒的绝对不存在；因此，所有试剂应被视为潜在传染性物质。处理和处置应符合所有适当的国家和地方法规，以处理潜在的生物危害物质。
2. 所有来自动物源的材料均为BSE（疯牛病）阴性。然而，所有材料应被视为潜在传染性物质。
3. 避免直接接触皮肤。
4. 本产品不得内服。
5. 使用本产品时，避免进食、饮水或吸烟。
6. 不要使用口吸移液管吸取任何试剂。
7. 试剂盒中的试剂是特定批次的，不得替换。
8. 不要使用超过有效期的试剂。
9. 不建议更改测试程序，可能会影响测试结果。
试剂准备
所有试剂在使用前必须平衡至室温。洗涤缓冲液浓缩液需用20份蒸馏水稀释。例如，要准备工作强度洗涤缓冲液，用400毫升去离子水稀释20毫升洗涤缓冲液浓缩液（21倍）。工作强度洗涤缓冲液在室温（18-25°C）下稳定4周。
糖尿病控制（1级）以冻干形式提供。请参考每个试剂盒附带的分析证明，以获取重悬的适当体积的去离子水。用橡胶塞和瓶盖封闭小瓶，轻轻摇晃小瓶，并在使用前让其静置30分钟。小瓶中的内容物应完全溶解，无可见颗粒。重悬的对照品在2-8°C下储存1天是稳定的。如果需要，对照品可以分装后在-20°C下储存长达6个月。对照品不应反复冻融。
超灵敏胰岛素ELISA结果计算
根据标准品构建标准曲线。零标准品应作为空白，其平均值应从每个孔中减去。建议使用软件程序来计算标准曲线并确定样本的浓度。ALPCO超敏胰岛素ELISA是一种配体结合测定，其响应与分析物浓度呈S形关系。目前接受的此类曲线的参考模型使用4或5参数逻辑（pl）拟合，因为这些模型在更大范围内优化了准确性和精确性。尽管三次样条和其他模型是可接受的方法，但它们通常在范围的低端和高端显示出较低的内部检测准确性和精确性。
在以下示例中，使用了5参数逻辑曲线拟合来最大化低浓度样本的准确性和精确性。然而，由于个别实验室条件的影响，所有模型在可检测范围的最低端和最高端的准确性和精确性都是有限的。因此，在解释分析物响应变得非线性的结果时，应始终谨慎。
典型标准曲线：
以下结果仅用于演示目的，不能代替测定获得的数据。每次分析运行和平板测试都必须绘制标准曲线
预期值
ALPCO超敏胰岛素ELISA是参照世界卫生组织胰岛素第一国际参考制剂（IRP）66/304进行校准的。先前的研究确定正常的胰岛素范围为5 – 25 µIU/mL。建议每个实验室为各自的患者群体建立自己的正常范围。
单位换算
将人胰岛素从国际单位（IU）转换为克的换算关系为：1 IU人胰岛素 = 6 nmol = 34.8 µg胰岛素。
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ALPCO-瘦素ELISA试剂盒检测程序&示例数据
ALPCO-瘦素ELISA试剂盒用于酶免疫测定法定量测定人血清中的瘦素。此套件仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷瘦素ELISA试剂盒（ALP-11-LEPHU-E01）检测原理：
以下酶免疫测定的原理遵循典型的两步捕获或“夹心”类型测定。该测定利用两种高特异性的单克隆抗体：一种特异性针对瘦素的单克隆抗体被固定在微孔板，另一种针对瘦素不同表位的单克隆抗体与生物素结合。在第一步中，样本和标准品中存在的瘦素与固定抗体和生物素标记抗体结合，形成夹心复合物。通过洗涤步骤去除过量和未结合的生物素标记抗体。第二步中，添加链霉亲和素-辣根过氧化物酶（streptavidin-HRP），它特异性地与任何结合的生物素标记抗体结合。同样，通过洗涤步骤去除未结合的链霉亲和素-辣根过氧化物酶。接下来，添加酶底物（TMB），形成与存在瘦素量直接成比例的蓝色产物。通过添加停止液终止酶促反应，将蓝色变为黄色。在450纳米处的微孔板读数器上测量吸光度。使用一组标准品绘制标准曲线，从而可以直接读取样本和对照品中瘦素的含量。
瘦素ELISA试剂盒检测程序：
所有试剂在使用前必须达到室温。校准品、对照品和样本应以双份进行检测。一旦开始程序，所有步骤都应连续完成，不得中断。
1. 所有试剂盒组分达到室温后，轻轻倒置混合。
2. 准备1X工作浓度的链霉亲和素-HRP结合物和洗涤缓冲液。
3. 规划微孔板孔，用于校准品、对照品和样本。参见推荐检测布局。移除将不使用的条，并将其放回带有干燥剂的袋子中。重新密封带有未使用条的袋子，并放回冰箱。
4. 将20 μL每种校准品、对照品和血清样本分别准确吸入相应的孔中，每个孔双份。
5. 向每个孔中加入80 μL单克隆抗瘦素-生物素结合物。建议使用多通道移液管。
6. 在室温下，以3毫米直径的微孔板振荡器（大约600转每分钟）孵育1小时。
7. 使用自动微孔板洗涤器（首选）或按以下方法手动洗涤微孔板孔。自动：使用自动微孔板洗涤器，执行3周期洗涤，每孔使用300µL 1X工作洗涤缓冲液（3 x 300 µL）。一个周期包括吸取所有孔，然后用300 µL 1X工作洗涤缓冲液填充每个孔。在最后一次洗涤周期后，吸取所有孔，然后将微孔板牢固地敲击在吸水纸上以去除任何残留液体。手动：手动洗涤时，执行3周期洗涤，每孔使用300 µL 1X工作洗涤缓冲液（3 x 300 µL）。一个周期包括通过迅速清空孔中内容物到废液容器来吸取所有孔，然后使用多通道移液管向每个孔中加入300 µL 1X工作洗涤缓冲液。在最后一次洗涤周期后，通过迅速清空孔中内容物到废液容器来吸取所有孔，然后牢固地敲击微孔板以去除任何残留液体。
8. 向每个孔中加入100 μL 1X工作链霉亲和素-HRP结合物。建议使用多通道移液管。
9. 在室温下，以3毫米直径的微孔板振荡器（大约600转每分钟）孵育30分钟。
10. 按照步骤7同样的方式再次洗涤微孔板孔。
11. 在定时间隔向每个孔中加入100 µL TMB底物。建议使用多通道移液管。
12. 在室温下，以3毫米直径的微孔板振荡器（大约600转每分钟）孵育10-15分钟。
13. 在与步骤11相同的定时间隔向每个孔中加入50 μL停止液。建议使用多通道移液管。轻轻敲击微孔板框架以混合孔中的内容物。
14. 在加入停止液后20分钟内，使用设定为450纳米的吸光度微孔板读数器测量微孔板孔中的光密度（吸光度）。
典型表格数据：
仅提供示例数据。请勿用于计算结果。
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ALPCO-瘦素（小鼠/大鼠）ELISA，高亲和力，精准检测
ALPCO-瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一种酶免疫测定试剂盒，适用于定量测定小鼠和大鼠血清或血浆中的瘦素，用于科学目的。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷瘦素（小鼠/大鼠）ELISA（ALP-22-LEPMS-E01）检测原理：
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一种所谓的夹心法。它利用两种不同的特异性高亲和力多克隆抗体来治疗这种蛋白质。样本中的瘦素与固定化抗体定量结合。在接下来的步骤中，生物素化抗体又与瘦素结合。洗涤后，加入链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶偶联物，其对生物素具有高度特异性，并与抗体的生物素结合。随后，过氧化物酶催化酶反应，导致蓝色。蓝色的强度取决于样品的瘦素含量。通过加入终止溶液来终止反应，并通过测量吸收来量化颜色强度。
样本类型
适用于本检测的小鼠和大鼠血清以及肝素、EDTA或柠檬酸盐血浆是合适的样本类型。必须考虑抗凝剂可能导致的样本稀释。
样本收集
应避免溶血样本。
所需样本体积
根据样本的瘦素值，每个测试的最大样本体积为50微升。样本应根据预期值在使用前用稀释缓冲液（VP）进行稀释。
样本稳定性
未稀释的血清样本可在-20°C下冷冻保存，不会导致小鼠/大鼠瘦素的损失。尽管经过几次冻融循环后发现水平不受影响，但应避免反复冻融。稀释后的样本最多稳定2小时。
样本稀释
通常，1:5至1:20的样本稀释是合适的。根据物种、饲养和/或个别实验条件，这可能会有所不同。如果预期瘦素浓度非常低，可以使用1:2稀释的样本（甚至未稀释的样本）。然而，如果样本体积有限且瘦素浓度足够，可能需要更高倍数的稀释。
1使用稀释缓冲液VP进行1:5稀释。例如，对于一个双重测定，向PE/PP管中移液200微升稀释缓冲液VP（推荐使用多步移液管处理大量样本）；然后加入50微升样本（稀释1:5）。混合后，在检测中使用2 x 100微升的该稀释液。
2或者，向孔中移液80微升稀释缓冲液VP并加入20微升样本（混合均匀）。根据预期的瘦素值，可以使用稀释缓冲液VP进一步稀释样本。
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA检测程序
在进行检测时，空白对照、A-G标准品、KS对照品以及样本应尽可能快速地移液（例如，<15分钟）。为避免由于孵育时间差异导致的扭曲，抗体结合物AK、酶结合物EK以及随后的底物溶液S应以与样本相同的顺序和时间间隔加入到板中。停止液SL应以与底物溶液相同的顺序加入到板中。所有测定（空白对照、A-G标准品、KS对照品和样本）应以双份进行。为获得最佳结果，建议精确移液并严格遵守操作规程。
典型标准曲线示例：
以下数据仅供展示，不能替代在检测时生成的数据。
图1：标准曲线示例
图1中显示的标准曲线示例不能用于计算检测结果。每次进行检测时都必须建立标准曲线。
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA检测性能特点：
Leptin Mouse/Rat ELISA 使用两种高亲和力的多克隆抗体，这些抗体能够识别小鼠瘦素。标准品是由重组小鼠瘦素制备的。对大鼠瘦素的一定程度的交叉反应允许该试剂盒用于测量大鼠瘦素。研究发现，大鼠样本的稀释与小鼠样本一样呈线性。来自同一生产商的重组小鼠和大鼠瘦素的制备在该试剂盒的定量上进行了比较。基于生产商的名义声明，大鼠材料的相对效力被发现大约是小鼠材料的25%。使用大鼠样本工作时，建议用户对试剂盒的值进行校准。这种ELISA是参照WHO NIBSC小鼠瘦素标准97/626进行校准的（见上文）。与人类瘦素的交叉反应率为0.7%。
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA文献参考：
1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning of themouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.
2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma protein encodedby the obese gene. Science. 269:543-546.
3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.
4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBS Lett.379:55-59
https://www.amyjet.com/products/ALP-22-LEPMS-E01.shtml
ALPCO-瘦素ELISA（超灵敏）样本及标准曲线数据分析
在规律饮食周期的条件下，瘦素反映了脂肪组织的比例，显示出指数关系。这种构成性的瘦素合成被许多非激素和激素变量调节。在啮齿动物和人类中，刺激因素包括过度进食、胰岛素和糖皮质激素。已经显示了禁食、cAMP和β-3-肾上腺素能受体激动剂的抑制作用。从这些发现中可以清楚地看出，瘦素是各种代谢和内分泌反馈回路的一个组成部分。血清瘦素水平显示出适度的昼夜变化，夜间约凌晨2点左右达到峰值。此时的瘦素值比早晨或下午早些时候测量的水平高出约30至100%。这种变化，连同食物摄入的影响，需要在收集血样时考虑。这种ELISA试剂盒适用于测定人血清或血浆中的瘦素，以及其他生物流体（如唾液、尿液或母乳）和条件脂肪细胞培养介质中的瘦素，仅限于研究使用。
ALPCO-瘦素ELISA（超灵敏）：人血清、血浆、尿液、唾液和母乳中瘦素的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷瘦素ELISA（超灵敏）（ALP-22-LEPHUU-E01）检测原理：
瘦素ELISA（超灵敏）是一种使用两种特异性和高亲和力抗体的夹心测定法。样品中的瘦素与包被在微量滴定板上的第一抗体结合。在接下来的步骤中，第二特异性抗瘦素抗体依次与固定的瘦素结合。第二种抗体被生物素化，并与链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶结合物结合。在封闭底物反应中，颜色变化将根据样品中的瘦素水平定量催化。
样本：
这个试剂盒可以用于检测血清、血浆、尿液、唾液、母乳和脂肪细胞条件培养上清液中的瘦素。在相应的血清或EDTA血浆样本中，没有发现瘦素水平的显著偏差。如果使用市售的柠檬酸血浆管进行准备，样本将会被稀释，因此测得的瘦素值将会降低。用于血清制备的血液样本应按照标准化的静脉穿刺程序获得，必须避免溶血反应。如果营养状况正常，应在早晨或下午早些时候（下午2:00）收集人类血清和血浆样本。瘦素水平显示出昼夜变化，夜间约凌晨2:00达到峰值（37）。在收集血样时，需要考虑这种变化以及食物摄入的影响。所需的血清/血浆样本体积：25微升。血清/血浆样本的储存和稳定性：储存在紧闭的样本瓶中。在室温（20-25°C）下最多储存2天，在-20°C下至少储存2年。建议不超过五次冻融循环。在-20°C下储存样本2年以上对读数没有影响。应尽量减少样本的冷冻和解冻 - 5次冻融循环对样本没有影响。干扰：样本中的血红蛋白、甘油三酯和胆红素在1毫克/毫升、100毫克/毫升和100微克/毫升的浓度下不会干扰。然而，应由用户验证溶血、脂血或黄疸样本的使用。样本准备：样本必须用稀释缓冲液（DIL）稀释。对于血清和血浆样本，建议稀释比例为1:10。
典型校准曲线示例：
图1所示的标准曲线示例不能用于计算测试结果。每个研究实验室都必须为每次进行的测试建立一个标准曲线。
1:10稀释样本的瘦素浓度示例计算：
- 稀释样本的测量信号为0.293
- 空白的测量信号为0.015
软件程序将根据标准曲线自动计算稀释样本的瘦素浓度。只需确定最合适的曲线拟合（这里：二次多项式）。
在这个示例案例中，程序通过解决以下方程来计算样本中的瘦素浓度：
0.278 = -0.0089658 + 0.64743x - 0.034025x^2
0.4524 = x
如果考虑到稀释因子（1:10），未稀释样本的瘦素浓度为：
0.4524 times 10 , text{ng/mL} = 4.4524 , text{ng/mL}
瘦素ELISA（超灵敏）文献参考：
1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning ofthe mouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.
2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma proteinencoded by the obese gene. Science. 269:543-546.
3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.
4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBSLett. 379:55-59.
https://www.amyjet.com/products/ALP-22-LEPMS-E01.shtml
ALPCO-总GIP ELISA试剂盒性能特点，总结及文献参考
ALPCO-总GIP ELISA试剂盒用于定量测定人EDTA血浆和培养基上清液中的总GIP[GIP（1-42）和GIP（3-42）]。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷总GIP ELISA试剂盒（ALP-48-GIPHU-E01）检测原理：
这种用于测定人类总GIP的ELISA试剂盒基于夹心酶免疫测定法。平板的孔涂有高纯度的抗人GIP小鼠单克隆抗体。添加标准品或样品进行第一步免疫反应。孵育和洗涤后，加入HRP标记的抗人GIP抗体溶液作为第二步，在孔表面形成抗体-抗原标记的抗体复合物。经过2次孵育和冲洗掉多余的标记抗体后，用3,3'，5,5'四甲基联苯胺（TMB）测定HRP酶活性，并计算出总人GIP的浓度。
总GIP ELISA试剂盒性能总结：
该试剂盒可在3.1~200 pM的范围内测量血浆中的总GIP。
该检测在3.5小时内完成。
使用一个试剂盒，可以双份测量40个样本。
测试样本：人血浆（EDTA-2Na）和培养上清液。
样本体积：50微升
96孔板试剂盒由8孔条组成，可以单独使用。
稳定性和储存：
所有组分应储存在2-8°C。
从生产日期起，在这种条件下该试剂盒稳定24个月。
有效期标注在试剂盒盒标签上。
检测特性：
这个ELISA试剂盒用于定量测定人血浆和培养上清样本中的总GIP。这个试剂盒以其敏感的定量和高特异性为特点。GIP标准品是一种高纯度的合成产品。
注意事项
1. 在测试中不要混合不同批次号的试剂盒组分，并且不要使用标签上打印的过期日期后的任何组分。
2. 为了防止试剂的污染，使用干净的试管或容器。使用新的一次性移液管尖嘴分配每种试剂、样本、标准品和对照品。
3. 每次运行都必须建立校准曲线。
4. 移液操作可能会影响检测的精度。仔细地将标准溶液或样本精确地移液到板的每个孔中。
5. 当样本浓度超过200 pM时，用缓冲液稀释至适当浓度。如果预计样本浓度会超过200 pM，例如餐后，可以事先用缓冲液稀释。有关稀释说明，请参见试剂准备。
6. 在储存和检测期间，保护试剂不受直射阳光照射。
总GIP ELISA试剂盒性能特点：
总GIP ELISA试剂盒文献参考：
1. Brown,J.C., Mutt, V. and Pedersen,R.A. (1970) Further purification of a polypeptidedemonstratingenterogastrone activity. J.Physiol. 209, 57-64
2. Jörnvall H, Carlquist M, Kwauk S, Otte SC, McIntosh CH, Brown JC, Mutt V. (1981) Aminoacidsequence and heterogeneity of gastric inhibitory polypeptide (GIP). FEBS Lett. 123,205-210.
3. Moody,A.J., Damm Jorgensen, K.and Thim, L.(1981)Diabetologia 21, 306, abstr.
4. Carlquist M, Maletti M, Jörnvall H, Mutt V. (1984) A novel form of gastric inhibitorypolypeptide (GIP) isolated from bovine intestine using a radioreceptor assay.Fragmentation with staphylococcalprotease results in GIP1-3 and GIP4-42, fragmentationwith enterokinase in GIP1-16 and GIP17-42.Eur.J. Biochem. 145, 573-577
https://www.amyjet.com/products/ALP-48-GIPHU-E01.shtml
ALPCO-大鼠前白蛋白ELISA，提供快速、准确的实验结果
ALPCO-大鼠前白蛋白ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测定大鼠血清和血浆样本中的前白蛋白。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷大鼠前白蛋白ELISA（ALP-41-PALRT-E01）检测原理：
在这种检测中，样本中存在的前白蛋白与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗前白蛋白抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，添加与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗前白蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的前白蛋白形成复合物。在另一个洗涤步骤之后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），对结合的酶进行检测。结合的酶量与被测试样本中前白蛋白的浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样本中前白蛋白浓度的量度。测试样本中的前白蛋白量可以从标准品构建的标准曲线中插值得出，并根据样本稀释进行校正。
样本收集和处理：
所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。在处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血，或对样本的完整性有疑虑，请做记录并谨慎解释结果。下面列出的样本收集和储存条件是作为一般指导。尚未评估样本的稳定性。
1血清样本 - 应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后，应通过离心分离血清。取出血清并立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
2血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
3已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。
试剂准备：
在使用前，将所有试剂平衡至室温（16°C至25°C）。
1稀释液浓缩液 - 提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）按1:5稀释。
2洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）按1:20稀释。在储存温度较低时，浓缩液中出现结晶并不罕见。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。
3酶-抗体结合物 - 为每个微孔板测试条计算所需的工作结合物溶液量，为每个用于测试的测试条添加10微升酶-抗体结合物至990微升1X稀释液中。均匀但轻柔地混合，避免产生泡沫。
4大鼠前白蛋白ELISA微孔板 - 按提供的状态准备使用。打开铝箔袋，从袋中取出微孔板。取出在检测中不会使用的所有条和孔，放回袋中并重新密封，连同干燥剂一起放回。
5大鼠前白蛋白校准品 - 根据特定批次的分析证明书进行准备。
结果计算：
1. 从所有孔的值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。
2. 对每个标准的平均重复读数取平均值，并使用这些结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据，构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合将不够精确。
3. 从标准曲线中插值样本值。根据稀释因子进行校正，以得出原始样本中的前白蛋白浓度。
附录A - 参考血清信息：
此试剂盒中包含一瓶参考血清。请参阅随附的产品概况表以获取特定批次的信息。请注意以下几点：
1. 收到参考血清后应立即冷冻。如果储存得当，它在有效期前都是稳定的。
2. 应适当稀释参考血清，以适应标准范围曲线。有关说明，请参考协议中的“样本稀释”部分。
3. 在移液样本（程序部分）时，也应以双份移液参考血清。
https://www.amyjet.com/products/ALP-41-PALRT-E01.shtml
ALPCO高灵敏度小鼠白蛋白ELISA，确保实验结果的可靠性
ALPCO-小鼠白蛋白ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量小鼠血清、血浆和尿液中的白蛋白。仅供研究使用。不适用于独立程序。
艾美捷小鼠白蛋白ELISA（ALP-41-ALBMS-E01）检测原理：
双抗体夹心ELISA的原理如图1所示。在该测定中，样品中存在的白蛋白与吸附在聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗白蛋白抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗白蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的白蛋白形成复合物。在另一个洗涤步骤之后，通过添加无色底物3,3'，5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附结合的酶。结合酶的量与被测样品中白蛋白的浓度直接相关；因此，450nm处的吸光度是测试样品中白蛋白浓度的量度。测试样品中白蛋白的量可以从标准曲线中插值，并根据样品稀释进行校正。
程序限制：
当按照试剂盒说明书中的信息完全理解并遵循良好的实验室操作实践时，将获得可靠和可重复的结果。可能影响检测性能的因素包括仪器功能、玻璃器皿的清洁度、蒸馏水或去离子水的质量、试剂和样本移液的准确性、洗涤技术、孵育时间或温度。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合或替换。
小鼠白蛋白ELISA样本收集和处理：
所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。在处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血，或对样本的完整性有疑虑，请做记录并谨慎解释结果。以下列出的样本收集和储存条件是作为一般指导。尚未评估样本的稳定性。
血清样本：应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后，应通过离心分离血清。取出血清并立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
血浆样本：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
尿液样本：使用无菌或干净的尿液收集器收集中段尿液。离心以去除细胞碎片。立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。
已知干扰物质：浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。
样本稀释：
检测要求在使用前对每个测试样本进行稀释。每次进行检测时，所有样本都应以双份进行检测。推荐的稀释只是建议。稀释应基于未知样本的预期浓度，以便稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本值，在运行整个板之前，高度建议对一个或两个代表性样本进行系列稀释检测。
血清和血浆样本：建议的起始稀释度为1:500,000。要准备样本的1:500,000稀释液，将2微升样本转移到1998微升1X稀释液中。这会产生1:1,000的稀释度。接下来，将1:1,000的样本通过将2微升转移到998微升1X稀释液中进行稀释。这会产生1:500,000的稀释度。在每个阶段彻底混合。
尿液样本：建议的起始稀释度为1:500。要准备样本的1:500稀释液，将2微升样本转移到998微升1X稀释液中。这会产生1:500的稀释度。彻底混合。
小鼠白蛋白ELISA结果计算：
1. 从所有孔的测试值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。
2. 对每个标准的平均重复读数取平均值，并使用这些结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑（4-PL）曲线拟合的计算机软件来减少数据，构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合将不够精确。
3. 从标准曲线中插值测试样本值。根据稀释因子进行校正，以得出原始样本中的白蛋白浓度。
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