ALPCO瘦素ELISA试剂盒测定程序及计算方案
该检测利用了两种高度特异性的单克隆抗体：将瘦素特异性的单克隆抗体固定在微孔板上，将瘦素不同表位特异性的双克隆抗体与生物素结合。
在第一步中，样品和标准品中存在的瘦素与固定抗体和生物素化抗体结合，从而形成三明治复合物。通过洗涤步骤去除过量和未结合的生物素化抗体。
第二步，加入链霉抗生物素蛋白-HRP，它能特异性结合任何结合的生物素化抗体。同样，未结合的链霉抗生物素蛋白-HRP通过洗涤步骤去除。
接下来，加入酶底物（TMB），形成与瘦素含量成正比的蓝色产物。通过加入终止溶液使酶反应停止，将蓝色转化为黄色。在450nm处用微量滴定板读数器测量吸光度。使用一组标准来绘制标准曲线，从中可以直接读取样品和对照中的瘦素含量。
瘦素ELISA试剂盒用于酶免疫测定法定量测定人血清中的瘦素。此试剂盒仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷瘦素ELISA试剂盒（ALP-11-LEPHU-E01）测定程序：
所有试剂在使用前必须达到室温。校准品、质控品和样本应进行双重测定。一旦开始程序，所有步骤都应在无中断的情况下完成。
1. 所有试剂盒组分达到室温后，轻轻倒置混合。
2. 准备生物素-过氧化物酶结合物和洗涤缓冲液的1X工作溶液。
3. 计划微孔板孔的使用，用于校准品、质控品和样本。参见推荐的测定布局。取出将不使用的条带，并将它们放回带有干燥剂的袋子里。重新密封未使用条带的袋子并放回冰箱。
4. 将每个校准品、质控品和血清样本的20微升分别双重加入相应的孔中。
5. 将80微升的单克隆抗瘦素-生物素结合物加入每个孔中。推荐使用多通道移液管。
6. 在直径3毫米的微孔板振荡器上（大约600转/分钟）在室温下孵育1小时。
7. 使用自动微孔板洗涤器（首选）或按以下描述手动洗涤微孔板孔。自动：使用自动微孔板洗涤器，使用1X工作洗涤缓冲液进行3周期洗涤（每个孔300微升×3）。一个周期包括吸干所有孔，然后用1X工作洗涤缓冲液填充每个孔300微升。在最后洗涤周期后，吸干所有孔，然后将微孔板牢固地敲击在吸水纸上以去除任何残留液体。手动：对于手动洗涤，使用1X工作洗涤缓冲液进行3周期洗涤（每个孔300微升×3）。一个周期包括通过迅速将孔中的内容物倒入废物容器来吸干所有孔，然后使用多通道移液管将300微升的1X工作洗涤缓冲液加入每个孔中。在最后洗涤周期后，通过迅速将孔中的内容物倒入废物容器来吸干所有孔，然后将微孔板牢固地敲击在吸水纸上以去除任何残留液体。
8. 将100微升的1X工作生物素-过氧化物酶结合物加入每个孔中。推荐使用多通道移液管。
9. 在直径3毫米的微孔板振荡器上（大约600转/分钟）在室温下孵育30分钟。
10. 按照步骤7的方式再次洗涤微孔板孔。
11. 在定时间隔将100微升的TMB底物加入每个孔中。推荐使用多通道移液管。
12. 在直径3毫米的微孔板振荡器上（大约600转/分钟）在室温下孵育10-15分钟。
13. 按照步骤11的相同定时间隔将50微升的终止溶液加入每个孔中。推荐使用多通道移液管。轻轻敲击微孔板框架以混合孔中的内容物。
14. 在加入终止溶液后20分钟内，使用设置为450纳米的吸光度微孔板阅读器测量微孔板孔中的光密度（吸光度）。
计算：
1. 计算每个校准品、质控品和样本双重测定的平均光密度。
2. 使用免疫分析软件进行4或5参数曲线拟合以生成校准曲线。
3. 免疫分析软件将使用平均光密度值和校准曲线计算质控品和样本的浓度。
4. 如果样本读数超过100 ng/mL，则用测定缓冲液稀释，稀释度不超过1:8。所得结果必须乘以稀释因子。
瘦素ELISA试剂盒典型表格数据：
仅提供示例数据。不用于计算结果
https://www.amyjet.com/products/ALP-11-LEPHU-E01.shtml
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高灵敏度c肽(小鼠)ELISA试剂盒--生物医学研究专用
ALPCOc肽(小鼠)ELISA试剂盒（ALP-80-CPTMS-E01），是一种夹心型免疫测定法。96孔微孔板涂有C肽特异性单克隆抗体。将标准品、对照品和样品加入到带有共轭物的微孔板孔中。然后将微孔板在室温下在微孔板振荡器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗涤缓冲液洗涤细胞并吸干。加入TMB底物，在室温下在微孔板振荡器上以700-900rpm第二次孵育微孔板。第二次孵育完成后，加入终止溶液，用分光光度计在450nm处测量光密度（OD）。产生的颜色强度与样品中C肽的量成正比。
ALPCO小鼠C肽ELISA用于定量测定小鼠血清中的C肽。
艾美捷ALPCO-c肽(小鼠)ELISA试剂盒所需材料：
- 用于分配高达100微升的精密移液管（带一次性吸头）
- 用于分配高达100微升的可重复或多通道移液管
- 用于试剂配制的容量瓶和移液管
- 用于试剂配制的蒸馏水或去离子水
- 微孔板洗涤器或洗涤瓶
- 能够达到700-900转/分钟的微孔板振荡器
- 带有450纳米滤光片的微孔板阅读器
- 用于样本制备的涡旋混合器。
注意事项：
1. 试剂盒中包含的人类血液产品已针对HIV（人类免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）的存在进行了检测。这些病毒的检测方法不能保证病毒的绝对不存在；因此，所有试剂应被视为潜在的感染性物质。处理和处置应符合所有适当的国家和地方法规，以处理潜在的生物危害物质。
2. 所有来源于动物的材料均为BSE（牛海绵状脑病）阴性。然而，所有材料应远离反刍动物。
3. 避免与皮肤直接接触。
4. 本产品不适用于内服。
5. 使用本产品时，避免进食、饮水或吸烟。
6. 不要使用嘴来移液任何试剂。
7. 试剂盒中的试剂是特定批次的，不得替代。
8. 不要使用超过有效期的试剂。
9. 不建议对测试程序进行变动，可能会影响测试结果。
储存条件：
试剂盒应储存在2-8°C的条件下。试剂盒在盒子标签上的有效期之前是稳定的。
样本处理：
血清样本适用于本测定。不需要对样本进行稀释或处理。然而，如果样本的C肽浓度高于最高标准，应将样本稀释在零标准中，并重复分析。建议1）在使用前彻底涡旋每个样本，2）在不停顿的情况下进行移液操作。将C肽样本分装后存放在≤-20°C的条件下。样本可以经历多达4次冻融循环。
结果计算：
从标准品构建标准曲线。将零标准作为曲线的一部分进行绘制。建议使用软件程序来计算标准曲线并确定样本的浓度。小鼠C肽ELISA是一种配体结合测定，其反应与分析物浓度呈S形关系。目前公认的此类曲线的参考模型使用5参数逻辑（pl）拟合，因为这些模型能在更大范围内优化准确性和精确度。尽管三次样条和其他模型是可接受的方法，但它们通常在检测范围的低值和高值端显示出较低的测定内准确性和精确度。在下面的例子中，使用了5参数pl曲线拟合来最大化低浓度样本的准确性和精确度。然而，由于个别实验室条件的影响，所有模型在可检测范围的最低和最高端的准确性和精确度都是有限的。因此，在解释分析物响应变得非线性时的结果时，应始终谨慎。
短期测定方案：
文献参考：
1. Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.
https://www.amyjet.com/products/ALP-80-CPTMS-E01.shtml
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ALPCO胰岛素ELISA：样本处理&试剂准备&结果计算
ALPCO胰岛素ELISA是一种夹心型免疫测定法。96孔微孔板涂有胰岛素特异性单克隆抗体。将标准品、对照品和样品加入带有检测抗体的微孔板孔中。然后将微孔板在酰胺板振荡器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗涤缓冲液洗涤孔并吸干。加入TMB底物，在微孔板振荡器上以700-900rpm的速度第二次孵育微孔板。一旦第二次孵育完成，加入停止溶液，用分光光度计在450nm处测量光密度（OD）。产生的颜色强度与样品中胰岛素的量成正比。
ALPCO胰岛素ELISA用于定量测定血清和血浆中的胰岛素。
艾美捷胰岛素ELISA（ALP-80-INSHU-E01.1）供应的材料：
*请参阅每个试剂盒随附的分析证书，了解批次特定的控制范围和复溶量。
储存条件：
试剂盒应储存在2-8°C的条件下。试剂盒在盒子标签上的有效期之前是稳定的。
样本处理：
血清和血浆（肝素或EDTA）样本适用于此测定。不需要对样本进行稀释或处理。然而，如果样本的胰岛素浓度高于最高标准，应将样本在零标准中稀释，然后重复分析。样本可以在分析前在2-8°C下储存24小时。建议在-20°C以下储存更长时间。避免反复冻融。建议在使用前1）彻底涡旋每个样本，2）在不停顿的情况下进行移液操作。
试剂准备：
所有试剂在使用前必须平衡至室温，然后用于测定的准备和后续使用。洗涤缓冲液浓缩液需用20份蒸馏水稀释。例如，要准备工作强度洗涤缓冲液，用400毫升去离子水稀释20毫升洗涤缓冲液浓缩液（21倍）。工作强度洗涤缓冲液在室温（18-25°C）下稳定4周。
糖尿病控制品（1级和2级）以冻干形式提供。请参考随每个试剂盒提供的分析证书，了解适当的去离子水体积用于复溶。用橡胶塞和盖子封闭小瓶，轻轻摇晃小瓶，使用前让其静置30分钟。小瓶中的内容物应完全溶解，无可见颗粒。复溶的控制品在2-8°C下储存7天稳定。如果需要，控制品可以分装后在-20°C以下储存长达6个月。控制品不应反复冻融。
质量控制：
建议在每次测定中包含ALPCO胰岛素ELISA提供的控制品。控制品的浓度范围在每个试剂盒提供的分析证书上提供；然而，建议每个实验室建立自己的可接受范围。
所需材料：
- 用于分配25 - 100微升的精密移液管（带一次性吸头）
- 用于分配100微升的可重复或多通道移液管
- 用于试剂配制的容量瓶和移液管
- 用于试剂配制的蒸馏水或去离子水
- 微孔板洗涤器或洗涤瓶
- 能够达到700-900转/分钟的微孔板振荡器
- 带有450纳米滤光片的微孔板阅读器
- 用于样本制备的涡旋混合器。
结果计算：
从标准品构建标准曲线。零标准应作为空白，其平均值应从每个孔中减去。建议使用软件程序来计算标准曲线并确定样本的浓度。胰岛素ELISA是一种配体结合测定，其反应与分析物浓度呈S形关系。目前公认的此类曲线的参考模型使用4或5参数逻辑（pl）拟合，因为这些模型能在更大范围内优化准确性和精确度。尽管三次样条和其他模型是可接受的方法，但它们通常在检测范围的低值和高值端显示出较低的测定内准确性和精确度。
胰岛素ELISA文献参考：
Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.
https://www.amyjet.com/products/ALP-80-INSHU-E01.1.shtml
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FabGennix-磷酸-PDE5A抗体，适用于细胞和组织研究
该蛋白通过调节细胞内环核苷酸的浓度来参与信号转导。这种磷酸二酯酶催化cGMP特异性水解为5-GMP。
艾美捷FabGennix磷酸-PDE5A抗体：
货号：PPD5A-140AP
描述：亲和纯化的磷酸化磷酸二酯酶5A抗体
验证应用：ELISA, ICC, IHC, IP, WB（酶联免疫吸附测定、免疫细胞化学、免疫组织化学、免疫沉淀、西方印迹）
宿主：兔
物种交叉反应性：牛、人、小鼠、猪、大鼠、羊
免疫原：合成肽，与人类PDE5A蛋白上氨基酸区域120-170的所有PDE5A变体共有。磷酸化
特异性：此抗体将仅检测在PKG位点被磷酸化的PDE5A蛋白。不会检测未磷酸化的PDE5A或其他PDE家族成员。
重组GFP-PDE5A1和磷酸-PDE5A抗体的WB。用或不用ANP处理过表达的细胞。
在DiluObuffer中以1:500的比例稀释抗体。用StripObuffer剥离印迹，并用PPD5A-140AP重新染色。
FabGennix磷酸-PDE5A抗体物理特性：
规格: 100微克、 200微升
浓度: 1.0-1.25 微克/毫升，在抗体稳定缓冲液中
形态: 亲和纯化
储存条件: 长期储存在-20℃
应用协议：
共聚焦显微镜
稀释比例: 1:100
ELISA（酶联免疫吸附测定）: 1:10,000
免疫细胞化学: 1:10,000
免疫荧光: 1:100
免疫组织化学: 1:100
免疫沉淀: 1:100
西方印迹: 1:200
稀释比例: 1:500
分子功能：水解酶，3',5-环磷酸鸟苷磷酸二酯酶活性，cGMP结合
亚细胞位置：细胞质
表达：在主动脉平滑肌细胞、心脏、胎盘、骨骼肌和胰腺中表达，而在大脑、肝脏和肺中的表达程度要小得多。
本产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。
参考资料：
Fabgennix Phospho-PDE5A Antibody has been used in 15 Publications
Mous, Daphne S., et al. "Clinically relevant timing of antenatal sildenafil treatment reduces pulmonary vascular remodeling in congenital diaphragmatic hernia." American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology 311.4 (2016): L734-L742. PMID: 27521424（IHC; Rat）
MHerrera, Emilio A., et al. "The role of nitric oxide signaling in pulmonary circulation of highand low-altitude newborn sheep under basal and acute hypoxic conditions." Nitric Oxide, 89, 71-80. PMID: 31063821（Western Blot; Sheep）
Musicki, Biljana, et al. "Testosterone replacement in transgenic sickle cell mice controls priapic activity and upregulates PDE5 expression and eNOS activity in the penis." Andrology 6.1 (2018): 184-191. PMID29145710（Western Blot; Mouse）
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FabGennix-PDE8A抗体，包含ELISA、IHC、WB等多种应用指南
此抗体将仅标记PDE8A变体。此抗体不会与其他PDE家族成员发生交叉反应。
艾美捷FabGennix-PDE8A抗体：
货号：PD8A-101AP
描述：亲和纯化的全磷酸二酯酶8A抗体 N-表位
验证应用：共聚焦显微镜（CM）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）、西方印迹（WB）
宿主：兔
物种交叉反应性：牛、人、猴、小鼠、大鼠
免疫原：合成环肽，来自所有PDE8A变体共有的N端附近。
规格：100 微克、200 微升
浓度：在抗体稳定缓冲液中为0.65 微克/微升
形态：亲和纯化
克隆性：多克隆
决定因素：N-表位
储存：长期储存在-20℃
应用协议：
共聚焦显微镜：1:250
直接结合（DB）：1:10,000
酶联免疫吸附测定（ELISA）：1:10,000
免疫细胞化学（ICC）：1:250
免疫荧光（IF）：1:250
免疫组织化学（IHC）：1:250
免疫沉淀（IP）：1:250
西方印迹（WB）：1:500-1:2,000
PD8A-101AP与人卵巢髓质组织的IHC。1:200抗体稀释。图片由丹麦哥本哈根大学医院医学博士Steven S.Petersen提供
FabGennix-PDE8A抗体参考资料：
Petersen, T. S., et al. "Distribution and function of 3', 5'-Cyclic-AMP phosphodiesterases in the human ovary." Molecular and cellular endocrinology (2015). PMID25578602 （Immunohistochemistry; Human）
Amanda, G. Vang, et al. "Regulatory T-cells and cAMP suppress effector T-cells independently of PKA-CREM/ICER: a potential role for Epac." Biochemical Journal 456.3 (2013): 463-473. PMID24007532 （Western Blot; Mouse）
Kelly, Michy P., et al. "Select 3′, 5′-cyclic nucleotide phosphodiesterases exhibit altered expression in the aged rodent brain." Cellular signalling 26.2 (2014): 383-397. PMID24184653 （Western Blot; Human, Mouse）
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FabGennix-PDE6-β抗体：用于细胞信号传导和膜结合蛋白研究
亲和纯化棒状cGMP特异性3'，5'-环磷酸二酯酶亚基β抗体。
艾美捷FabGennix-PDE6-β抗体：
货号：PD6-201AP
验证应用：酶联免疫吸附测定（ELISA）、共聚焦显微镜（CM）、免疫细胞化学（ICC）、免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）、西方印迹（WB）
宿主：兔
物种交叉反应性：
牛、人、小鼠、猪、大鼠
免疫原：合成环肽，与所有PDE6 Beta变体共有
物理特性：
数量：100 微克
体积：200 微升
浓度：在抗体稳定缓冲液中为0.5 微克/微升
形态：亲和纯化
克隆性：多克隆
储存：长期储存在-20℃
应用协议：
共聚焦显微镜：1:200
直接结合（DB）：1:10,000
酶联免疫吸附测定（ELISA）：1:10,000
免疫细胞化学（ICC）：1:200
免疫荧光（IF）：1:200
免疫组织化学（IHC）：1:200
免疫沉淀：1:200
西方印迹（WB）：1:500
分子功能：水解酶，3',5'-环磷酸腺苷磷酸二酯酶活性
亚细胞位置：膜；脂质锚定
结构：由两个催化链（α和β）、一个抑制链（γ）和δ链组成的寡聚体。
大鼠视网膜-PDE6β
原发抗体：PD6-201AP；在IHC阻断缓冲液中以1:50稀释。DAB（棕色）染色和苏木精QS（蓝色）复染。放大40倍。FFPE部分。
FabGennix-PDE6-β抗体参考资料：
Fabgennix PDE6 Beta Antibody has been used in 2 Publication
Nikolova, Sevdalina et al. “Phosphodiesterase 6 Subunits Are Expressed and Altered in Idiopathic Pulmonary Fibrosis.” Respiratory Research 11.1 (2010): 146. PMC2988012（Immunohistochemistry, Western Blot; Human, Pig）
Nikolova, Sevdalina Vaskova. Role of cGMP phosphodiesterases in idiopathic pulmonary fibrosis. Diss. Justus Liebig University Giessen, 2009. PMID20979602（Immunohistochemistry, Western Blot; Human）
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FabGennix-RIP140抗体ChIP等级，高亲和力多克隆兔源抗体
在胚胎胎盘中表达。在成年人中，睾丸和大脑中的表达很强。在白色脂肪组织中也高水平表达。在成人心脏、肺、胃和肾脏中持续表达，但表达水平较弱。在骨骼肌中适度表达。在成人脾脏、肝脏和棕色脂肪组织中表达水平较低。在卵巢中，颗粒细胞的表达水平较高，而在卵泡膜和间质室的表达水平较低。
RIP140抗体ChIP等级，受体相互作用蛋白140抗体。
艾美捷FabGennix-RIP140抗体ChIP等级：
货号：RIP140-121AP
验证应用：共聚焦显微镜（CM）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）、免疫荧光（IF）、染色质免疫沉淀（ChIP）、西方印迹（WB）
宿主：兔
物种交叉反应性：鸡、人、小鼠、大鼠
免疫原：合成肽，取自RIP140蛋白C末端区域1050-2000氨基酸序列。
特异性：识别RIP140的C末端域
物理特性：
数量：100 微克
体积：200 微升
浓度：在抗体稳定缓冲液中为0.60 微克/微升
克隆性：多克隆
储存：长期储存在-20℃
应用协议：
共聚焦显微镜：1:250
直接结合（DB）：1:10,000
酶联免疫吸附测定（ELISA）：1:10,000
免疫细胞化学（ICC）：1:250
免疫荧光（IF）：1:250
免疫组织化学（IHC）：1:250
免疫沉淀（IP）：1:200
西方印迹（WB）：1:1,000
人海马-RIP140
一抗：RIP140-121AP；在IHC阻断缓冲液中以1:50稀释。DAB（棕色）染色和苏木精QS（蓝色）反染色。放大40倍。FFPE部分
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FabGennix-PGCB抗体，探索C型利钠肽激素受体功能
C型利钠肽NPPC/CNP激素的受体。与其配体结合后具有鸟苷酸环化酶活性。可能在骨骼生长调节中发挥作用。
艾美捷FabGennix-PGCB抗体：
货号：PGCB-201AP
验证应用：共聚焦显微镜（CM）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）、西方印迹（WB）
宿主：兔
物种交叉反应性：
人、小鼠、大鼠
免疫原：合成的C末端肽，对应于颗粒型鸟苷酸环化酶B蛋白的独特氨基酸序列。
物理特性：
数量：100 微克
体积：200 微升
浓度：在抗体稳定缓冲液中为0.75-1.20 微克/微升
形态：亲和纯化
克隆性：多克隆
储存：长期储存在-20℃
应用协议：
共聚焦显微镜：1:200
直接结合（DB）：1:10,000
酶联免疫吸附测定（ELISA）：1:10,000
免疫细胞化学（ICC）：1:200
免疫荧光（IF）：1:50-1:200
免疫组织化学（IHC）：1:200
免疫沉淀（IP）：1:200
西方印迹（WB）：1:500
分子功能：ATP结合、GTP结合、激素结合、蛋白激酶活性、G蛋白偶联肽受体活性
亚细胞位置：膜；单次跨膜I型膜蛋白
结构：属于腺苷酸环化酶类-4/鸟苷酸环化酶家族。包含1个鸟苷酸环化酶域。包含1个蛋白激酶域。
PGCB-201AP与小鼠鼻组织薄片的IF。绿色：格伦伯格神经节神经元。红色：抗体免疫反应性。蓝色：细胞核。血管壁上有污渍。数据由加利福尼亚州帕萨迪纳市加州理工学院Kroos博士实验室提供。
FabGennix-PGCB抗体参考资料：
Muller, Dieter, et al. "Expression of guanylyl cyclase (GC)-A and GC-B during brain development: evidence for a role of GC-B in perinatal neurogenesis." Endocrinology 150.12 (2009): 5520-5529. PMID19837875（Immunocytochemistry, Immunohistochemistry, Confocal Microscopy; Rat）
Thompson, Iain R. et al. “Homologous and Heterologous Desensitization of Guanylyl Cyclase-B Signaling in GH3 Somatolactotropes.” Cell and Tissue Research 355.2 (2014): 425–436. PMC3921447（Confocal Microscopy, Immunofluorescence, Western Blot; Human, Rat）
Thong, Arief, et al. "Neutral endopeptidase (CD10) is abundantly expressed in the epididymis and localized to a distinct population of epithelial cells–Its relevance for CNP degradation." Molecular and cellular endocrinology 382.1 (2014): 234-243. PMID24099862（Immunofluorescence, Western Blot; Human, Mouse）
艾美捷科技是FabGennix的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/FabGennix.shtml