FabGennix-SolObuffer细胞裂解试剂盒，非常适合各种技术
FabGennix-SolOBuffer细胞裂解试剂盒利用一种特殊配制的细胞裂解缓冲液，该缓冲液使用非变性洗涤剂制备用于生物测定的细胞裂解物。
艾美捷FabGennix-SolObuffer细胞裂解试剂盒：
货号：FGI-1943
体积 200毫升SolOBuffer；100微升蛋白酶抑制剂混合物A和B（各）。
储存 存放于4°C。蛋白酶抑制剂混合物A和B存放于-20°C。大约的保质期为六个月。
应用 蛋白质特性鉴定和酶活性测定。
FabGennix-SolObuffer细胞裂解试剂盒优势：
非常适合各种技术，包括蛋白质表征和酶
活性测定
离心后即可使用-无需去除洗涤剂
保存蛋白质样本
非变性
消除故障排除分析的问题
试剂盒包括蛋白酶抑制剂，用于保存生物样本
协议：
组织蛋白提取的推荐体积为4-6mL/g组织或
106个细胞1-2mL。
等分所需体积的SolOBufferTM。
将1µL蛋白酶抑制剂A和1µL蛋白酶抑制剂B添加到2 mL SolOBufferTM中
在使用之前。
蛋白酶抑制剂在SolOBufferTM中不稳定，所以一定要只做需要的东西。
将所需体积的SolOBufferTM添加到样品中，并通过以下方式破坏组织/细胞
机械破坏或超声波处理5秒。
将样品放在冰上15分钟。
在12000 XG（微量离心机）下离心3分钟
在某些情况下，可能会留下含有细胞碎片的小颗粒
其他不溶性物质。
溶解的样品可以直接用于蛋白质印迹和免疫沉淀
无需去除任何洗涤剂。
本产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。
艾美捷科技是FabGennix的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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FabGennix高活性成分PBMC分离试剂盒|骆驼科，可靠、快速分离
骆驼外周血单核细胞（PBMC）分离试剂盒是一种即用型试剂盒，含有无菌稀释缓冲液、密度培养基和密度垫，用于从包括骆驼、羊驼在内的各种骆驼家族成员的全血中分离PBMC细胞。
利用细胞密度的差异将粒细胞和红细胞从外周血中分离出来血液单核细胞（PBMCs）。分离外周血单个核细胞常见的技术是混合血液使用一种能够聚集红细胞的化合物，从而提高其沉降速率。这个SepOBuffer™中的活性成分是泛影酸钠和具有渗透压的多糖290+15 mOsm/L，密度1.077+0.001 g/ml。SepOBuffer™中的多糖可增强离心过程中红细胞聚集增加红细胞沉降。PBMCs较低密度保留在血浆SepOBuffer™界面中，可以从当红细胞沉淀时，试管。全血中的PBMCs可以可靠、快速地使用SepOBuffer™以纯形式分离。
艾美捷FabGennix-PBMC分离试剂盒|骆驼科（FGI-PBMC1930）组成：
PBMC SepOBufferTM 150 mL
PBMC Dilution Buffer 250 mL
RBC Lysis Buffer 50 mL
PBMC separation tubes with medium grit frit 10 tubes
协议：
1. 高密度淋巴细胞分离液，SepOBuffer™（货号 # FGI-1930）在使用前必须达到室温。
2. 将SepOBuffer™加入到含有熔合介质磨砂滤网的无菌试管中（目录号 # FGI-1933-01）。
推荐体积和管道尺寸：
3. 全血达到室温后，用PBMC稀释液（货号 # FGI-1931）进行稀释。
4. 将稀释后的血液分层放入含有SepOBuffer™的试管中。注意不要将稀释后的血液与SepOBuffer™混合。
5. 在不使用刹车的外挂式桶装转子离心机中，以850x G的速度离心20分钟，温度设定为250C。如果血液存放超过两小时，则将离心时间增加到30分钟。
6. 丢弃上层血浆层，并收集位于血浆-SepOBuffer™界面含有PBMCs的薄层。
7. PBMCs在外挂式桶装转子离心机中以1500RPM的速度在4oC下离心10分钟形成细胞沉淀。
8. 将细胞沉淀通过在PBMC稀释液（货号 # FGI-1931）中重新悬浮来洗涤，并在4oC下以1500 RPM的速度在外挂式桶装转子离心机中离心10分钟。
9. 丢弃上清液，PBMCs部分中的红细胞污染通常在1-5%之间，这可以通过使用裂解缓冲液（货号 # FGI-1932）来消除，如下所述。
10. 细胞沉淀在5ml的裂解缓冲液（FGI-1932）中重新悬浮，并在室温下孵育5分钟。孵育后，用4oC的PBMC稀释液补充试管至顶部，并在4oC下以1500 RPM的速度在外挂式桶装转子离心机中离心10分钟。
12. 丢弃上清液，并保留富含PBMCs的细胞沉淀。
13. 细胞沉淀在PBMC稀释液中重新悬浮，分装到冷冻管中，并存储在液氮中。
本产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。
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FabGennix-PDEase试剂盒，培养缓冲液的制备和检测设置
cAMP是一种普遍存在于所有哺乳动物细胞中的第二信使。这种信使调节各种激素、神经递质、生长因子、细胞因子和其他配体受体的信号转导。cAMP磷酸二酯酶是水解和截断源自受体激活的cAMP信号传导的唯一途径。cAMP水解活性由一个相当大的多酶家族提供，该家族具有独特的细胞内定位和调节特性。在各种PDE家族（PDE1-PDE11）中，PDE4有4个基因（PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D）以多剪接变体形式表达。
PDE4活性测量需要两步反应，在第一步反应中，cAMP被PDE活性水解成非环状。通过使PDE源变性或加入PDE4选择性抑制剂来停止该反应，然后通过第二步酶反应将AMP转化为腺苷达到平衡。由于腺苷是中性的，因此通过离子交换色谱法用电荷分离cAMP或AMP。为了避免其他PDE的背景贡献，该PDE测定在针对PDE4优化的底物浓度下进行。PDE4酶活性与第一反应中形成的腺苷成正比。
PDE4活性测量在2-3小时内提供可重复的结果。该试剂盒提供足够的试剂，与内部控制一起处理50或100个样本。试剂盒试剂在推荐条件下储存可稳定6个月。该试剂盒的内容物必须按照瓶子标签和规格表上的指示在不同温度下储存。
艾美捷FabGennix-PDEase试剂盒：
Incubation Buffer Reagent A 5 mL
Incubation Buffer Reagent B 5 mL
Incubation Buffer Reagent C 5 mL
PDE Substrate Buffer D10 mL
PDE Substrate 2X 200 µl
Inhibitor Buffer 50 mL
Second Enzyme Source (10X) 2X 250 µl
Resin Slurry (10X) 100 mL
Control PDE4 Enzyme 1x200 µl
培养缓冲液的制备和检测设置：
1孵育缓冲液必须在使用前立即混合储备试剂来制备。
2将1.5毫升塑料圆锥管的成对排列放置在冰上，并使用锁扣盖密封。或者，可以使用16-18号针头刺一个小孔，用于在后续步骤中产生的蒸汽排放。
3在每个放置在4°C冰上的圆锥管中，用移液管取25微升由孵育缓冲液试剂A、B和C混合制备的孵育缓冲液（A:B为3:1，C为1，体积比）。使用前立即制备此缓冲液。
4将PDE酶在孵育缓冲液中稀释（步骤2中制备），以获得25微升孵育缓冲液中所需的PDE活性。通常细胞提取物中的25-50微克蛋白质。
5在4°C下向孵育缓冲液中加入25微升PDE酶。
6向上述一系列管中加入5-10微升PDE酶源（2.5-7.5微克蛋白质），并在4°C下孵育5分钟。应注意直接将酶滴入溶液中。所提供的部份纯化的PDE4酶可以按5-10微升/测定使用。
7用新鲜的孵育缓冲液补充至25微升。保持所有管在4°C。
8在PDE底物缓冲液D中制备适当浓度的抑制剂溶液，以获得25微升中所需浓度。可以添加高达5%的DMSO而不影响试剂盒性能。其他溶剂的效果应单独测试。
9通过添加25微升Rolipram（在PDE底物缓冲液D中为100微米）可以确定对Rolipram敏感的PDE4活性。
10可以通过用相同体积替代Rolipram来筛选未知化合物对PDE4的抑制作用。
11在没有任何抑制剂的情况下测量总PDE活性。抑制剂被25微升PDE底物缓冲液D替代，以测量总PDE活性。
12通过将100微升PDE底物与4885微升PDE底物缓冲液D和15微升2,8 3H-cAMP铵盐（乙醇溶液，25-40 Ci/mmol；杜邦NEN公司提供）混合，为每次测定新鲜制备cAMP缓冲底物，并保持在冰上。
13管子应标记为放射性，并应妥善处理放射性材料。
14将含有孵育缓冲液、酶源和抑制剂的圆锥管在30°C下预孵育5分钟。
15加入50微升缓冲PDE底物（步骤5中制备）。
16将底物直接移液到孵育介质中，并在30°C下摇动孵育10分钟。重要的是要计时添加底物，因为一旦添加底物，酶促反应就会开始。保存剩余的底物溶液以测量总3H-CMP计数。将剩余的作为液体放射性废物丢弃。
17在30°C下10分钟后，立即将管子转移到100°C水浴中3分钟，以停止PDE反应。管子可能因蒸汽产生而压力增大，为了避免盖子突然弹出，请提供适当的通风或使用带有点击锁定盖子的管子。
18立即将管子转移到冰上以冷却反应。此时可以停止测定，并将其存储在4°C下进行后续步骤。
将AMP转化为腺苷并与AMP和cAMP分离
1通过将缓冲酶的浓溶液与蒸馏水按1:10稀释来制备第二种酶溶液。保持在4°C。
2向每个管中加入25微升酶，并在30°C下孵育15分钟。丢弃未使用的部分，这种酶在稀释溶液中的活性不稳定。
3向每个管中加入400微升预活化的离子交换树脂。在移液过程中，树脂浆应该是均匀的；这可以通过使用小磁力搅拌棒不断搅拌来实现。
4盖紧并把所有管子涡旋30秒。
5将所有管子在冰上孵育15分钟。
6将所有管子离心13,000转/分钟2分钟。小心地转移150微升上清液进行3H β液体闪烁计数。保持闪烁液瓶在室温下至少2小时后再进行计数。将剩余的孵育混合物作为放射性废物丢弃。剩余的放射性将在树脂颗粒中。按照放射性处理剩余的管子，并将其作为固体放射性废物丢弃。
7取相同量的放射性PDE4底物进行总计数测量。
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FabGennix-CD10抗体物理性能和应用协议说明
FabGennix-CD10抗体，亲和纯化的中性内肽酶抗体多表位。
艾美捷FabGennix-PDEase试剂盒：
货号：NEPR-151AP
经过验证的应用：细胞膜染色（CM）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）、西方墨点法（WB）
宿主：兔
物种交叉反应性：人、小鼠、大鼠
免疫原：使用了多表位合成肽。使用的合成肽混合物取自人中性内肽酶蛋白的氨基酸区域：100-150、200-250、360-410、450-500以及700-750。
FabGennix-CD10抗体物理性能：
数量 100微克
体积 200微升
浓度 抗体稳定缓冲液中0.72-0.78微克/微升
免疫球蛋白 IgG
形态 亲和纯化
克隆性 多克隆
决定因素 多表位
储存 -20°C 长期储存
FabGennix-CD10抗体应用协议：
酶联免疫吸附试验 1:10,000
免疫细胞化学 1:250
免疫荧光 1:250
免疫组化 1:250
免疫沉淀 1:250
西方墨点法 1:500
蛋白：
概览 在生物上对于破坏类鸦片肽如甲硫氨酸-和亮氨酸-脑啡肽通过裂解甘氨酸-苯丙氨酸键非常重要。血管紧张素成熟；细胞对紫外线的响应；复制性衰老。
分子功能 水解酶，金属蛋白酶，蛋白酶
亚细胞位置 细胞膜，膜
表达 脂肪组织；十二指肠；肾脏；小肠
结构 属于肽酶M13家族
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Calbiotech肺炎支原体IgG ELISA测定程序方案
肺炎支原体是一种病原体，其临床表现范围从无症状到明显的肺炎。症状在暴露后6到32天开始，包括头痛、不适、咳嗽、喉咙痛和发烧。病程可能持续几天到一个月甚至更长时间。通过ELISA检测到M. pneumoniae IgM抗体或特异性IgG抗体的显著增加，是适当临床环境中近期感染的有力证据。通常在临床发病后1周特异性IgM抗体显著增加，第二周特异性IgG水平上升。然而，M. pneumoniae IgM在感染后可以持续存在超过两年，因此，特异性IgM的检测并不准确表示感染时间。初次感染和再感染可以通过初次感染中存在特异性IgA和特异性IgM的升高，以及再感染中存在特异性IgA而无特异性IgM的存在来区分。通常，如果在发病后10-20天收集的血清中缺少特异性IgM，则强烈表明不是由M. pneumoniae引起的原发性肺炎。
Calbiotech-肺炎支原体（肺炎支原体）IgG ELISA测试系统是一种酶联免疫吸附试验（ELISA），用于检测人血清或血浆中肺炎支原体的IgG类抗体。
艾美捷Calbiotech肺炎支原体IgG ELISA（MP020G）检测原理：
将稀释的患者血清加入到涂有纯化抗原的孔中。如果存在IgG特异性抗体，它会与抗原结合。所有未结合的物质都被洗去，然后加入酶结合物与存在的抗体-抗原复合物结合。过量的酶结合物被洗掉，然后加入底物。孵育板以允许酶水解底物。产生的色泽强度与样本中IgG特异性抗体的数量成正比。
测定程序：
将所有样本和试剂盒组分置于室温（20-25°C）并轻轻混合。
1. 将所需数量的包被条放入支架中。
2. 阴性对照、阳性对照和校准品已准备好使用。通过向200微升样品稀释液中加入10微升样本来准备测试样品的1:21稀释。混合均匀。
3. 向相应的孔中分发100微升稀释血清、校准品和对照品。对于试剂空白，在1A孔位分发100微升样品稀释液。轻敲支架以去除液体中的空气泡，并混合均匀。在室温下孵育20分钟。
4. 清除所有孔中的液体。用300微升1X洗涤缓冲液洗孔三次。用吸收纸或纸巾拍干。
5. 向每个孔中分发100微升酶结合物，并在室温下孵育20分钟。
6. 清除所有孔中的酶结合物。用300微升1X洗涤缓冲液洗孔三次。用吸收纸或纸巾拍干。
7. 向每个孔中分发100微升TMB底物，并在室温下孵育10分钟。
8. 加入100微升终止溶液。
9. 在15分钟内使用ELISA读数器读取450纳米处的光密度（O.D.）。建议使用参考滤光片600-650纳米的双波长。
肺炎支原体IgG ELISA文献参考：
1. Quinn TC. Diagnosis of atypical pneumonias: Legionella, Chlamydia, and Mycoplasma infections. Ann Intern Med1996;124:591-4.
2. Cimolai N, Cheong ACH. An assessment of a new diagnostic indirect enzyme immunoassay for the detection ofanti-Mycoplasma pneumoniae IgM. Am J Clin Pathol 1996;105:205-9.
3. 5. Shearman MJ, Cubie HA, Inglis JM. Mycoplasma pneumoniae infection: early diagnosis by detection of specificIgM by immunofluorescence. Br J Biomed Sci 1993;50:305-8.
4. Lee SH, Charoenying S, Brennan T, Markowski M, Mayo DR. Comparative studies of three serologic methods forthe measurement of Mycoplasma pneumoniae antibodies. Am J Clin Pathol 1989;92:342-7.
5. Kenny GE, Kaiser GG, Cooney MK, Foy HM. Diagnosis of Mycoplasma pneumoniae pneumonia: sensitivities andspecificities of serology with lipid antigen and isolation of the organism on soy peptone medium for identification ofinfections. J Clin Microbiol 1990;28:2087- 93.
6. Aubert G, Pozzetto B, Gaudin OG, Hafid J, Mbida AD, Ros A. Evaluation of five commercial tests: complementfixation, microparticle agglutination, indirect immunofluorescence, enzyme-linked immunosorbent assay and latexagglutination, in comparison to immunoblotting for Mycoplasma pneumoniae serology. Ann Biol Clin 1992;50:593
7. Kok T, Mickan LD, Burrell CJ. Routine diagnosis of seven respiratory viruses and Mycoplasma pneumoniae byenzyme immunoassay. J Virol Methods 1994;50:87-100.
8. Kleemola M, Räty R, Karjalainen J, Schuy W, Gerstenecker B, Jacobs E. Evaluation of an antigen-captureenzyme immunoassay for rapid diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection. Eur J Clin Microbiol Infect Dis1993;12:872-5.
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Calbiotech-17-羟基孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒结果计算
Calbiotech-17-羟基孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒旨在定量测定血清中的17-OHP。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷Calbiotech-17-羟基孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒（PG338S）检测原理：
Calbiotech 17α-OH孕酮（17-OHP）是基于测试样本中的17-OHP与17-OHP-HRP之间的竞争性结合原理，以获得恒定量的兔抗17-OHP抗体。在试验中，山羊抗兔IgG包被的孔与25µl 17-OHP标准品、50µl 17-OH HRP偶联物和50µl兔抗17-OHP一起孵育。HRP标记的17-OHP在标准品和样品中与17-OHP竞争特定抗17-OHP抗体的固定数量的结合位点。因此，随着样本中17-OHP浓度的增加，与孔免疫结合的17-OHP过氧化物酶偶联物的量逐渐减少。然后通过洗涤步骤去除未结合的17-OHP。TMB基板被添加，导致蓝色的发展。加入终止溶液停止显色，在450nm处分光光度法测量吸光度。制备了一条标准曲线，将颜色强度与17-OHP的浓度相关联
Calbiotech-17-羟基孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒测定程序：
1. 将所需数量的包被条放入支架中。
2. 向相应的孔中分发25微升17-OHP标准品、对照品和样本。
3. 向所有孔中加入50微升工作稀释N-17-OHP酶结合物。
4. 向所有孔中加入50微升N-17-OHP抗体试剂。
5. 轻轻摇动微孔板20-30秒以混合。
6. 在室温下孵育60分钟。
7. 迅速摇动以清除孔中的内容物。用1X洗涤缓冲液洗孔3次。在吸水纸上猛击孔以去除残留的水滴。
8. 向每个孔中加入100微升TMB底物。
9. 覆盖微孔板，并在室温下孵育15分钟。
10. 向每个孔中加入50微升终止溶液，并轻轻混合，直到每个孔中获得均匀的颜色。
11. 在加入终止溶液后的15分钟内，读取每个孔的吸光度，波长为450nm。
结果计算：
标准曲线的构建如下：
1. 计算每组标准品和患者样本的平均吸光度值。
2. 为了构建标准曲线，将每个17-OHP标准品的平均吸光度（垂直轴）与其浓度（ng/ml，水平轴）作图。
3. 通过已绘制的点绘制最佳拟合曲线。
4. 从曲线上读取每个未知样本的吸光度，以确定17-OHP的相应浓度。
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Calbiotech-小鼠/大鼠三碘甲状腺原氨酸（T3）ELISA试剂盒方案
Calbiotech-小鼠/大鼠三碘甲状腺原氨酸（T3）ELISA试剂盒用于定量测量小鼠/大白鼠血清或血浆中的三碘甲状腺本氨酸（T4）。
艾美捷Calbiotech-小鼠/大鼠三碘甲状腺原氨酸（T3）ELISA试剂盒：
目录编号 T3043T-100
产品类型 酶联免疫吸附试验（ELISA）
数量 96次检测（12×8易碎条状微孔板）
标准范围 0.25-7.5 ng/ml
分析灵敏度 0.25 ng/ml
样本体积 每孔25微升
物种 小鼠或大鼠
应用 Calbiotech小鼠/大鼠三碘甲状腺原氨酸（T3）ELISA试剂盒旨在定量测定小鼠/大鼠血清或血浆中的三碘甲状腺原氨酸（T3）。
原理：Calbiotech小鼠/大鼠T3试剂是一种固相竞争ELISA。样本、工作T3酶结合物，稀释在测定缓冲液中，被加入到涂有抗T3多克隆抗体的孔中。患者血清中的T3与T3酶结合物竞争结合位点。未结合的T3和T3酶结合物被洗涤缓冲液洗去。加入底物后，颜色的强度与样本中T3的浓度成反比。通过颜色强度与T3浓度的关系，准备了标准曲线。
储存和稳定性 产品应存放在2-8°C。产品自生产日期起稳定24个月。
注意事项 仅供研究使用。不用于诊断程序。
不提供的材料：
1. 蒸馏水或去离子水
2. 精密移液管
3. 一次性移液管尖
4. 能够读取450nm吸光度的ELISA读数器
5. 吸光度纸或纸巾
6. 绘图纸
储存和稳定性：
1. 将试剂盒存放在2 – 8°C的条件下。
2. 保持微孔板密封在装有干燥剂的干燥袋中。
3. 试剂在试剂盒有效期内是稳定的。
4. 不要将测试试剂暴露于热源、阳光或强光下。
结果计算：
标准曲线的构建如下：
1. 检查每个标准品瓶上的T3标准值。这个值可能会因批号不同而有所变化。确保你检查每个试剂盒上的值。
2. 为了构建标准曲线，在线性绘图纸上，将T3标准品的吸光度（垂直轴）与T3标准品浓度（水平轴）作图。通过这些点绘制最佳曲线。
3. 从曲线上读取对照品和每个未知样本的吸光度。记录每个对照品或未知样本的值。
文献参考：
1. Agharanya JC. Clinical usefulness of ELISA technique in the assessment of thyroid function. West Afr J Med 1990;9(4):258-63.
2. Baumgartner-Parzer SM; Wagner L; Reining G; Sexl V; Nowotny P; Muller M; Brunner M; Waldh¨ausl W. Increase by tri-iodothyronine of endothelin-1, fibronectin and von Willebrand factor in cultured endothelial cells. J Endocrinol 1997;154(2):231-9.
3. Maes M; Mommen K; Hendrickx D; Peeters D; D'Hondt P; Ranjan R; De Meyer F; Scharp´e S Components of biological variation, including seasonality, in blood concentrations of TSH, TT3, FT4, PRL, cortisol and testosterone in healthy volunteers. Clin Endocrinol (Oxf) 1997; 46(5):587-98.
4. Santini F; Chiovato L; Bartalena L; Lapi P; Palla R; Panichi V; Velluzzi F; Grasso L; Chopra IJ; Martino E; Pinchera A Study of serum 3,5,3'-triiodothyronine sulfate concentration in patients with systemic non-thyroidal illness. Eur J Endocrinol 1996;134(1):45-9
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Calbiotech-睾酮ELISA试剂盒，测定程序和样本的收集处理
睾酮（17b-羟基雄-4-烯-3-酮）是一种C19类固醇，在C-4和C-5之间有一个不饱和键，C-3上有一个酮基，C-17上的\61538]位有一个羟基。这种类固醇激素的分子量为288.4。睾酮是分泌到血液中的最重要的雄激素。在男性中，睾酮主要由睾丸的间质细胞分泌；在雌性中，约50%的循环睾酮来自雄烯二酮的外周转化，约25%来自卵巢，约25%来源于肾上腺。睾酮负责男性第二性征的发展，其测量有助于评估性腺功能减退状态。在女性中，高水平的睾酮通常出现在多毛症和男性化、多囊卵巢、卵巢肿瘤、肾上腺肿瘤和肾上腺增生中。在男性中，高水平的睾丸激素与垂体下叶单位疾病、睾丸肿瘤、先天性肾上腺皮质增生和前列腺癌症有关。以下疾病的患者睾酮水平低：垂体功能减退症、Klinefelter综合征、睾丸女性化、兰花切除术和隐睾症、酶缺陷和一些自身免疫性疾病。睾酮EIA试剂盒专为测量人血清中的总睾酮而设计。
Calbiotech-睾酮ELISA试剂盒用于定量测量人体血清或血浆中的睾酮。
艾美捷Calbiotech-睾酮ELISA试剂盒（TE373S）检测原理：
睾丸激素检测试剂盒是一种固相竞争性ELISA。将样品、工作睾酮-HRP偶联物和抗睾酮生物素溶液加入到涂有链霉抗生物素蛋白的孔中。患者血清中的睾酮与睾酮酶（HRP）结合物竞争结合位点。未结合的睾酮和睾酮酶结合物被洗涤缓冲液洗掉。添加底物后，颜色的强度与样品中睾酮的浓度成反比。绘制了一条标准曲线，将颜色强度与睾酮浓度联系起来。
样本收集与处理：
1. 收集血液样本后立即分离出血清。
2. 通常，样本可以在冰箱中（2-8°C）冷藏存储5天。如果存储时间超过5天，则应冷冻在（-20°C）下，最长可存储一个月。
3. 避免多次冻融循环。
4. 测定前，应将冷冻血清完全解冻并混合均匀。
5. 不要使用明显脂血的样本。
6. 请注意：含有亚硝酸盐的样本不应在测定中使用。
试剂准备：
1. 20X酶结合物：用测定稀释液以1:20的比例制备1X工作溶液（例如，向1.9ml的测定稀释液中加入0.1ml的睾酮酶结合物浓缩液）。
2. 通过向瓶中加入内容物（25ml，20X）和475ml的蒸馏水或去离子水，制备1X洗涤缓冲液。存放在室温（20-25°C）。
3. 使用前，所有试剂应放置至室温（20-25°C）。
测定程序：
在进行测定之前，将所有试剂放置至室温（20-25°C）。
1. 向指定孔中移液50微升的标准品、对照品或样本。
2. 向每个孔中加入100微升的工作睾酮-酶结合物试剂（参见试剂准备部分）。
3. 向每个孔中加入50微升的生物素试剂。轻轻旋转微孔板20-30秒以混合试剂。
4. 覆盖板子，并在室温下孵育60分钟。
5. 清除所有孔中的液体。用300微升的1X洗涤缓冲液洗孔三次（参见试剂准备部分）。用吸水纸拍干。
6. 向每个孔中加入100微升的TMB底物试剂。
7. 覆盖板子，在室温下孵育三十（30）分钟。
8. 向每个孔中加入50微升的终止溶液，并轻轻混合15-20秒。
文献参考：
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